Pouze pro použití in vitro!
Definice jednotky: Kunitzova jednotka je definována jako množství enzymu potřebné ke zvýšení absorbance při 260 nm o 0,001/min/ml při 25 °C vysoce polymerizované DNA.
Dodání: Dodává se na modrém ledu
Podmínky skladování: Uchovávejte při -20 °C
vyhněte se cyklům zmrazování/rozmrazování
Doba skladování: 12 měsíců
Tvar: kapalný (Dodává se v 10 mM Tris-HCl pH 7.).5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 a 50 % glycerolu)
Koncentrace: 2 jednotky/μl
Použití:
DNáza I se běžně přidává do činidel pro buněčnou lýzu k odstranění viskozity způsobené obsahem DNA v bakteriálních buněčných lyzátech nebo k odstranění DNA templátů z RNA vzniklé při transkripci in vitro.
DNáza I odstraňuje nežádoucí DNA z buněčných lyzátů, aby se zvýšila účinnost extrakce proteinů.
Popis:
DNáza I (bez RNázy), deoxyribonukleáza I je jednoduchý, glykosylovaný polypeptid, který rozkládá jedno- a dvouřetězcovou DNA. Enzym funguje tak, že štěpí DNA na 5′ fosfodinukleotid a malé oligonukleotidové fragmenty.
DNáza I se používá pro aplikace vyžadující štěpení DNA, při nichž je zásadní zabránit poškození RNA.
Reakční podmínky
1x DNase I Reaction Buffer
Inkubace při 37 °C
10x DNase I Reaction Buffer:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25 °C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inaktivace:
DNase I se inaktivuje zahřátím na 65 °C po dobu 10 minut. Vysoké hladiny monovalentních iontů, jako jsou Na+ a K+ (tj. 100 mM), sníží aktivitu DNasy I.
Aktivita:
> 2500 jednotek/mg proteinu
Aktivita DNasy I se také měří v „Degradation Assay units“ definovaných jako množství enzymu potřebné k úplné degradaci 1 μg plasmidové DNA za 10 minut při 37 °C v 10 mM Tris-HCl pH 7. Aktivita DNasy I se měří v „Degradation Assay units“.5, 50 mM MgCl2 a 13 mM CaCl2.
1 „Degradation Assay unit“ odpovídá 0,3 „Kunitz units“.
Citace produktu:
Pro rozbalení seznamu citací klikněte na černou šipku vpravo. Pro zobrazení celého textu klikněte na název publikace.
Vybrané odkazy:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. In: Polymerové polymery: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+-dependentní aktivita lidské DNázy I a jejích hyperaktivních variant. Protein Sci. 8:1780.