Pour utilisation in vitro uniquement!
Définition des unités : Une unité Kunitz est définie comme la quantité d’enzyme nécessaire pour produire une augmentation de l’absorbance de 260 nm de 0,001/min/ml à 25°C d’ADN hautement polymérisé.
Envoi : expédié sur glace bleue
Conditions de stockage : stocker à -20 °C
éviter les cycles de congélation/décongélation
Durée de conservation : 12 mois
Forme : liquide (Fourni dans 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 et 50 % de glycérol)
Concentration : 2 unités/μl
Applications :
La nase I est couramment ajoutée aux réactifs de lyse cellulaire pour éliminer la viscosité causée par la teneur en ADN des lysats cellulaires bactériens ou pour éliminer les matrices d’ADN des ARN produits par transcription in vitro.
La DNase I élimine l’ADN indésirable des lysats cellulaires pour améliorer l’efficacité de l’extraction des protéines.
Description:
La DNase I (sans RNase), la désoxyribonucléase I est un polypeptide unique et glycosylé qui dégrade l’ADN simple et double brin. L’enzyme agit en clivant l’ADN en 5′ phosphodinucléotide et en petits fragments oligonucléotidiques.
La DNase I est utilisée pour une application nécessitant la digestion de l’ADN dans laquelle il est crucial d’éviter d’endommager l’ARN.
Conditions de réaction
1x tampon de réaction de la DNase I
Incubation à 37°C
10x tampon de réaction de la DNase I:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25°C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inactivation:
La DNase I est inactivée par chauffage à 65 °C pendant 10 minutes. Des niveaux élevés d’ions monovalents tels que Na+ et K+ (c’est-à-dire 100 mM) diminueront l’activité de la DNase I.
Activité:
> 2500 unités/mg de protéine
L’activité de la DNase I est également mesurée en « unités d’essai de dégradation » définies comme la quantité d’enzyme nécessaire pour dégrader complètement 1 μg d’ADN plasmidique en 10 minutes à 37 °C dans 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 et 13 mM CaCl2.
1 ‘Unité d’essai de dégradation’ est équivalente à 0,3 ‘unités Kunitz’.
Citations de produits:
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Références sélectionnées:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning : A Laboratory Manual, 2nd ed. New York : Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) ADN polymérases dépendantes de l’ADN. In : Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et autres, eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Activité Ca2+- dépendante de la DNase I humaine et de ses variantes hyperactives. Protein Sci. 8:1780.