Alleen voor in vitro gebruik!
Eenheidsdefinitie: Eén Kunitz-eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die nodig is om een toename van de extinctie van 260 nm van 0,001/min/ml bij 25°C van sterk gepolymeriseerd DNA te veroorzaken.
Verzending: verzonden op blauw ijs
Opslagcondities: bewaren bij -20 °C
vermijd vries-dooi cycli
Opslaanbaarheid: 12 maanden
Vorm: vloeibaar (Geleverd in 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 en 50 % glycerol)
Concentratie: 2 eenheden/μl
Toepassingen:
DNase I wordt gewoonlijk toegevoegd aan cellysereagentia om de viscositeit te verwijderen die wordt veroorzaakt door het DNA-gehalte in bacteriële cellysaten of om DNA-sjablonen te verwijderen uit RNA dat is geproduceerd door in-vitrotranscriptie.
DNase I verwijdert ongewenst DNA uit cellysaten om de efficiëntie van de eiwitextractie te verbeteren.
Beschrijving:
DNase I (RNase vrij), Deoxyribonuclease I is een enkelvoudig, geglycosyleerd polypeptide dat enkel- en dubbelstrengs DNA afbreekt. Het enzym werkt door het splitsen van DNA in 5′ fosfodinucleotide en kleine oligonucleotide fragmenten.
DNase I wordt gebruikt voor toepassingen waarbij de ontsluiting van DNA vereist is en waarbij het van cruciaal belang is schade aan RNA te voorkomen.
Reactiecondities
1x DNase I Reactiebuffer
Incubatie bij 37°C
10x DNase I Reactiebuffer:
100 mM Tris-HCl pH 7.6 (25°C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inactivatie:
DNase I wordt geïnactiveerd door verhitting tot 65°C gedurende 10 minuten. Hoge concentraties monovalente ionen zoals Na+ en K+ (d.w.z. 100 mM) verminderen de DNase I-activiteit.
Activiteit:
> 2500 eenheden/mg eiwit
De DNase I-activiteit wordt ook gemeten in “Degradation Assay units”, gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die nodig is om 1 μg plasmide-DNA volledig af te breken in 10 minuten bij 37 °C in 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 en 13 mM CaCl2.
1 ‘Degradation Assay-eenheid’ komt overeen met 0,3 ‘Kunitz-eenheden’.
Product Citations:
Klik op de zwarte pijl aan de rechterkant om de citatielijst uit te breiden. Klik op de titel van de publicatie voor de volledige tekst.
Geselecteerde referenties:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. In: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+-afhankelijke activiteit van menselijk DNase I en zijn hyperactieve varianten. Protein Sci. 8:1780.