Introduktion
Thalassemi är den vanligaste ärftliga blodsjukdomen i Sydostasien och orsakas av minskad eller utebliven syntes av globinkedjorna i hemoglobin (Hb) vilket leder till obalans i globinkedjorna.1,2 Beta-thalassemi är en av de viktigaste typerna av thalassemi och orsakas av en mutation i beta-globingenen (HBB) på kromosom 11. Det kliniska och hematologiska spektrumet av beta-thalassemi sträcker sig från tyst bärarskap till kliniskt manifesterade tillstånd, inklusive svår transfusionsberoende beta-thalassemia major och beta-thalassemia intermedia (TI).3,4 I Thailand är både beta-thalassemi och hemoglobin E (HbE) en av de vanligaste formerna som är spridda i alla regioner, särskilt i nordöstra Thailand. De flesta av de allvarliga beta-thalassemierna är resultatet av interaktionen mellan beta-thalassemi och HbE.5,6
Den molekylära grunden för thalassemi har studerats över hela världen. Mer än 300 olika mutationer i betaglobingenen har karakteriserats. De flesta mutationer i beta-thalassemi orsakas av punktmutationer, små deletioner eller insertioner inom de kodande regionerna och exon-intron-övergångarna. Mutationstyperna är vanligen etnicitetsspecifika.7-9 I Thailand varierar prevalensen av bärare av beta-thalassemi från 3 %-9 %.10 Hittills har mer än 30 olika mutationer identifierats.11-13 Mutationernas heterogenitet gör det svårt att identifiera mutationen hos vissa beta-thalassemipatienter. Olika DNA-analysmetoder som dot blot-analys, omvänd dot blot, allelspecifik amplifiering med hjälp av ARMS (amplification refractory mutation system) eller direkt DNA-sekvensering har använts i stor utsträckning för att identifiera mutationer i betaglobingenen14 .-17
Denna studie syftade till att karaktärisera mutationer i beta-globingenen hos 80 pediatriska patienter som bär på mutationer i beta-thalassemi och som följdes upp på Phramongkutklao-sjukhuset, ett tertiärvårdscenter för thalassemipatienter från alla regioner, särskilt centrala Thailand.
Patienter och metoder
Patienturval
Åtttio obesläktade beta-thalassemipatienter som besökte hematologikliniken vid avdelningen för pediatrik, Phramongkutklao-sjukhuset, Bangkok, Thailand, från januari 2013 till december 2013 deltog i vår studie. Studieprotokollet godkändes av Institutional Review Board of Phramongkutklao Hospital, Phramongkutklao College of Medicine, Thailand. Sextiofem patienter hade kliniskt manifesterad beta-thalassemi, varav 57 med beta-thalassemi/HbE och åtta med homozygot eller sammansatt heterozygot beta-thalassemi. Femton patienter hade heterozygot beta-thalassemi. Alla patienter fick diagnosen vid 18 års ålder eller yngre. Patienter med homozygot beta-thalassemi och beta-thalassemi/HbE klassificerades kliniskt i svår transfusionsberoende thalassemi major och mild TI baserat på kriterier som ålder vid presentationen, genomsnittlig Hb-nivå vid steady state och transfusionsfrekvenshistorik, enligt tidigare beskrivning.18
Mutationsanalys
Efter att informerat samtycke inhämtats samlades sammanlagt 80 EDTA-prov (etylendiamintetraättiksyra) från perifert blod från alla individer. Genomiskt DNA extraherades från lymfocyter i perifert blod med hjälp av ett AxyPrep™ blood genomic DNA miniprep-kit enligt tillverkarens protokoll. Mutationerna i betaglobingenen karakteriserades först med hjälp av två uppsättningar allelspecifika polymeraskedjereaktioner (PCR) eller M-ARMS-system (multiplex amplification refractory mutation system) för att upptäcka sju vanliga mutationer i kinesiska och sydostasiatiska