Kun til in vitro brug!
Enhedsdefinition: En Kunitz-enhed er defineret som den mængde enzym, der er nødvendig for at frembringe en stigning i absorbansen ved 260 nm på 0,001/min/ml ved 25 °C af højt polymeriseret DNA.
Forsendelse: sendes på blå is
Lagringsbetingelser: opbevares ved -20 °C
undgå fryse/opblødningscyklusser
Holdbarhed: 12 måneder
Form: flydende (Leveres i 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 og 50 % glycerol)
Koncentration: 2 enheder/μl
Anvendelser:
DNase I tilsættes almindeligvis til cellelysereagenser for at fjerne den viskositet, der skyldes DNA-indholdet i bakterielle cellelysater, eller for at fjerne DNA-templates fra RNA produceret ved in vitro-transskription.
DNase I fjerner uønsket DNA fra cellelysater for at forbedre proteinekstraktionseffektiviteten.
Beskrivelse:
DNase I (RNase free), Deoxyribonuklease I er et enkelt, glykosyleret polypeptid, der nedbryder enkelt- og dobbeltstrenget DNA. Enzymet virker ved at spalte DNA i 5′ phosphodinucleotid og små oligonukleotidfragmenter.
DNase I anvendes til anvendelse, der kræver fordøjelse af DNA, hvor det er afgørende at undgå skader på RNA.
Reaktionsbetingelser
1x DNase I-reaktionsbuffer
Inkubation ved 37 °C
10x DNase I-reaktionsbuffer:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25 °C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inaktivering:
DNase I inaktiveres ved opvarmning til 65 °C i 10 minutter. Høje niveauer af monovalente ioner som Na+ og K+ (dvs. 100 mM) vil nedsætte DNase I-aktiviteten.
Aktivitet:
> 2500 enheder/mg protein
DNase I-aktivitet måles også i “Degradation Assay units” defineret som den mængde enzym, der kræves for at nedbryde 1 μg plasmid-DNA fuldstændigt i 10 minutter ved 37 °C i 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 og 13 mM CaCl2.
1 ‘Degradation Assay unit’ svarer til 0,3 ‘Kunitz units’.
Produktcitater:
Klik på den sorte pil til højre for at udvide citatlisten. Klik på publikationstitlen for at få den fulde tekst.
Udvalgte referencer:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning (Molekylær kloning): A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. In: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+ -afhængig aktivitet af human DNase I og dens hyperaktive varianter. Protein Sci. 8:1780.