Wyłącznie do użytku in vitro!
Definicja jednostki: Jedna jednostka Kunitza jest zdefiniowana jako ilość enzymu wymagana do wytworzenia wzrostu absorbancji 260 nm o 0,001/min/ml w 25°C wysoce spolimeryzowanego DNA.
Wysyłka: dostarczany w niebieskim lodzie
Warunki przechowywania: przechowywać w temperaturze -20 °C
unikać cykli zamrażania/rozmrażania
Przechowywanie: 12 miesięcy
Postać: płynna (Dostarczana w 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 i 50 % glicerolu)
Stężenie: 2 jednostki/μl
Zastosowanie:
DNaza I jest powszechnie dodawana do odczynników do lizy komórek w celu usunięcia lepkości spowodowanej zawartością DNA w lizatach komórek bakteryjnych lub w celu usunięcia szablonów DNA z RNA wytworzonego w procesie transkrypcji in vitro.
DNaza I usuwa niepożądane DNA z lizatów komórkowych w celu poprawy wydajności ekstrakcji białek.
Opis:
DNaza I (wolna od RNazy), Deoksyrybonukleaza I jest pojedynczym, glikozylowanym polipeptydem, który degraduje jedno- i dwuniciowe DNA. Enzym działa poprzez rozszczepianie DNA na 5′ fragmenty fosfodinukleotydowe i małe fragmenty oligonukleotydowe.
DNaza I jest używana do zastosowań wymagających trawienia DNA, w których kluczowe jest uniknięcie uszkodzenia RNA.
Warunki reakcji
1x DNaza I Bufor reakcyjny
Inkubacja w 37°C
10x DNaza I Bufor reakcyjny:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25°C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inaktywacja:
DNaza I jest inaktywowana przez ogrzewanie do 65°C przez 10 minut. Wysoki poziom jonów jednowartościowych, takich jak Na+ i K+ (tj. 100 mM) zmniejszy aktywność DNazy I.
Aktywność:
> 2500 jednostek/mg białka
Aktywność DNazy I jest również mierzona w „jednostkach Degradation Assay” zdefiniowanych jako ilość enzymu wymagana do całkowitej degradacji 1 μg plazmidowego DNA w ciągu 10 minut w temperaturze 37 °C w 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 i 13 mM CaCl2.
1 „jednostka Degradation Assay” jest równoważna 0,3 „jednostkom Kunitza”.
Cytowania produktu:
Proszę kliknąć czarną strzałkę po prawej stronie, aby rozwinąć listę cytowań. Kliknij tytuł publikacji, aby uzyskać pełny tekst.
Wybrane referencje:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. In: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+- dependent activity of human DNase I and its hyperactive variants. Protein Sci. 8:1780.
.