Den första polkroppen kan användas för att producera normal avkomma hos möss1

Abstract

Syftet med den här studien var att fastställa om kromosomer i den första polkroppen kan delta i normal embryonal utveckling. Hos musen degenererar majoriteten av de första polkropparna strax efter ägglossningen, men några få förblir livskraftiga i 10 timmar eller mer. När innehållet i en levande polarkropp injicerades i en enukleerad mogen äggcell och undersöktes 2 timmar senare, var polarkroppens kromosomer arrangerade på en metafasplatta så som man ser dem före den sekundära meiotiska delningen. Sådana oocyter befruktades normalt genom injektion av spermier. När 2-cellsembryon överfördes till fosterhonor utvecklades 30-57 % till fertila avkommor. Detta resultat stöder en långvarig uppfattning att kromosomer som kastas ut i den första polkroppen har samma genetiska potential som de som finns kvar i oocyten efter den första meiotiska delningen. Eftersom kromosomerna i den andra polkroppen är kända för att ha full potential att delta i normal embryonal utveckling, är det teoretiskt möjligt att reproducera fyra avkommor genom att använda kromosomer i en oocyt.

Introduktion

Däggdjurens primära oocyt avger den första polkroppen före ägglossningen. Den andra polkroppen stöts ut från oocyten som en följd av oocytens aktivering som utlöses av den befruktade spermatozoiden. Normalt degenererar kromosomerna i både den första och den andra polkroppen utan att bidra till embryonalutvecklingen. Spekulationer om att polkropparnas kromosomer har samma genetiska potential som deras systerkromosomer som finns kvar i oocyten bevisades experimentellt av Wakayama et al. och Feng och Hall , som fick levande avkommor av mus genom att fusionera de andra polkropparna med befruktade ägg från vilka honans pronuklei hade avlägsnats. Vi rapporterar här att kromosomer i den första polkroppen också kan delta i normal embryonal utveckling om de tillåts fullfölja den andra meiotiska divisionen i en enukleerad oocyt och sedan tillåts blanda sig med kromosomer från en injicerad spermatozoid.

Material och metoder

Djur

B6D2F1-honmöss (svarta), 8-10 veckor gamla, användes som donatorer av oocyter och polarkroppar. C3H-honor (agouti, 10 veckor gamla) och CD1-honor (albino, 10-15 veckor gamla) användes också som donatorer av polkroppar. Spermatozoer samlades in från caudae epidididymider från B6D2F1-hannar, 10 veckor gamla. Fostermödrarna var CD1-honor. De djur som användes i denna undersökning hölls i enlighet med riktlinjerna från Laboratory Animal Service vid University of Hawaii och de riktlinjer som utarbetats av Committee on Care and Use of Laboratory Animals of the Institute of Laboratory Resources National Research Council (DHEW-publikation nr 80-23, reviderad 1985). Protokollet för vår djurhantering och våra behandlingar granskades och godkändes av Animal Care and Use Committee vid University of Hawaii.

Media

Oocyter och befruktade ägg odlades i ett bikarbonatbuffratbuffrat CZB-medium vid 37,5 °C under 5 % CO2 i luft. Alla oocytmanipulationer utfördes i Hepes-buffrat CZB (Hepes-CZB) vid rumstemperatur (23-25°C) i luft. pH i båda medierna var ungefär 7,4.

Mikromanipulation

Oocythållnings- och injektionspipetter preparerades enligt Hogan et al. med undantag för att spetsen på injektionspipetten lämnades slät efter att den brutits. Pipettens innerdiameter vid spetsen var cirka 10 μm för oocytens enucleation och 7-8 μm för sugning och injektion av den första polkroppen. Injektionspipetten var kopplad till en piezoelektrisk pipettdrivningsenhet (Prima Meat Packers, Tsuchiura, Japan). Borrning av zona pellucida och injektion av polarkropp (eller en spermatozoid) i oocyter utfördes enligt tidigare beskrivning .

