¡Sólo para uso in vitro!
Definición de unidad: Una unidad Kunitz se define como la cantidad de enzima necesaria para producir un aumento de la absorbancia de 260 nm de 0,001/min/ml a 25°C de ADN altamente polimerizado.
Envío: se envía en hielo azul
Condiciones de almacenamiento: almacenar a -20 °C
evitar los ciclos de congelación/descongelación
Vida útil: 12 meses
Forma: líquida (Se suministra en 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 y 50 % de glicerol)
Concentración: 2 unidades/μl
Aplicaciones:
La DNasa I se añade comúnmente a los reactivos de lisis celular para eliminar la viscosidad causada por el contenido de ADN en los lisados de células bacterianas o para eliminar las plantillas de ADN del ARN producido por transcripción in vitro.
La DNasa I elimina el ADN no deseado de los lisados celulares para mejorar la eficacia de la extracción de proteínas.
Descripción:
La DNasa I (libre de RNasa), desoxirribonucleasa I, es un polipéptido único y glicosilado que degrada el ADN de cadena simple y doble. La enzima actúa escindiendo el ADN en fosfodinucleótidos de 5′ y pequeños fragmentos de oligonucleótidos.
La DNasa I se utiliza para aplicaciones que requieren la digestión del ADN en las que es crucial evitar daños en el ARN.
Condiciones de reacción
1x tampón de reacción DNasa I
Incubación a 37°C
10x tampón de reacción DNasa I:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25°C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inactivación:
La DNasa I se inactiva calentándola a 65 °C durante 10 minutos. Los niveles elevados de iones monovalentes como Na+ y K+ (es decir, 100 mM) disminuirán la actividad de la DNasa I.
Actividad:
> 2500 unidades/mg de proteína
La actividad de la DNasa I también se mide en «unidades de ensayo de degradación» definidas como la cantidad de enzima necesaria para degradar completamente 1 μg de ADN de plásmido en 10 minutos a 37 °C en 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 y 13 mM CaCl2.
1 ‘Unidad de ensayo de degradación’ equivale a 0,3 ‘Unidades Kunitz’.
Citaciones del producto:
Por favor, haga clic en la flecha negra de la derecha para ampliar la lista de citas. Haga clic en el título de la publicación para ver el texto completo.
Referencias seleccionadas:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. En: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+- dependent activity of human DNase I and its hyperactive variants. Protein Sci. 8:1780.