populationer, inklusive kodon 41/42 (-TCTT), kodon 17 (A>T), nukleotid -28 (A>G), IVS-II-654 (C>T), kodon 71/72 (+A), IVS-I-1 (G>T) och IVS-I-5 (G>C) enligt tidigare beskrivning.15,17 Dessa mutationer har visat sig vara ansvariga för 80-90 % av beta-thalassemiallelerna i denna region.19,20 Okända beta-thalassemiagener karakteriserades ytterligare genom direkt DNA-sekvensering av alla kodande regioner och exon-introngränser för att upptäcka ovanliga punktmutationer och små omarrangemang i betaglobingenen i enlighet med protokoll som tidigare beskrivits på annat håll.16 Beta-thalassemialleler som förblev okaraktäriserade genom ovanstående M-ARMS- och DNA-sekvenseringsmetoder undersöktes därefter med hjälp av gap-PCR för att upptäcka 3,4 kb deletion av hela betaglobingenen, vilket tidigare rapporterats i thailändska befolkningar.21
Resultat
Totalt 88 beta-thalassemialleler från åtta homozygota eller sammansatta heterozygota beta-thalassemipatienter, 57 beta-thalassemi/HbE-patienter och 15 heterozygota beta-thalassemipatienter ingick i vår studie. Alla 80 försökspersoner kom från obesläktade familjer och 93,8 % (75/80) av försökspersonerna bodde i Bangkok och andra provinser i centrala Thailand. Av dessa 65 patienter som hade kliniskt manifesterad beta-thalassemi uppvisade 92,3 % (60/65) och 7,7 % (5/65) av patienterna beta-thalassemi major respektive TI. Bland de 60 patienterna med beta-thalassemi major hade 86,7 % (52/60) av patienterna beta-thalassemi/HbE medan endast 13,3 % (8/60) av patienterna hade homozygot eller sammansatt heterozygot beta-thalassemi. Alternativt uppvisade alla patienter med homozygot eller sammansatt heterozygot beta-thalassemi och 91,2 % (52/57) av beta-thalassemi/HbE-patienterna i den här studien allvarlig transfusionsberoende beta-thalassemi major. När det gäller genotypen hos patienter med beta-thalassemi major var den vanligaste genotypen kodon 41/42 (-TCTT)/kodon 26 (G>A) eller betaE som stod för 40 %, och den näst vanligaste var kodon 17 (A>T)/betaE som stod för 18 %.3 % av alla beta-thalassemi major-genotyper (tabell 1 och figur 1).
  |
Tabell 1 Genotyp av 65 kliniskt manifesterade beta-thalassemi-patienter |
 |
Figur 1 Typ av genotyp hos beta-thalassemipatienter. |
För att klarlägga den molekylära grunden för dessa 88 beta-thalassemialleler karakteriserade vi först varje patients DNA med två uppsättningar M-ARMS. Sjuttiofem alleler (85,2 %) identifierades med denna metod, inklusive 33 alleler (37,5 %) av kodon 41/42 (-TCTT), 23 alleler (26.1 %) av kodon 17 (A>T), sju alleler (8 %) av IVS-I-5 (G>C), sex alleler (6,8 %) av IVS-II-654 (C>T), fyra alleler (4,5 %) av IVS-I-1 (G>T) och två alleler (2,3 %) av kodon 71/72 (+A) (tabell 2). Intressant nog identifierades inte nukleotid -28 (A>G) i vår studie. I 13 alleler (14,8 %) avslöjade ingen av uppsättningarna en mutation för beta-thalassemi. Direkt DNA-sekvensering av alla tre kodande exoner och flankerande exon-intron-övergångar i betaglobingenen var således nästa steg för att karaktärisera dessa 13 alleler. Sex ovanliga mutationer upptäcktes i nio alleler (10,2 %), inklusive fyra alleler (4,5 %) för kodon 35 (C>A) och en allel (1,1 %) för initieringskodonmutation (ATG>AGG), kodon 15 (G>A), kodon 19 (A>G), kodon 27/28 (+C) respektive kodon 123/124/125 (-ACCCCACC) (figur 2). De återstående allelerna, som inte karakteriserades genom M-ARMS och DNA-sekvensering, identifierades ytterligare genom gap-PCR för att upptäcka 3,4 kb deletion och denna deletion hittades i alla fyra återstående alleler (4,5 %).