Förberedelse av mottagarokyter

B6D2F1-honor superovulerades med 48 timmars mellanrum genom på varandra följande injektioner av eCG (5 IE) och hCG (5 IE). Ungefär 14 timmar efter hCG-injektionen släpptes oocyt-kumulus-komplex från ovidukterna till Hepes-CZB. Cumuluscellerna skingrades genom 5 minuters behandling med 0,1 % bovint testikelhyaluronidas (300 USP-enheter/mg; ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, CA) i Hepes-CZB. Cumulusfria oocyter förvarades i CZB vid 37,5 °C under 5 % CO2 i luft i mindre än 1 timme före ytterligare behandlingar.

Kärnbildning av mottagande oocyter

Kärnbildning av mogna oocyter utfördes i Hepes-CZB som innehöll 5 μg/ml cytokalasin B . Oocyterna hölls i detta medium i cirka 10 minuter (25 °C) före enukleation. En oocyt, som hölls med en pipett, roterades tills en liten, genomskinlig ooplasmatisk fläck upptäcktes – platsen för kromosomerna i metafas II. Efter att zona pellucida borrats med enukleationspipetten (ca 10 μm innerdiameter) genom att applicera några piezoimpulser , fördes spetsen fram tills den nådde den genomskinliga fläcken i ooplasman. Den genomskinliga ooplasman (med kromosomer i metafas II) sögs in i pipetten utan att plasmamembranet bröts och drogs försiktigt bort från oocyten tills en utsträckt cytoplasmatisk bro klipptes bort. Enligt bedömning genom fixering och färgning av oocyterna eller färgning med Hoechst 33342 var effektiviteten av enucleation 100 %.

Identifiering av ”levande” och ”döda” första polarkroppar

Oviduktala oocyter samlades in från B6D2F1-, CD1- och C3H-honor mellan 13 och 27 h efter hCG-injektion. Polarkropparnas livskraft bedömdes med hjälp av ett kommersiellt tillgängligt testkit för celllivslighet (Live/dead FertiLight; Molecular Probes, Inc., Eugene, OR) som skiljer mellan plasmamembranintakta (”levande”) och skadade (”döda”) celler enligt fluorescensfärgningsmönstret under ett UV-mikroskop. Kromosomerna i levande polkroppar med intakta plasmamembran fluorescerade grönt medan kromosomerna i döda polkroppar fluorescerade starkt orangerött. Resultaten av våra primära observationer visade att alla levande polkroppar hade ett skarpt definierat, slätt membran och klar cytoplasma (fig. 1A). Deras kromosomer var utspridda, utsträckta eller vidhäftande till varandra. Några döda polkroppar hade ett glatt plasmamembran, men hos de flesta var membranet grovt eller saknades. Det mest lätt igenkännliga kännetecknet på den döda polarkroppen var en mycket granulerad cytoplasma, oavsett plasmamembranens och kromosomernas tillstånd (Fig. 1B).

Fig. 1

Livna (A) och döda (B) polarkroppar (pilar) (pilar) sedda med interferenskontrastoptik. A′, B′) Samma som ovan, men sett med fas-kontrastoptik. Levande polkroppar med intakta plasmamembran har relativt klar cytoplasma, medan döda polkroppar, med trasiga eller saknade plasmamembran, har granulerad cytoplasma.

Fig. 1

Livande (A) och döda (B) polkroppar (pilar) sedda med interferens-kontrastoptik. A′, B′) Samma som ovan, men sett med fas-kontrastoptik. Levande polkroppar med intakta plasmamembran har relativt klar cytoplasma, medan döda polkroppar, med trasiga eller saknade plasmamembran, har granulerad cytoplasma.

Överföring av de första polkroppskromosomerna till enukleerade oocyter och efterföljande spermainjektion

Tekniken för överföring och injektion liknade den som användes för injektion av spermatidkärnor i oocyter . En oocyt med en levande första polkropp valdes ut och dess zona pellucida borrades med en piezo-driven injektionspipett. Polkroppens plasmamembran bröts genom att den sögs in i pipetten. Hela innehållet i den trasiga polkroppen injicerades omedelbart i en enukleerad oocyt. I en separat försöksserie injicerades hela innehållet i en död polkropp. Oocyter som injicerats med polkroppar inkuberades i CZB i 2 timmar vid 37,5 °C under 5 % CO2 i luft innan en spermatozoid injicerades en andra gång. Omedelbart före injektionen av spermier avkapiterades enskilda spermier genom att några piezoimpulser applicerades på halsregionen. Ett enda spermiehuvud injicerades i varje oocyt enligt beskrivningen av Kuretake et al. förutom att operationen utfördes vid rumstemperatur (23-25°C) i stället för vid 17-18°C.

