Apenas para uso in vitro!
Definição de unidade: Uma unidade Kunitz é definida como a quantidade de enzima necessária para produzir um aumento na absorção de 260 nm de 0,001/min/ml a 25°C de ADN altamente polimerizado.
Embarque: enviado em gelo azul
Condições de armazenamento: armazenar a -20 °C
evitar ciclos de congelamento/descongelamento
Validade: 12 meses
Form: líquido (Fornecido em 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 e 50% de glicerol)
Concentração: 2 unidades/μl
Aplicações:
DNase I é normalmente adicionado a reagentes de lise celular para remover a viscosidade causada pelo conteúdo de ADN nos lisados celulares bacterianos ou para remover modelos de ADN do RNA produzido por transcrição in vitro.
DNase I remove o DNA indesejado dos lisados celulares para melhorar a eficiência da extração de proteínas.
Descrição:
DNase I (livre de RNase), Desoxirribonuclease I é um polipeptídeo único e glicosilado que degrada o DNA de cadeia simples e dupla. A enzima funciona pela clivagem do DNA em fosfodinucleotídeos de 5′ e pequenos fragmentos de oligonucleotídeos.
DNase I é usada para aplicação que requer a digestão do DNA, na qual é crucial para evitar danos ao RNA.
Condições de Reacção
1x Tampão de Reacção DNase I
Incubação a 37°C
10x Tampão de Reacção DNase I:
100 mM Tris-HCl pH 7.6 (25°C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inactivação:
DNase I é inactivada por aquecimento a 65°C durante 10 minutos. Níveis elevados de íons monovalentes como Na+ e K+ (i.e. 100 mM) diminuirão a atividade do DNase I.
Atividade:
A atividade do DNase I também é medida em ‘Unidades de ensaio de degradação’ definidas como a quantidade de enzima necessária para degradar completamente 1 μg de DNA plasmídeo em 10 minutos a 37 °C em 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 e 13 mM CaCl2.
1 ‘Unidade de ensaio de degradação’ é equivalente a 0.3 ‘Unidades Kunitz’.
Citações do produto:
Por favor clique na seta preta à direita para expandir a lista de citação. Clique no título da publicação para o texto completo.
Selected References:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2ª ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polimerases. In: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al., eds. Wiley & Sons Inc. (1997). 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+- actividade dependente de DNase I humana e suas variantes hiperactivas. Protein Sci. 8:1780.