Biol Res 41: 197-204, 2008
ARTIKEL
Skillnader i lipogenes och lipolys hos vuxna adipocyter från överviktiga och icke överviktiga människor
MARIANA CIFUENTES, CECILIA ALBALA och CECILIA V ROJAS
Institutet för näringslära och livsmedelsteknik (INTA), Universidad de Chile, Santiago, Chile.
Dirección para Correspondencia
ABSTRACT
Det har föreslagits att skillnader i adipocytfunktion och/eller metabolism mellan överviktiga och magra individer kan manifestera sig i funktionella avvikelser i fettvävnaden som leder till metaboliska störningar vid fetma. Vi studerade lipogenes och lipolys av omentala adipocyter från överviktiga (OB) och icke överviktiga (NOB) människor. Den specifika aktiviteten hos det lipogena markörenzymet G3PDH var 50 % lägre i totala adipocyter från OB jämfört med NOB-personer. Omentala adipocyter från OB-personer hade också lägre basal lipolytisk levéis och ett lägre lipolytiskt svar på p-adrenergt stimulus. Kolesteroldepletion av adipocyternas plasmamembran med hjälp av metyl β-cyklodextrin orsakade en lipolytisk effekt på adipocyter i båda grupperna tillsammans, men när överviktiga och magra försökspersoner analyserades separat var svaret signifikant endast hos de överviktiga. Vi presenterar bevis för en annorlunda lipogenisk och lipolytisk profil i adipocyter i omentala adipocyter hos överviktiga individer och föreslår en relevant roll för kolesterol i plasmamembranen, där effekten av dess avlägsnande i OB- och NOB-adiolys av adipocyter skiljer sig åt.
Nyckelord: adipocyt, kolesterol, lipogenes, lipolys, fetma, triglyceridmetabolism.
INLEDNING
Överskottet av visceral fettvävnad är kopplat till många hälsoproblem. En ökad adipositet är förknippad med ökad fettcellsvolym. Feta individer har således en relativt stor mängd hypertrofiska adipocyter jämfört med magra personer. Studier på fettceller från djur och människor har visat att flera metaboliska funktioner hos adipocyter förändras med en större cellstorlek, t.ex. insulinkänslighet och glukosmetabolism, förutom adipokinutsöndring och genuttrycksprofiler (Bluher et al., 2004; Salans och Doherty, 1971; Salans et al., 1974; Smith, 1971; Yang et al., 2004). Detta har lett till förslaget att en funktionell dominans av hypertrofiska och/eller metaboliskt försämrade celler i fettvävnad är en viktig kausal effekt för en låg respons hos vävnaden på homeostatiska signáis, och därmed vidmakthåller eller förvärrar det feta tillståndet. För att testa denna hypotes undersökte vi in vitro lipogenes och lipolys i isolerade omentala adipocyter från vuxna med OB och NOB. Med tanke på att signalering av lipolys beror på proteiner som finns i caveolae, och att störningar i organisationen av dessa kolesterolrika strukturer har förknippats med metaboliska förändringar i adipocyter med fetma (Le Lay et al, 2004), utvärderade vi också effekten av avlägsnande av kolesterol i plasmamembranen med hjälp av metyl (β-cyklodextrin (M(βCD) i OB och NOB adipocytlipolysen.
Dessa resultat understryker en annorlunda lipogen och lipolytisk profil mellan magra och överviktiga personer. Våra data visar på den metaboliska relevansen av det lägre kolesterolinnehållet i plasmamembranen i adipocyter hos överviktiga personer, vilket påverkar den fysiologiska regleringen av lipolysen.