Oocytundersökning och embryoöverföring

Vissa oocyter undersöktes mellan 10 min och 2 h efter injektionen för att fastställa hur polarkroppskromosomerna betedde sig i oocytens cytoplasma. Andra oocyter undersöktes 5-6 timmar senare för att undersöka förekomsten av normal befruktning. De som hade en andra polkropp och två pronukleier ansågs vara normalt befruktade och odlades i CZB över natten. Normala embryon i 2-cellsstadiet överfördes sedan till äggledare hos mottagande honor som hade parats med vasektomerade hanar under föregående natt.

I en serie experiment användes C3H-möss som polkroppsdonatorer. Alla mottagande oocyter och spermatozoer kom från B6D2F1-möss. C3H-möss är homologa i fyra hårfärgsgener, A (agouti), B (brown), C (albino) och D (dilute), dvs. A/A,B/B,C/C,D/D. B6D2F1-möss är a/a,B/b,C/C,D/d. Om enucleation av B6D2F1-ocytterna hade misslyckats och de hade befruktats av B6D2F1-spermatozoer skulle pälsen hos alla avkommor ha varit svart (a/a,B/+,C/C,D/+), brun (a/a,b/b,C/C,D/+) och grå (a/a,+/+,C/C,d/d), men inte agouti eller vit i färgen. Om endast C3H-polkroppskromosomer och B6D2F1-spermankromosomer hade deltagit i utvecklingen av enukleerade oocyter skulle alla avkommor förväntas ha agouti-päls (A/a,B/+,C/C,D/+).

På den 19:e dagen postcoitum avlivades mottagarhonor utan uppenbara tecken på dräktighet och deras livmoder undersöktes med avseende på förekomst av foster. Kejsarsnitt var nödvändigt eftersom en mottagarhona som bar ≤ 2 foster inte kunde föda själv. Eventuella levande foster uppfostrades av diande CD1 (albino) fosterhonor. Andra honor fick föda och uppfostra sin avkomma.

Resultat

Figur 2 visar andelen livskraftiga första polkroppar vid olika tidpunkter efter hCG-injektion. Eftersom ägglossningen hos musen sker mellan 10 och 14 timmar efter hCG-injektionen verkar de flesta första polkropparna ha degenererat före eller strax efter ägglossningen. Trots detta var 5-15 % av polkropparna livskraftiga i många timmar efter ovulationen.

Fig. 2

Procentandel levande polkroppar vid olika tidpunkter efter ovulationen hos en hybridstam (B6D2F1), en främmande stam (CD-1) och en inavelsstam (C3H) av musen.

Fig. 2

Procentandel levande polkroppar vid olika tidpunkter efter ägglossning i en hybridstam (B6D2F1), en främmande stam (CD-1) och en inavelsstam (C3H) av musen.

När en levande första polkropp injicerades i en enkärnig oocyt aggregerades polkroppskromosomerna successivt (fig. 3, A och B). Två timmar efter injektionen var kromosomerna ordnade på metafasplattan i den andra meiotiska divisionen (fig. 3C). Kromosomer i döda polkroppar omvandlades aldrig till typiska metafasekromosomer (fig. 3D).

Fig. 3

Transformation av de första polkroppskromosomerna till metafasekromosomer i metafas II-kromosomer i enukleerade oocyter. A) Kort efter injektion i oocyten; kromosomerna är utspridda. B, C) Kromosomerna aggregeras gradvis och arrangeras på metafasplattan 2 timmar efter injektionen. D) Kromosomer i den döda polkroppen, som injicerats i oocyten, kan inte organiseras för att bilda kromosomspindelkomplex.

