Solo per uso in vitro!
Definizione unità: Un’unità Kunitz è definita come la quantità di enzima necessaria per produrre un aumento dell’assorbanza di 260 nm di 0,001/min/ml a 25°C di DNA altamente polimerizzato.
Spedizione: spedito su ghiaccio blu
Condizioni di conservazione: conservare a -20 °C
evitare cicli di congelamento/scongelamento
Conservazione: 12 mesi
Forma: liquido (fornito in 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 e 50 % glicerolo)
Concentrazione: 2 unità/μl
Applicazioni:
La DNasi I viene comunemente aggiunta ai reagenti per la lisi cellulare per rimuovere la viscosità causata dal contenuto di DNA nei lisati di cellule batteriche o per rimuovere i template di DNA dall’RNA prodotto dalla trascrizione in vitro.
DNase I rimuove il DNA indesiderato dai lisati cellulari per migliorare l’efficienza dell’estrazione delle proteine.
Descrizione:
DNase I (RNase free), la desossiribonucleasi I è un singolo polipeptide glicosilato che degrada il DNA a singolo e doppio filamento. L’enzima funziona scindendo il DNA in 5′ fosfodinucleotide e piccoli frammenti oligonucleotidici.
DNase I è utilizzato per applicazioni che richiedono la digestione del DNA in cui è fondamentale evitare danni all’RNA.
Condizioni di reazione
1x Tampone di reazione DNase I
Incubazione a 37°C
10x Tampone di reazione DNase I:
100 mM Tris-HCl pH 7.6 (25°C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inattivazione:
DNase I viene inattivata mediante riscaldamento a 65 °C per 10 minuti. Elevati livelli di ioni monovalenti come Na+ e K+ (cioè 100 mM) diminuiranno l’attività della DNasi I.
Attività:
> 2500 unità/mg di proteina
L’attività della DNasi I viene anche misurata in “unità di degradazione” definite come la quantità di enzima necessaria per degradare completamente 1 μg di DNA plasmidico in 10 minuti a 37 °C in 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 e 13 mM CaCl2.
1 ‘Unità di test di degradazione’ è equivalente a 0,3 ‘unità Kunitz’.
Citazioni del prodotto:
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Riferimenti selezionati:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. In: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+- attività dipendente della DNasi I umana e le sue varianti iperattive. Protein Sci. 8:1780.