 |
Tabell 2 Frekvensen av mutationer för betatalassemi i 88 alleler |
 |
Figur 2 Sex ovanliga mutationer som identifierats genom direkt DNA-sekvensering. |
Inalles karakteriserades 100 % av våra 88 beta-thalassemialleler genom en kombination av dessa tekniker, inklusive två uppsättningar M-ARMS, direkt DNA-sekvensering och gap-PCR för detektering av 3,4 kb-deletion. Med undantag för betaE-globingenen påträffades 13 olika mutationer för beta-thalassemi i den aktuella studien. Deletionen på 4 bp (-TCTT) i kodon 41/42 var den vanligaste mutationen som identifierades i vår studie och stod för 37,5 % av allelerna. Kodon 17 (A>T) var den näst vanligaste och stod för 26,1 % av allelerna. Tillsammans stod dessa två vanliga mutationer för mer än hälften (63,6 %) av de drabbade allelerna. Alla andra vanliga mutationer utom nukleotid -28 (A>G) stod för 21,6 % av allelerna.
Diskussion
Denna studie gav användbar information om frekvensfördelningen av mutationer av beta-thalassemi bland pediatriska patienter, särskilt i centrala Thailand, eftersom mer än 90 % av patienterna bodde i Bangkok och andra provinser i denna region. Totalt sett hade 92 % av de barn som hade kliniskt manifesterad beta-thalassemi fenotypen beta-thalassemia major och mer än 85 % av de pediatriska patienterna med beta-thalassemia major hade sammansatt heterozygot beta-thalassemia och HbE, vilket är mycket vanligt i Thailand.5,6,8,10 Frekvensen av betaE-globingenen ingick inte i analysen av mutationsfrekvensen för beta-thalassemi eftersom HbE lätt kan påvisas genom Hb-elektrofores.
Flera metoder kan fastställa mutationer för beta-thalassemi.14-17 Denna studie visade att M-ARMS upptäckte sju vanliga mutationer i kinesiska och sydostasiatiska populationer och kunde upptäcka 85,2 % av allelerna som i tidigare rapporter.19,20 Eftersom M-ARMS endast kan upptäcka en viss uppsättning mutationer som är specifika för de primers som används är direkt DNA-sekvensering nästa steg för att identifiera olika punktmutationer och små omarrangemang i betaglobingenen. Sex mindre frekventa mutationer identifierades i 10,2 % av allelerna. Nackdelen med DNA-sekvensering är att stora deletioner i genen inte kan upptäckas. Därför är gap-PCR det sista steget för att upptäcka 3,4 kb deletion, som tidigare rapporterats i thailändska populationer.21 En kombination av dessa tekniker kunde identifiera mutationer för beta-thalassemi i alla 88 alleler (100 %) hos de pediatriska patienterna i vår studie.
Med undantag för genen för beta-E-globin upptäcktes 13 olika mutationer för beta-thalassemi hos 80 obesläktade patienter. De två vanligaste mutationerna som upptäcktes var kodon 41/42 (-TCTT) och kodon 17 (A>T), som stod för 37,5 % respektive 26,1 % av de drabbade allelerna. Alla andra vanliga mutationer som upptäcktes med M-ARMS stod för 21,6 % av allelerna. I jämförelse med den tidigare studien av mutationer av beta-thalassemi i Thailand visade detta att frekvensen av mutationer i betaglobingenen som identifierades i vår studie var annorlunda. För det första identifierades inte nukleotiden -28 (A>G) i vår studie. Nukleotid -28 (A>G) är en beta+-thalassemimutation som orsakar den milda beta-thalassemifenotypen; därför har denna mutation endast observerats hos TI-patienter.22 Den här studien visade att TI var en minoritetsgrupp (mindre än 10 %) bland barnpatienter med symtomatisk beta-thalassemi. Detta kan förklara varför denna mutation inte observerades i vår studie. För det andra var frekvensen av andra vanliga mutationer inklusive kodon 41/42 (-TCTT), kodon 17 (A>T), IVS-II-654 (C>T), kodon 71/72 (+A), IVS-I-1 (G>T) och IVS-I-5 (G>C) i vår studie likartad med andra studier i centrala Thailand.8,10 Allelfrekvensen i den här studien skilde sig dock från studier i andra delar av Thailand. Codon 41/42 (-TCTT) var den vanligaste mutationen som identifierades i vår population, som huvudsakligen bodde i centrala Thailand. Denna frameshift-mutation är också den vanligaste mutationen som hittats i andra delar av Thailand, Folkrepubliken Kina och Sydostasien.20 Medan kodon 17 (A>T) var den näst vanligaste muterade allelen i centrala, norra och nordöstra Thailand var IVS-I-5 (G>C) den näst vanligaste i södra Thailand.23 IVS-I-5 (G>C) har tidigare rapporterats som den vanligaste mutationen bland thailändska muslimska patienter i södra Thailand.24 Dessutom stod kodon 71/72 (+A) för 2,3 % i den aktuella studien medan denna mutation stod för 6 % i norra16 och 13,1 % i nordöstra13 Thailand vilket tyder på en högre frekvens av denna mutation i detta område.