Fig. 3

Transformation av de första polkroppskromosomerna till metafas II-kromosomer i enukleerade oocyter. A) Kort efter injektion i oocyten; kromosomerna är utspridda. B, C) Kromosomerna aggregeras gradvis och arrangeras på metafasplattan 2 timmar efter injektionen. D) Kromosomer i den döda polkroppen som injicerats i oocyten kan inte organiseras för att bilda kromosomspindelkomplex.

När totalt 171 enukleerade oocyter injicerades med levande första polkroppar överlevde ungefär hälften (tabell 1). Efter injektion av enstaka spermier (fig. 4A) befruktades majoriteten av oocyterna normalt (fig. 4B) oavsett polkropparnas postovulatoriska ålder (tabell 1). Överföring av 74 tvåcellsembryon till 11 fostermödrar resulterade i att 27 normala avkommor föddes (tabell 1). Av dessa föddes 3 genom kejsarsnitt av två honor. Övriga föddes på naturlig väg. Alla 27 avkommor uppfostrades och parning mellan dem genomfördes. Alla 15 honor blev dräktiga och fick kullar av normal storlek (8-12).

Tabell 1

Utveckling av enukleerade oocyter från mus som injicerats med de första polkroppskromosomerna (Pb1c) och spermatozoer.

B6D2F1 15 h 61 35 (57) 30

15 h

16 (64)

3 (30)

Källa för Pb1c . Tidpunkt efter hCG-injektion när Pb1c samlades in . Antal enukleerade oocyter . Antal embryon med två celler som överförts (antal fostermödrar) . Antal levande avkommor (%) .
Total . Överlevande efter Pb1c-injektion (%) . Normalt befruktade efter injektion av spermier .
28 (6) 16 (57)
20 h 85 41 (48) 39 36 (3) 18 (50)
C3H 25 10 10 (2)
B6D2F1 15 h 61 35 (57) 30

16 (57)

15 h 25 16 (64) 10 10 (2) 3 (30)

Källa till Pb1c . Tid efter hCG-injektion när Pb1c samlades in . Antal enukleerade oocyter . Antal embryon med två celler som överförts (antal fostermödrar) . Antal levande avkommor (%) .
Total . Överlevande efter Pb1c-injektion (%) . Normalt befruktade efter injektion av spermier .
28 (6)
20 h 85 41 (48) 39 36 (3) 18 (50)
C3H
Tabell 1

Utveckling av enukleerade oocyter från mus som injicerats med första polkroppskromosomer (Pb1c) och spermatozoer.

B6D2F1 15 h 61 35 (57) 30

15 h

16 (64)

3 (30)

Källa till Pb1c . Tid efter hCG-injektion när Pb1c samlades in . Antal enukleerade oocyter . Antal embryon med två celler som överförts (antal fostermödrar) . Antal levande avkommor (%) .
Total . Överlevande efter Pb1c-injektion (%) . Normalt befruktade efter injektion av spermier .
28 (6) 16 (57)
20 h 85 41 (48) 39 36 (3) 18 (50)
C3H 25 10 10 (2)
B6D2F1 15 h 61 35 (57) 30

18 (50)

C3H 15 h 25 16 (64)

Källa till Pb1c . Tid efter hCG-injektion när Pb1c samlades in . Antal enukleerade oocyter . Antal embryon med två celler som överförts (antal fostermödrar) . Antal levande avkommor (%) .
Total . Överlevande efter Pb1c-injektion (%) . Normalt befruktade efter injektion av spermier .
28 (6) 16 (57)
20 h 85 41 (48) 39 36 (3)
10 10 (2) 3 (30)

Fig. 4

Fertilisering av oocyten med de första polkroppskromosomerna i stället för sina egna kromosomer. A) Denna oocyt enukleerades och sedan överfördes första polkroppskromosomerna och injicerades sedan med ett spermiehuvud. Fotografiet togs cirka 10 minuter efter injektion av spermier; en pil visar ett spermiehuvud i oocyten; c visar kromosomer av första polkroppens ursprung. B) En oocyt (ägg) 5 timmar efter spermieinjektion, med två pronukleer och en (andra) polkropp (pil).

