Vain in vitro -käyttöön!
Yksikön määritelmä: Yksi Kunitz-yksikkö määritellään entsyymimääräksi, joka tarvitaan voimakkaasti polymerisoituneen DNA:n absorbanssin lisääntymiseen 260 nm:ssä 0,001/min/ml 25 °C:ssa.
Lähetys: Toimitetaan sinisellä jäällä
Varastointiolosuhteet: Säilytetään -20 °C:ssa
Vältetään jäädytys/sulatussyklejä
Säilyvyysaika: 12 kk
Muoto: Nestemäinen (Toimitetaan 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 ja 50 % glyserolia)
Konsentraatio: 2 yksikköä/μl
Käyttökohteet:
DNaasi I:tä lisätään yleisesti solujen lyysireagensseihin poistamaan DNA-pitoisuuden aiheuttamaa viskositeettia bakteerisolujen solulysaateissa tai poistamaan DNA-templaattien DNA:n poistamiseksi in vitro transkription avulla tuotetusta RNA:sta.
DNaasi I poistaa ei-toivotun DNA:n solulysaateista proteiinien uuton tehokkuuden parantamiseksi.
Kuvaus:
DNaasi I (RNaasi vapaa), deoksiribonukleaasi I on yksittäinen, glykosyloitu polypeptidi, joka hajottaa yksi- ja kaksijuosteista DNA:ta. Entsyymi toimii pilkkomalla DNA:ta 5′-fosfodinukleotidiksi ja pieniksi oligonukleotidifragmenteiksi.
DNaasi I:tä käytetään sovelluksissa, jotka vaativat DNA:n pilkkomista ja joissa on ratkaisevaa välttää RNA:n vaurioituminen.
Reaktio-olosuhteet
1x DNaasi I:n reaktiopuskuri
Inkubaatio 37 °C:ssa
10x DNaasi I:n reaktiopuskuri:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25 °C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inaktivointi:
DNaasi I:stä inaktivoidaan kuumentamalla 65 °C:n lämpötilaa 10 minuuttia. Suuret määrät monovalenttisia ioneja, kuten Na+ ja K+ (esim. 100 mM), vähentävät DNaasi I:n aktiivisuutta.
Aktiivisuus:
> 2500 yksikköä/mg proteiinia
DNaasi I:n aktiivisuus mitataan myös ”Degradation Assay -yksikköinä”, jotka määritellään entsyymin määräksi, joka tarvitaan 1 μg plasmidi-DNA:n täydelliseen hajottamiseen 10 minuutissa 37 °C:ssa 10 mM:ssa 10 mM:n Tris-HCl:n pH:ssa 7.5, 50 mM MgCl2 ja 13 mM CaCl2.
1 ”Degradation Assay unit” vastaa 0,3 ”Kunitz units”.
Tuotesitaatit:
Klikkaa oikealla olevaa mustaa nuolta laajentaaksesi listausta. Klikkaa julkaisun otsikkoa saadaksesi koko tekstin.
Valitut viitteet:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. In: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ihmisen DNaasi I:n ja sen hyperaktiivisten varianttien Ca2+-riippuvainen aktiivisuus. Protein Sci. 8:1780.