Csak in vitro használatra!
Egység meghatározása: Egy Kunitz-egység az az enzimmennyiség, amely a 260 nm-es abszorbancia 0,001/perc/ml-es növekedéséhez szükséges 25°C-on, erősen polimerizált DNS esetében.
Szállítás: kék jégen szállítva
Tárolási körülmények: -20 °C-on tároljuk
kerüljük a fagyasztási/olvasztási ciklusokat
Tartózkodási idő: 12 hónap
Formája: folyadék (10 mM Tris-HCl pH 7-ben szállítva.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 és 50 % glicerin)
Koncentráció: 2 egység/μl
Alkalmazások:
ADNáz I-t általában sejtlízisreagensekhez adják a bakteriális sejtlizátumokban lévő DNS-tartalom okozta viszkozitás eltávolítására, vagy az in vitro átírással előállított RNS-ből DNS-templátok eltávolítására.
ADNáz I eltávolítja a nem kívánt DNS-t a sejtlizátumokból, hogy javítsa a fehérjeextrakció hatékonyságát.
leírás:
ADNáz I (RNázmentes), dezoxiribonukleáz I egy egyszeres, glikozilált polipeptid, amely lebontja az egy- és kétszálú DNS-eket. Az enzim úgy működik, hogy a DNS-t 5′ foszfodinukleotid és kis oligonukleotid fragmentumokra hasítja.
ADNáz I olyan alkalmazásokban alkalmazható, amelyekben a DNS emésztését igénylik, és amelyekben döntő fontosságú az RNS károsodásának elkerülése.
Reakciós feltételek
1x DNáz I reakciópuffer
Inkubálás 37°C-on
10x DNáz I reakciópuffer:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25°C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inaktiválás:
ADNáz I inaktiválása 65°C-ra történő 10 perces melegítéssel történik. Az egyértékű ionok, mint a Na+ és K+ (pl. 100 mM) magas szintje csökkenti a DNáz I aktivitását.
Aktivitás:
> 2500 egység/mg fehérje
A DNáz I aktivitását “Degradációs Assay egységben” is mérik, amelyet úgy határoznak meg, hogy az enzim mennyisége szükséges 1 μg plazmid DNS teljes lebontásához 10 perc alatt 37 °C-on, 10 mM Tris-HCl pH 7-ben.5, 50 mM MgCl2 és 13 mM CaCl2.
1 “Degradation Assay unit” 0,3 “Kunitz unit”-nak felel meg.
Termék idézetek:
Az idézetlista kibontásához kattintson a jobb oldali fekete nyílra. A teljes szöveg megtekintéséhez kattintson a kiadvány címére.
Kiválasztott hivatkozások:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. In: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., szerk. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+-függő aktivitása a humán DNáz I-nek és hiperaktív változatainak. Protein Sci. 8:1780.