Fig. 4

Fertilisering av oocyt med de första polkroppskromosomerna i stället för sina egna kromosomer. A) Denna oocyt enukleerades och sedan överfördes första polkroppskromosomerna och injicerades sedan med ett spermiehuvud. Fotografiet togs cirka 10 minuter efter injektion av spermier; en pil visar ett spermiehuvud i oocyten; c visar kromosomer av första polkroppens ursprung. B) En oocyt (ägg) 5 timmar efter spermieinjektion, med två pronukleer och en (andra) polkropp (pil).

Diskussion

Dessa resultat visar att kromosomer inom den första polkroppen har samma genetiska och reproduktiva potential som de kromosomer som finns kvar i oocyten efter den första meiotiska delningen. Kromosomer inom döda polarkroppar organiserades inte efter injektion i oocyter. Kromosomer i levande polarkroppar var utspridda, utsträckta eller aggregerade. Vi vet inte om det finns ett orsakssamband mellan kromosomernas tillstånd inom polarkroppen och den embryonala utvecklingens framgång eller misslyckande efter injektion.

Under normala förhållanden degenererar den första polarkroppen hos musen ganska snabbt. Enligt Evsikov och Evsikov degenererar mer än hälften inom några timmar efter ägglossningen, och den stora majoriteten sönderfaller under de följande 12 timmarna. Hos människor däremot kvarstår många första polarkroppar i mer än 20 timmar efter ägglossningen . I allmänhet har dock den första polkroppen hos eutheriska däggdjur en kortare livslängd än den andra polkroppen. Även om degenerering av polkroppar (och även av obefruktade oocyter) sannolikt är en apoptotisk process , förstår man inte vilka faktorer som bestämmer de individuella och artmässiga skillnaderna i degenerationshastigheterna hos polkroppar (och obefruktade oocyter).

Som visats här kan levande kromosomer i den första polkroppen genomgå den andra meiosen efter överföring till mogna oocyter, oberoende av deras postovulatoriska ålder. Skadade polarkroppskromosomer, som visats av Rodman , kan tydligen inte göra det. Kromosomer inom levande polarkroppar som är avsedda att degenerera kan således räddas genom att överföras till ooplasma.

Oocytöverlevnaden efter injektion av polarkroppar var inte särskilt hög (se tabell 1), kanske på grund av injektionspipettens stora storlek. Överlevnaden av oocyter kan förmodligen ökas genom tekniska förbättringar. Dessutom har musens oocyt (ca 75 μm i diameter) en relativt stor polkropp (ca 10 μm i diameter). Den mikrokirurgiska operation som rapporterats här kommer förmodligen att bli lättare när polkropparna är mindre i förhållande till oocytens storlek, vilket är fallet hos djur (t.ex. nötkreatur) och människor.

Och även om det tekniskt sett är svårare att göra analyser av kromosomerna i blastomer på grund av polkropparnas mindre storlek har analyser av kromosomerna i polkropparna använts i stor utsträckning vid genetisk diagnostik av människor före graviditet och befruktning. Eftersom polkroppar är lättillgängliga skulle genetisk diagnostik med hjälp av polkroppar förbli värdefull om vi höll eventuella fallgropar i åtanke . För försöksdjur skulle genetisk diagnostik med hjälp av polkroppar vara användbar vid markörstyrt urval av honliga könsceller och identifiering av transgena oocyter, till exempel .

Då det nu är möjligt att använda både den första och den andra polkroppen för att producera fertila avkommor, kan den genetiska informationen i en oocyt överföras till fyra avkommor (fig. 5). Eftersom donatoroocyter enukleeras före överföringen av polarkroppskromosomer kommer alla avkommor inte att ha någon annan genetisk påverkan från oocytdonatorer än från moderns (oocytens) mitokondrier. Eftersom varje oocyt får en annan spermatozoid, innebär detta reproduktionssätt inte kloning. Fyra oocyter får olika moderliga och faderliga gener. I en extrem situation där endast ett fåtal honor av en art återstår kan användningen av polkroppar på detta sätt bidra till att öka den genetiska mångfalden hos avkomman, förutsatt att oocyter av närbesläktade arter är lätt tillgängliga.