MATERIAL OCH METODER
Isolering av adipocyter
Mänskligt omentalt fett erhölls från 25 personer med fetma (OB) och icke-fetma (NOB) som genomgick elektiv bukkirurgi (antingen gastrisk bypass, gynekologisk eller gastrointestinal). Ämnenas åldersspann var 29-79 år och deras body mass index (BMI) varierade mellan 18 och 54 kg/m2. Gränsen för att definiera fetma ansågs vara enligt NIH:s definition av BMI > 30 kg/m2. Tolv personer (9 män, 3 kvinnor) var NOB (BMI 23,3 ± 3,4 kg/m2), medan 13 var OB (BMI 38,2 ± 4,3 kg/m2; 4 män, 9 kvinnor). Vi observerade ingen påverkan av kön på de studerade parametrarna. Protokollet godkändes av Institutional Review Board vid INTA, University of Chile, och informerat samtycke undertecknades av donatorerna. Fettvävnad som avlägsnades under operationen sänktes ner i saltlösning och transporterades till laboratoriet för att behandlas inom en timme. Vid ankomsten tvättades vävnaden flera gånger med Hanks’ balanserade saltlösning (HBSS), varvid all synlig bindväv, blodproppar och kärl avlägsnades, och sedan hackades den i små bitar (2-3 mm2) och odlades i MI99 (Invitrogen, Carlsbad, CA) médium, kompletterat med antibiotika (penicillin-streptomycin) vid 37 °C i en inkubator med kontrollerad atmosfär. Det fanns en 2-dagars inkubationsperiod för vävnaden för att minimera interindividuell variabilitet som orsakas av ämnesfaktorer som hormonell miljö, aktuellt hälsotillstånd eller mediciner. Adipocyter isolerades med hjälp av en metod som bygger på Rodbells (1964) arbete. Kortfattat: hackad fettvävnad inkuberades med lg/1 kollagenas typ I (Worthington Biochemical Corp. Lakewood, NJ) vid 37 °C i 60 minuter med kontinuerlig omblandning. Den resulterande cellsuspensionen filtrerades genom en steril gasbinda, och eftersom adipocyter spontant separerar från den vattenhaltiga fasen, återfanns de genom att försiktigt suga upp det flytande skiktet med en plana pipett och tvättades två gånger med 5 volymer HBSS. Isolerade adipocyter användes antingen omedelbart för lipolysstudier eller frystes för senare bestämning av glycerol-β-fosfatdehydrogenas (G3PDH).
Den lipolytiska reaktionen på (β-adrenerg stimulus och detektion av lipogen aktivitet (se nedan) visade att det fanns livskraftiga adipocyter efter digestión av vävnaden.
Lipogenes och lipolys
Syntesen av triglycerider i adipocyten använder både förtillverkade och de novo-tillverkade fettsyror, medan glycerolryggen kommer från glukosderivat glycerol-β-fosfat. Den lipogena kapaciteten bedömdes genom den specifika aktiviteten hos enzymet G3PDH, som katalyserar bildandet av triglyceridernas glycerolryggrad från dihydroxyacetonfosfat som tillhandahålls via glykolysen. Detta enzym anses vara hastighetsbegränsande för triglyceridsyntesen i fettvävnad, med tanke på att det i denna vävnad är den solé källa till glycerol-β-fosfat. Dess användning som en lipogen markör i mogna adipocyter stöds av uppregleringen av dess mRNA och aktivitet av insulin (Moustaid et al., 1996; Rumberger et al., 2003). I korthet homogeniserades isolerade adipocyter (10 slag vid 1800 rpm med ett Glas-Col homogeniseringssystem, Glas-Col, IN) med hjälp av ett glasrör utrustat med en teflonpistill, vid 4°C i en buffert som innehåller 0,25 M sackaros, lmM EDTA, 50mM trietanolamin och lmM dithiotreithol. Homogenatet centrifugerades vid 14 000 x g, 4 °C i 30 minuter. G3PDH-aktiviteten bestämdes i supernatanten enligt Kozak och Jensens (1974) metod genom att mäta NADH-oxidationen (tidsförloppet för förändringen av absorbansen vid 340 nm vid 37 °C) på en mikroplattläsare (EL-808, BioTek Instruments Inc, Winooski, VT), med dihydroxiacetonfosfat som substrat för enzymet. Reaktionen var linjär med avseende på tiden under hela testperioden. En enhet enzymaktivitet motsvarar oxidationen av 1 nmol NADH per minut under de förhållanden som anges ovan. Proteinkoncentrationen i det lösliga extraktet mättes med Bradfordmetoden (Bradford, 1976).