Sex ovanliga mutationer inklusive kodon 35 (C>A), kodon 15 (G>A), kodon 19 (A>G) eller Hb Malay, kodon 27/28 (+C), initieringskodonmutation (ATG>AGG) och kodon 123/124/125 (-ACCCCACC) identifierades genom direkt DNA-sekvensering. Även om ingen ny mutation upptäcktes, hittades i vår studie två sällsynta mutationer i Thailand, en initieringskodonmutation och en deletion på 8 bp i exon 3. Initieringskodonmutationen (ATG>AGG) beskrevs för första gången 1990 hos en kinesisk beta-thalassemipatient.25 I Thailand rapporterades denna mutation en gång 2005 hos två syskon med beta-thalassemi/HbE.26 Även om denna mutation allvarligt har påverkat syntesen av betaglobinkedjan och sannolikt orsakar beta0-thalassemi-fenotypen, hade alla tre rapporterade patienterna en mild fenotyp, vilket kan förklaras av samförärvning med heterozygot 3,7 kb deletion alfa-thal-2-genotyp hos den kinesiska patienten och sambandet med C>T-polymorfism vid -158(G)gamma-globingenen hos de två thailändska syskonen. Vår patients fenotyp var transfusionsberoende beta-thalassemi major, diagnostiserad vid 9 månaders ålder, medan genotypen var sammansatt heterozygot mellan kodon 41/42 (-TCTT) och initieringskodonmutation. Båda de muterade allelerna orsakar beta0-thalassemi-fenotypen. Åttabasdeletion i exon 3 eller kodon 123/124/125 (-ACCCCCACC) karakteriserades först hos nordöstra thailändska barn med den allvarliga beta-thalassemi/HbE-fenotypen.27 Denna deletion resulterar i syntesen av 135 aminosyror beta-X-kedjan (beta-Khon Kaen), som är mycket instabila och bryts ned snart efter translation. Omfattande förändring av aminosyror vid kodon 123 till 131 orsakade dominanta inklusionskroppsbeta-thalassemiegenskaper som hos vår patient.
Beta-thalassemi/HbE är ett stort thalassemiproblem i Thailand och kan förknippas med olika kliniska fenotyper som sträcker sig från lindrig thalassemi intermedia till allvarlig transfusionsberoende thalassemi major.5,6,8,10 Som i vår studie hade 85 % av beta-thalassemia major-patienterna och 100 % av TI-patienterna sammansatt heterozygot beta-thalassemia och HbE. Vid beta-thalassemi major var den vanligaste påträffade genotypen kodon 41/42 (-TCTT)/betaE (40 %), följt av kodon 17 (A>T)/betaE (18,3 %), IVS-I-5 (G>C)/betaE (8,3 %) och IVS-II-654 (C>T)/betaE (8,3 %), vilka utgjorde 75 % av alla påträffade genotyper. Med undantag för betaE-thalassemimutationen klassificerades alla beta-thalassemimutationer hos våra symtomatiska patienter som beta0-mutationer med undantag för kodon 19 (A>G) eller Hb Malay, som klassificerades som beta+-mutation och identifierades endast hos en patient.28
Interessant nog hade vår patient med kodon 19 (A>G)/betaE en transfusionsberoende thalassemimajormanifestation i stället för en mild TI. Å andra sidan manifesterade sammansatta heterozygoter bland fyra beta0-mutationer inklusive kodon 41/42 (-TCTT), kodon 17 (A>T), 3,4 kb-deletion, IVSI-1 (G>T) och betaE-genotypen sig som TI i stället för beta-thalassemi major-fenotyp. Detta fenomen kan förklaras av flera genetiska och icke-genetiska faktorer, som kan spela roll för att bestämma sjukdomens variabilitet.5,22,29,30 Den ytterligare genetiska analysen (genetiska modifierare) utfördes dock inte i vår studie.