Fig. 5

Detta diagram illustrerar framställningen av fyra avkommor med hjälp av kromosomerna från en enda oocyt. Den första polkroppen i oocyt A från djur 1 (färgad) överförs till oocyt C från djur 2 (albino), som har enukleerats. Här avser talet (2n, n) kromosomernas ploiditet snarare än centromerantalet i sig. Efter att de första polkroppskromosomerna (PB I) omvandlats till kromosomer i metafas II injiceras ett enda spermiehuvud. Denna oocyt aktiveras, bildar två pronukleer och den andra polkroppen (PB II) och utvecklas slutligen till avkomma C. Oocyt D först enukleeras och injiceras sedan med ett enda spermiehuvud. Efter att spermiehuvudet omvandlats till en pronukleus i den aktiverade oocyten injiceras en andra polkropp från oocyt C. Denna oocyt utvecklas till avkomma D. Avkomma A utvecklas från oocyt A från djur 1. Avkomma B produceras genom att den andra polkroppen från oocyt A överförs till oocyt B med enbart spermiernas pronukleus.

Fig. 5

Detta diagram illustrerar produktionen av fyra avkommor med hjälp av kromosomerna i en enda oocyt. Den första polkroppen i oocyt A från djur 1 (färgad) överförs till oocyt C från djur 2 (albino), som har enukleerats. Här avser talet (2n, n) kromosomernas ploiditet snarare än centromerantalet i sig. Efter att de första polkroppskromosomerna (PB I) omvandlats till kromosomer i metafas II injiceras ett enda spermiehuvud. Denna oocyt aktiveras, bildar två pronukleer och den andra polkroppen (PB II) och utvecklas slutligen till avkomma C. Oocyt D först enukleeras och injiceras sedan med ett enda spermiehuvud. Efter att spermiehuvudet omvandlats till en pronukleus i den aktiverade oocyten injiceras en andra polkropp från oocyt C. Denna oocyt utvecklas till avkomma D. Avkomma A utvecklas från oocyt A från djur 1. Avkomma B produceras genom att den andra polkroppen från oocyt A överförs till oocyt B med enbart spermiernas pronukleus.

Acknowledgments

Särskilt tack till Dr. J. Michael Bedford för att han granskade en tidig version av manuskriptet. Vi tackar Charlotte Oser för hennes hjälp med att förbereda manuskriptet.

Evsikov
AV

,

Evsikov
SV

.

En studie av de första och andra polkropparna i musens oogenes

.

Russ J Dev Biol
1995

;

26

:

196

200

.

Wakayama
T

,

Hayashi
Y

,

Ogura
A

.

Deltagande av den kvinnliga pronukleus som härrör från den andra polkroppen i den fullständiga embryonala utvecklingen hos möss

.

J Reprod Fertil
1997

;

110

:

263

266

.

Feng
JL

,

Hall
JL

.

Födelse av normala möss efter elektrofusion av den andra polkroppen med hanens pronukleus: en möjlig behandling av oocytfaktorinfertilitet

.

Am Soc Reprod Med Ann Meet
1997

; Abstract P-050.

Chatot
CL

,

Torres
I

,

Ziomek
CA

.

Utveckling av encelliga embryon från olika musfläckar i CZB-medium

.

Biol Reprod
1990

;

42

:

432

440

.

Kimura
Y

,

Yanagimachi
R

.

Intracytoplasmatisk spermainjektion hos mus

.

Biol Reprod
1995

;

52

:

709

720

.

Hogan
B

,

Costantini
F

,

Lacy
E

.

Manipulering av musembryot: Laborationshandbok. Avsnitt D

.

Cold Spring Harbor

:

Cold Spring Harbor Laboratory

;

1986

:

191

.

Kimura
Y

,

Yanagimachi
R

.

Mus oocyter som injicerats med testikulära spermatozoer eller runda spermatider kan utvecklas till normal avkomma

.

Development
1995

;

121

:

2397

2405

.

Kono
T

,

Ogawa
M

,

Nakahara
T

.

Thymocytöverföring till enukleerade oocyter hos mus

.

