Nur zur in vitro Verwendung!
Einheit Definition: Eine Kunitz-Einheit ist definiert als die Menge an Enzym, die erforderlich ist, um einen Anstieg der Absorption bei 260 nm von 0,001/min/ml bei 25°C von hochpolymerisierter DNA zu erzeugen.
Versand: wird auf blauem Eis geliefert
Lagerungsbedingungen: bei -20 °C lagern
Gefrier-/Auftauzyklen vermeiden
Lagerfähigkeit: 12 Monate
Form: flüssig (Geliefert in 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 10 mM MgCl2 und 50 % Glycerin)
Konzentration: 2 Einheiten/μl
Anwendungen:
DNase I wird üblicherweise Zelllysereagenzien zugesetzt, um die durch den DNA-Gehalt in Bakterienzelllysaten verursachte Viskosität zu beseitigen oder um DNA-Vorlagen aus der durch In-vitro-Transkription hergestellten RNA zu entfernen.
DNase I entfernt unerwünschte DNA aus Zelllysaten, um die Effizienz der Proteinextraktion zu verbessern.
Beschreibung:
DNase I (RNase free), Deoxyribonuclease I ist ein einzelnes, glykosyliertes Polypeptid, das ein- und doppelsträngige DNA abbaut. Das Enzym spaltet die DNA in 5′-Phosphodinukleotid- und kleine Oligonukleotidfragmente.
DNase I wird für Anwendungen verwendet, die den Verdau von DNA erfordern und bei denen es entscheidend ist, eine Schädigung der RNA zu vermeiden.
Reaktionsbedingungen
1x DNase I Reaktionspuffer
Inkubation bei 37°C
10x DNase I Reaktionspuffer:
100 mM Tris-HCl pH 7,6 (25°C)
25 mM MgCl2
5 mM CaCl2
Inaktivierung:
DNase I wird durch Erhitzen auf 65 °C für 10 Minuten inaktiviert. Hohe Konzentrationen einwertiger Ionen wie Na+ und K+ (d. h. 100 mM) verringern die DNase I-Aktivität.
Aktivität:
> 2500 Einheiten/mg Protein
Die DNase I-Aktivität wird auch in „Abbau-Assay-Einheiten“ gemessen, definiert als die Enzymmenge, die erforderlich ist, um 1 μg Plasmid-DNA in 10 Minuten bei 37 °C in 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM MgCl2 und 13 mM CaCl2.
1 ‚Degradation Assay unit‘ entspricht 0,3 ‚Kunitz units‘.
Produktzitate:
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Ausgewählte Referenzen:
Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press 10.6
Tabor et al. (1997) DNA-Dependent DNA Polymerases. In: Current Protocols in Molecular Biology. Ausubel et al. (eds.). Wiley & Sons Inc. 3.5.4-6.
Pan et al. (1999) Ca2+- dependent activity of human DNase I and its hyperactive variants. Protein Sci. 8:1780.