Lipolysen bedömdes under 48 timmars fettodling genom mätning av kumulativ glycerol som frigjordes i MI99-kulturmédiat (Reagens för bestämning av fri glycerol, Sigma, St Louis MO). Dessutom utvärderades det akuta lipolytiska svaret på (β-adrenergt stimulus, med eller utan utarmning av plasmamembrankolesterol (60 min förinkubation med 10 mM MβCD ), genom att mäta den totala glycerol som frigjordes under en 90-minuters inkubering av 10 % adipocyt-suspensioner vid 37 °C med försiktig kontinuerlig omrörning och tillsats av 10μM isoproterenol (Sigma) eller vehikel. För lipolysbedömning under odling av fettvävnad uttrycks glycerolvärdena per mg vävnad, medan för lipolysbestämning i adipocytuppsättningar normaliseras värdena till totala cellulära lipider enligt Carpéné (2001) eller, i försök med lipolytiska medel, till respektive basal (icke-stimulerad) kontroll. De totala cellulära lipiderna extraherades enligt Dolé och Meinertz metod (1960) och bestämdes gravimetriskt. Mot bakgrund av ett rapporterat oberoende förhållande mellan cellstorlek och lipolys som kan fungera som en störande faktor, särskilt i våra studier där vi jämförde OB- och NOB-personer, ansågs uttrycket per mg lipid vara det mest adekvata. Som visats av Large et al. (1999) är glycerolreléas uttryckt per lipidinnehåll i hög grad korrelerat med aktiviteten hos hormonkänsligt lipas i studier av överviktiga och magra mänskliga försökspersoner, och mer relevant för lipolytisk kapacitet än per cellantal på grund av den ökade fettcellsvolymen hos överviktiga.
Statistik
Differenserna mellan medelvärdena analyserades med hjälp av Student’s t-test och ansågs vara signifikanta vid p≤0,05. Pearsons korrelationskoefficient användes för att utvärdera sambanden för kontinuerliga variabler. Data uttrycks som medelvärde ± SEM.
RESULTAT
Lipogenes
Den specifika aktiviteten hos det lipogena enzymet G3PDH var nästan halverad hos OB-personerna jämfört med den i adipocyter från NOB (p<0,05, fig. 1). I överensstämmelse med detta fanns det en signifikant omvänd korrelation mellan lipogenesemarkeringen och försökspersonernas BMI (fig. 1, inlaga, r2=0,31, p=0,01). Det är värt att notera att det inte fanns några skillnader i proteinkoncentration (som används för att normalisera G3PDH-aktiviteten) mellan OB- och NOB-ämnen som skulle kunna ha snedvridit dessa resultat.
Lipolys
Releasen av glycerol till inkubationsmediet under odling av hel omental fettvävnad eller isolerade adipocyter användes som en indikator på lipolytisk aktivitet. Både basal och isoproterenolstimulerad lipolys var lägre i isolerade adipocyter från OB-personer (p<0,05 respektive p<0,01, fig. 2). I överensstämmelse med dessa observationer fanns det en mycket signifikant omvänd korrelation mellan lipolys och försökspersonens BMI för hel vävnad (r2=0,46, p<0,0005, inset, fig. 2) och isolerade adipocyter (basal: r2=0,28, p<0,01; β-adrenergt stimulerad: r2=0,17, p<0,05, n=20). Adipocyter från överviktiga personer visade ett lägre svar på (β-adrenergt stimulus jämfört med dem från deras magra motsvarigheter (Fig. 3, p<0,05).
Exponering av adipocyter för 10 mM MβCD i en delmängd av 11 prover orsakade en signifikant ökning av basal lipolys. Denna ökning var direkt proportionell mot försökspersonens BMI (r2=0,5, p<0,05, fig. 4). Det lipolytiska svaret på (β-adrenerg stimulering minskade signifikant när adipocyter utsattes för M(βCD (345 ± 50 % jämfört med 199 ± 33 %, respektive, p< 0,05). Intressant nog, när man jämförde effekten av M(βCD jämfört med vehikel, observerades en signifikant minskning av det lipolytiska svaret på isoproterenol i adipocyter från försökspersoner med BMI>40 kg/ m2 (morbidt fetma, enligt NIH:s definition), medan magra försökspersoner inte uppvisade någon signifikant skillnad (fig. 5). I överensstämmelse med detta hittades en signifikant korrelation mellan BMI och förhållandet mellan det lipolytiska svaret på 10μM isoproterenol i närvaro och frånvaro av 10 mM M(βCD (r2=0,46, p<0,05).
DISKUSSION
I detta arbete studerade vi lipogenes och lipolys i adipocyter isolerade från omental fettvävnad från OB och NOB vuxna inom ett brett BMI-område (18-54 kg/m2). Våra observationer visar att den specifika aktiviteten hos lipogenesemarkören G3PDH i OB var hälften av den i adipocyterna hos deras motsvarigheter i NOB. Å andra sidan var högre BMI förknippat med lägre basal och (β-adrenergt stimulerad lipolys och en större känslighet för försämrad plasmamembransignalering på grund av kolesterolborttagning. En större triglyceridackumulering i OB adipocyten kan vara relaterad till den lägre lipolytiska aktivitet som vi observerade i denna grupp, vilket andra också har föreslagit (Langin et al., 2005). Dessutom kan den lägre specifika G3PDH-aktiviteten som vi fann i OB, vilket kan resultera kontraintuitivt, representera en minskad kapacitet att lagra de överflödiga cirkulerande triglyceriderna, vilket sannolikt kommer att resultera i hypertriglyceridemi och fettansamling i andra delar av kroppen, med de kända skadliga effekter som är förknippade med det metabola syndromet.
