Endast för in vitro användning!
Enhetsdefinition: En Kunitz-enhet definieras som den mängd enzym som krävs för att åstadkomma en ökning av absorbansen vid 260 nm med 0,001/min/ml vid 25 °C av högpolymeriserat DNA.
Skeppning: levereras på blå is
Lagringsförhållanden: förvaras vid -20 °C
undvik frys-/upptiningscykler
Hållbarhet: 12 månader
Form: flytande (Levereras i 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 och 50 % glycerol)
Koncentration: 2 enheter/μl
Användningsområden:
DNas I tillsätts vanligen till celllysreagenser för att avlägsna den viskositet som orsakas av DNA-innehållet i lysat av bakterieceller eller för att avlägsna DNA-mallar från RNA som producerats genom in vitro-transkription.
DNas I avlägsnar oönskat DNA från celllysat för att förbättra proteinextraktionseffektiviteten.
Beskrivning:
DNas I (RNase free), Deoxyribonukleas I är en enda glykosylerad polypeptid som bryter ned enkel- och dubbelsträngat DNA. Enzymet fungerar genom att klyva DNA till 5′ fosfodinukleotid och små oligonukleotidfragment.
DNas I används för tillämpningar som kräver digestion av DNA där det är avgörande att undvika skador på RNA.
Reaktionsförutsättningar
1x DNas I-reaktionsbuffert
Inkubation vid 37 °C
10x DNas I-reaktionsbuffert:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25 °C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inaktivering:
DNas I inaktiveras genom uppvärmning till 65 °C i 10 minuter. Höga nivåer av monovalenta joner som Na+ och K+ (dvs. 100 mM) minskar DNas I-aktiviteten.
Aktivitet:
> 2500 enheter/mg protein
DNas I-aktivitet mäts också i ”Degradation Assay units”, definierat som den mängd enzym som krävs för att fullständigt bryta ned 1 μg plasmid-DNA på 10 minuter vid 37 °C i 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 och 13 mM CaCl2.
1 ”Degradation Assay unit” motsvarar 0,3 ”Kunitz units”.
Produktcitat:
Klicka på den svarta pilen till höger för att utöka citatlistan. Klicka på publikationens titel för den fullständiga texten.
Utvalda referenser:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. In: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+- dependent activity of human DNase I and its hyperactive variants. Protein Sci. 8:1780.