J Reprod Dev
1993

;

39

:

301

307

.

Yanagida
K

,

Yanagimachi
R

,

Perreault
SD

,

Kleinfeld
RG

.

Thermostabiliteten hos spermiernas kärnor bedöms genom mikroinjektion i hamsteroocyter

.

Biol Reprod
1991

;

44

:

440

447

.

Kuretake
S

,

Kimura
Y

,

Hoshi
K

,

Yanagimachi
R

.

Fertilisering och utveckling av musoocyter som injicerats med isolerade spermiehuvuden

.

Biol Reprod
1996

;

55

:

789

795

.

Edwards
RG

,

Gates
AH

.

Tidpunkt och stadier för mognadsdelningar, ägglossning, befruktning och första klyvning av ägg hos vuxna möss som behandlats med gonadotropiner

.

J Endocrinol
1959

;

18

:

292

304

.

Ortiz
ME

,

Lucero
P

,

Croxatto
HB

.

Postovulatoriskt åldrande av mänskliga ägg: II. Spontan delning av den första polkroppen

.

Gamete Res
1983

;

7

:

269

276

.

Takase
K

,

Ishikawa
M

,

Hoshiai
H

.

Apoptos i den degenererade processen hos obefruktade musägg

.

Tohoku J Exp Med
1995

;

175

:

69

76

.

Choi
T

,

Fukasawa
K

,

Zhou
R

,

Tessarollo
L

,

Borror
K

,

Resau
J

,

Woude
GFV

.

Mos/mitogenaktiverat proteinkinas (MAPK) reglerar storleken och degenerationen av den första polkroppen i mognande musoocyter

.

Proc Natl Acad Sci USA
1996

;

93

:

7032

7035

.

Rodman
TC

.

Kromosomer i den första polkroppen i däggdjursmeiosen

.

Exp Cell Res
1971

;

68

:

205

210

.

Egozcue
J

.

Polykroppsanalys: möjliga fallgropar vid prekonceptionsdiagnostik av enstaka gen- och kromosomstörningar

.

Hum Reprod
1994

;

9

:

1208

.

Verlinsky
Y

,

Ginsberg
N

,

Lifchez
A

,

Valle
J

,

Moise
J

,

Strom
CM

.

Analys av den första polkroppen: genetisk diagnostik före födseln

.

Hum Reprod
1990

;

5

:

826

829

.

Munne
S

,

Dailey
T

,

Sultan
KM

,

Cohen
J

.

Användning av de första polkropparna för preimplantationsdiagnostik av aneuploidi

.

Mol Hum Reprod
1995

;

10

:

1014

1020

.

Dyban
AP

,

De Sutter
P

,

Dozortsev
D

,

Verlinsky
Y

.

Visualisering av andra polkroppskromosomer i befruktade och artificiellt aktiverade musoocyter som behandlats med okadasyra

.

J Assist Reprod Genet
1992

;

9

:

572

579

.

Verlinsky
Y

,

Cieslak
J

,

Freidine
M

,

Ivakhnenko
V

,

Wolf
G

,

Kovalinskaya
L

,

White
M

,

Lifchez
A

,

Kaplan
B

,

Moise
J

,

Valle
J

,

Ginsburg
N

,

Storm
C

,

Kuliev
A

.

Polkroppsdiagnostik av vanliga aneuploider med FISH

.

J Assist Reprod Genet
1996

;

13

:

157

162

.

Angell
RR

.

Polkroppsanalys: möjliga fallgropar vid preimplantationsdiagnostik av kromosomala störningar på grundval av polkroppsanalys

.

Hum Reprod
1994

;

9

:

181

182

.

Wheeler
MB

,

Noble
JA

,

Jarrell
VL

.

Produktion av levande avkommor med förutspådda genotyper med hjälp av PCR-RFLP-analys av polkroppar från musoocyter

.

Mol Reprod Dev
1995

;

40

:

267

272

.

Författarnotiser

1

Stöds av NIH-anslag (HD-03402 och HD-34362). T.W. har mottagit ett postdoktoralt stipendium från Japanese Association of Promotion of Science.

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.