Med hjälp av ett in vivo tillvägagångssätt på människor observerade Dodt et al. (2003) ett avtrubbat lipolytiskt svar på intraneural stimulering hos överviktiga kvinnor, vilket stämmer överens med våra in vitro-resultat och stödjer uppfattningen att fetma åtminstone delvis kan vara förknippat med ett lågt lipolytiskt svar på sympatikusaktivering. I enlighet med detta studerade Gómez-Ambrosi et al. (2004) mönstret för genuttryck i omental fettvävnad och visade att överviktiga personer hade sänkt och ökat uttryck av lipolysinducerande respektive repressoriska gener.
Det finns en betydande diskrepans i litteraturen när det gäller normalisering av lipolysedata. Med tanke på det rapporterade direkta sambandet mellan adipocytcellstorlek och lipolys (Large et al., 1999) och den större relativa förekomsten av större adipocyter hos överviktiga (Large et al., 1999) förväntas fettvävnad uppvisa en större ojusterad lipolys bland överviktiga än bland NOB-individuáis. För att undvika en förväxlingsfaktor på grund av olika cellstorleksfördelning i OB jämfört med NOB, normaliserades således våra glycerolreléaservalúes genom att uttrycka dem per mg total lipid, och på så sätt bedöma den lipolytiska aktiviteten för en given lipidmassa. Som stöd för detta har studier av överviktiga och magra människor observerat en hög korrelation mellan aktiviteten hos det viktiga lipolytiska enzymet HSL (hormone sensitive Upase) och adipocytglycerolreléase uttryckt per lipidinnehåll (Large et al., 1999). Författarna konstaterade att lipidinnehållet är mer relevant för den lipolytiska kapaciteten än normalisering per cellantal, på grund av den ökade fettcellsvolymen hos de överviktiga. Det är värt att notera att (β-adrenerg stimulering över basala förhållanden också visade sig vara lägre hos OB-personer, och denna bedömning är oberoende av cellstorlek eller cellantal, med tanke på att den är normaliserad med motsvarande kontroll (varje basal valué).
Membranets kolesterolinnehålls roll för caveolae-integritet, specifik signaltransduktion och korrekt cellfunktion har redan uppmärksammats (Le Lay et al. 2001). Det har visats att hypertrofiska adipocyter har en försämrad metabolism tillsammans med ett lägre kolesterolinnehåll i plasmamembranen (Le Lay et al. 2001). Våra observationer utökar Le Lay et al. (2001, 2004) som visade att kolesterolbrist i adipocyter leder till insulinresistens och förändringar i uttrycket av ett antal gener som är relevanta för fettmetabolismen. Dessa resultat gavs som bevis för att kolesterolminskning i plasmamembranen är en länk mellan adipocythypertrofi och metabolisk försämring, vilket stöds av våra nuvarande resultat. Våra experiment där adipocyter utsätts för M(βCD orsakade en betydande ökning av den basala lipolysen (förväntad efter förändring av plasmamembranens caveolae-integritet, vilket resulterar i en minskad fosfodiesteras 3B-aktivitet ) och följaktligen i ett minskat lipolytiskt svar på det (β-adrenerga stimulet. Intressant nog observerade vi ett signifikant samband mellan M(βCD:s inverkan på den basala lipolysen och BMI. Dessutom stöder den signifikanta korrelationen mellan BMI och förhållandet mellan isoproterenol och basal lipolys i närvaro och frånvaro av M(βCD en större mottaglighet hos adipocyter från överviktiga försökspersoner för kolesterolbristdriven förändrad signalering av plasmamembranen.
Utvidgade fettceller, som är kända för att vara rikligare när försökspersonernas BMI ökar (Julien et al., 1989; Salans et al., 1973; Van Harmelen et al, 2003) är insulinresistenta (Olefsky 1977) och uppvisar ett distinkt sekretionsmönster som har kopplat dem till fetma-associerade sjukdomar (Imbeault et al., 1999; Van Harmelen et al., 2000).
