Doar pentru utilizare in vitro!
Definiție unitate: O unitate Kunitz este definită ca fiind cantitatea de enzimă necesară pentru a produce o creștere a absorbanței la 260 nm de 0,001/min/ml la 25°C a ADN-ului puternic polimerizat.
Expediție: se livrează pe gheață albastră
Condiții de depozitare: se păstrează la -20 °C
evitați ciclurile de congelare/decongelare
Cercetare: 12 luni
Formă: lichid (Se livrează în 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 și 50 % glicerol)
Concentrație: 2 unități/μl
Aplicații:
Dinaza I se adaugă în mod obișnuit la reactivii de liză celulară pentru a elimina vâscozitatea cauzată de conținutul de ADN din lizații de celule bacteriene sau pentru a elimina șabloanele de ADN din ARN-ul produs prin transcriere in vitro.
DNază I îndepărtează ADN-ul nedorit din lizații celulari pentru a îmbunătăți eficiența extracției proteinelor.
Descriere:
DNază I (RNază liberă), Deoxiribonucleaza I este o polipeptidă unică, glicozilată care degradează ADN-ul monocatenar și bicatenar. Enzima acționează prin scindarea ADN-ului în fragmente de fosfodinucleotide 5′ și oligonucleotide mici.
Dinaza I este utilizată pentru aplicații care necesită digestia ADN-ului în care este crucial să se evite deteriorarea ARN-ului.
Condiții de reacție
1x Buffer de reacție DNază I
Incubare la 37°C
10x Buffer de reacție DNază I:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25°C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inactivare:
Dinaza I se inactivează prin încălzire la 65°C timp de 10 minute. Nivelurile ridicate de ioni monovalenți, cum ar fi Na+ și K+ (adică 100 mM) vor scădea activitatea DNazei I.
Activitate:
> 2500 unități/mg de proteină
Activitatea DNazei I se măsoară, de asemenea, în „unități de testare a degradării” definite ca fiind cantitatea de enzimă necesară pentru a degrada complet 1 μg de ADN plasmidic în 10 minute la 37 °C în 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 și 13 mM CaCl2.
1 ‘Degradation Assay unit’ este echivalent cu 0,3 ‘Kunitz units’.
Citări ale produsului:
Vă rugăm să faceți clic pe săgeata neagră din dreapta pentru a extinde lista de citări. Faceți clic pe titlul publicației pentru textul integral.
Referințe selectate:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. În: G: Current Protocols in Molecular Biology (Protocoale actuale în biologia moleculară). Ausubel și colab., eds. Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Activitatea dependentă de Ca2+ a DNazei I umane și a variantelor sale hiperactive. Protein Sci. 8:1780.
.