Interessant nog har de fettvävnadsspecifika insulinreceptor-knockout-mössen (Bluher et al, 2004) visar polarisering av adipocyter i två subpopulationer av små (<50μm diameter) och stora >1OOμm) celler, vilket åtföljs av skillnader i bl.a. triglyceridsyntes och lipolys, bland andra parametrar. De observationer som här rapporterats visar på inneboende skillnader i triglyceridmetabolismen mellan omentala adipocyter från OB- och NOB-personer, och vi föreslår att anrikningen av hypertrofierade och membrankolesterolberoende adipocyter kan vara drivande för sådana förändringar. Det är möjligt att det försämrade lipolytiska svaret med tiden bidrar till att öka triglyceriddepåerna. Den minskade förmågan att lagra ytterligare triglycerider, skulle resultera i en ökad mängd cirkulerande lipider, vilket höjer riskerna i samband med det metabola syndromet.
Såvitt vi vet har ingen annan studie utvärderat lipogenesen och lipolysen i omentala adipocyter från mänskliga OB- och NOB-ämnen. Detta arbete visar på relevanta skillnader i triglyceridmetabolismen i omentala adipocyter hos överviktiga jämfört med icke överviktiga personer och tyder på att överviktiga individers adipocyter är mer mottagliga för plasmamembranets minskade kolesterolinnehåll. Även om vi avsåg att minimera ämnesfaktorer kan vi inte utesluta att komorbiditeter som förekommer hos överviktiga personer kan påverka fettcellernas olika beteende. Jämförelsen av triglyceridhanteringen mellan dessa grupper och i en fettdepå av sådan patogen relevans hjälper till att förstå skillnader i metabolism och reaktionsförmåga, som kan vara mål för farmakologisk intervention och som kräver ytterligare studier.
NEDANKNINGAR
Vi vill tacka dr Miguel A. Celis vid Tisné-sjukhuset, dr Leonardo Rodríguez vid DIPRECA-sjukhuset och dr Cristian Cavalla, James Hamilton och Gonzalo Wiedmaier vid Padre Hurtado-sjukhuset för den ovärderliga hjälpen med att få tag på fettvävnad, samt mrs. Marisol Blanco och Rodrigo Brücher för deras tekniska hjälp.
STIFTNINGSSTÖD
Stöds av bidrag från DI-U de Chile (nr Mult 04/06-2 till C. Rojas och 1-04/01-2 till M. Cifuentes) och FONDECYT (nr 1070632 till C. Rojas). Rojas, N°1080232 till M. Cifuentes).
BLUHER M, WILSON-FRITCH L, LESZYK J, LAUSTSEN P G, COR VERA S, KAHN CR (2004) Role of insulin action and cell size on protein expression patterns in adipocytes. J Biol Chem 279: 31902-31909.
BRADFORD MM (1976) En snabb och känslig metod för kvantifiering av mikrogrammkvantiteter av protein med hjälp av principen om bindning mellan protein och färgämne. Anal Biochem 72: 248-254.
CARPENÉ C (2001) Analyser av adrenerga receptorer inklusive lipolys och bindningsmätningar. In: AILHAUD G (red) Adipose Tissue Protocols. New Jersey: Humana Press: New Jersey, New Jersey.
DODT C, LONNROTH P, WELLHONER JP, FEHM HL, ELAM M (2003) Sympatisk kontroll av vit fettvävnad hos magra och feta människor. Acta Physiol Scand 177: 351-357.
DOLÉ VP, MEINERTZ H (1960) Mikrobestämning av långkedjiga fettsyror i plasma och vävnader. J Biol Chem 235: 2595-2599.
GÓMEZ-AMBROSI J, CATALÁN V, DIEZ-CABALLERO A, MARTÍNEZ-CRUZ LA, GIL MJ, GARCÍA-FONCILLAS J, CIENFUEGOS JA, SALVADOR J, MATO JM, FRUHBECK G (2004) Genexpressionsprofilen i omental fettvävnad vid fetma hos människor. FASEB J 18: 215-217.
IMBEAULT P, LEMIEUX S, PRUDHOMME D, TREMBLAY A, NADEAU A, DESPRES JP, MAURIEGE P (1999) Förhållandet mellan visceral fettvävnad och metabola riskfaktorer för kranskärlssjukdom: bidrar hypertrofi av subkutana fettceller? Metabolism 48: 355-362.
JULIEN P, DESPRES JP, ÁNGEL A (1989) Scanning electrón microscopy of very small fat cells and mature fat cells in human obesity. J Lipid Res 30: 293-299.
KOZAK LP, JENSEN JT (1974) Genetisk och utvecklingsmässig kontroll av flera former av L-glycerol 3-fosfatdehydrogenas. J Biol Chem 249: 7775-7781.
LANGIN D, DICKER A, TAVERNIER G, HOFFSTEDT J, MAIRAL A, RYDEN M, ARNER E, SICARD C, JENKINS M, VIGUERIE N, VAN HARMELEN V, GROSS RW, HOLM C, ARNER P (2005) Adipocyte Upases and defect of lipolysis in human obesity. Diabetes 54: 3190-3197.
LARGE V, REYNISDOTTIR S, LANGIN D, FREDBY K, KLANNEMARK M, HOLM C, ARNER P (1999) Minskat uttryck och funktion av adipocyt hormonkänsligt Upase i subkutana fettceller hos överviktiga personer. J Lipid Res 40: 2059-2066.
LE LAY S, KRIEF S, FARNIER C, LEFRERE I, LE LIEPVRE X, BAZIN R, FERRÉ P, DUGAIL I (2001) Cholesterol, en cellstorleksberoende signal som reglerar glukosmetabolism och genuttryck i adipocyter. J Biol Chem 276: 16904-16910.
LE LAY S, FERRÉ P, DUGAIL I (2004) Kolesterolbalans i adipocyter vid fetma. Biochem Soc Trans 32: 103-106.
MOUSTAID N, JONES BH, TAYLOR JW (1996) Insulin ökar den lipogena enzymaktiviteten i humana adipocyter i primärkultur. J Nutr 126: 865-870.
NILSSON R, AHMAD F, SWARD K, ANDERSSON U, WESTON M, MANGANIELLO V, DEGERMAN E (2006) Plasmamembranets cykliska nukleotidfosfodiesteras 3B (PDE3B) är associerat med caveolae i primära adipocyter. Cell Signal 18: 1713-1721.
OLEFSKY JM (1977) Mekanismer för minskad insulinreaktivitet hos stora adipocyter. Endocrinology 100: 1169-1177.
RODBELL M (1964) Metabolism hos isolerade fettceller. I. Effekter av hormoner på glukosmetabolism och lipolys. J Biol Chem 239: 375-380.
RUMBERGER JM, WU T, HERING MA, MARSHALL S (2003) Hexosaminbiosyntesens roll i glukosmedierad uppreglering av lipogena enzymers mRNA-levéis: effekter av glukos, glutamin och glukosamin på glycerofosfatdehydrogenas, fettsyrasyntes och acetyl-CoA-karboxylas mRNA-levéis. J Biol Chem 278: 28547-28552.
SALANS LB, DOUGHERTY JW (1971): The effect of insulin on glucose metabolism by adipose cells of different size Influence of cell lipid and protein content, age, and nutritional state. J Clin Invest 50: 1399-1410.
SALANS LB, CUSHMAN SW, WEISMANN RE (1973) Studier av mänsklig fettvävnad. Fettcellstorlek och antal hos icke överviktiga och överviktiga patienter. J Clin Invest 52: 929-941.
SALANS SB, BRAY GA, CUSHMAN SW, DANFORTH JR E, GLENNON JA, HORTON ES, SIMS EA (1974) Glukosmetabolism och insulinrespons i mänsklig fettvävnad vid spontan och experimentell fetma. Effekter av kostsammansättning och fettcellstorlek. J Clin Invest 53: 848-856.
SMITH U (1971) Effekten av cellstorlek på lipidsyntesen i mänsklig fettvävnad in vitro. J Lipid Res 12: 65-70.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, WEYER C, FOLEY JE, BOGARDUS C, TATARANNI PA, PRATLEY RE (2000) Enlarged subcutaneous abdominal adipocytstorlek, men inte fetma i sig självt, predicts type II diabetes independent of insulin resistance. Diabetologia 43: 1498-1506.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, HAUNER H (2003) Effekten av BMI och ålder på fettvävnadens celluläritet och differentieringskapacitet hos kvinnor. Int J Obes Relat Metab Disord 27: 889-895.
YANG X, JANSSON PA, NAGAEV I, JACK MM, CARVALHO E, SUNNERHAGEN KS, CAM MC, CUSHMAN SW, SMITH U (2004) Evidence of impaired adipogenesis in insulin resistance. Biochem Biophys Res Commun 317: 1045-1051.