Konceptet med preimplantatorisk genetisk diagnostik är att möjliggöra överföring av embryon till livmodern vid assisterade reproduktionsförfaranden. Denna teknik är snabb och lämplig som ett icke-invasivt kliniskt verktyg för att identifiera genetiska störningar i syfte att minska selektiva missfall som t.ex. thalassemia major.31,32 Vår studie avslöjade att olika mutationer av beta-thalassemi kanske kan tillämpas kliniskt på preimplantatoriskt genetiskt protokoll, vilket gör det möjligt att med hjälp av molekylärgenetisk analys förstärka en specifik region på betaglobingenen för ett par.
Slutsatsen är att den föreliggande studien visar på heterogeniteten hos de molekylära defekter som orsakar beta-thalassemi hos thailändska barn. Alla beta-thalassemialleler har karakteriserats med en kombination av tekniker, inklusive M-ARMS, direkt DNA-sekvensering och gap-PCR för detektion av 3,4 kb-deletion. Tretton mutationer stod för 100 % av beta-thalassemiagenerna i vår studie. Den erhållna frekvensen bör representera frekvensen av mutationer i betaglobingenen bland barnpatienter, som huvudsakligen bodde i centrala Thailand.
Acknowledgment
Denna studie godkändes av och fick finansiering från Phramongkutklao College of Medicine.
Oppenläggning
Författarna deklarerar inga intressekonflikter i detta arbete.
|
Weatherall DJ. Thalassemiasyndromen. Tex Rep Biol Med. 1980;40:323-333. |
|
|
Vichinsky EP. Förändrade mönster för thalassemi i världen. Ann N Y Acad Sci. 2005;1054:18-24. |
|
|
Cao A, Galanello R. Beta-thalassemi. Genet Med. 2010;12(2):61-76. |
|
|
Rund D, Rachmilewitz E. Beta-thalassemi. N Engl J Med. 2005; 353(11):1135-1146. |
|
|
Fucharoen S, Winichagoon P. Haemoglobinopathies in southeast Asia. Indian J Med Res. 2011;134:498-506. |
|
|
Fucharoen S, Ketvichit P, Pootrakul P, Siritanaratkul N, Piankijagum A, Wasi P. Kliniska manifestationer av beta-thalassemi/hemoglobin E-sjukdom. J Pediatr Hematol Oncol. 2000;22(6):552-557. |
|
|
Akhavan-Niaki H, Derakhshandeh-Peykar P, Banihashemi A, et al. En omfattande molekylär karakterisering av betathalassemi i en mycket heterogen population. Blood Cells Mol Dis. 2011;47(1):29-32. |
|
|
Fucharoen S, Winichagoon P. Hemoglobinopathies in Southeast Asia: molecular biology and clinical medicine. Hemoglobin. 1997;21(4): 299-319. |
|
|
Giardine B, van Baal S, Kaimakis P, et al. HbVar-databasen över mänskliga hemoglobinvarianter och thalassemimutationer: Uppdatering 2007. Hum Mutat. 2007;28(2):206. |
|
|
Wasi P, Pootrakul S, Pootrakul P, Pravatmuang P, Winichagoon P, Fucharoen S. Thalassemia in Thailand. Ann N Y Acad Sci. 1980;344: 352-363. |
|
|
Fukumaki Y, Fucharoen S, Fucharoen G, et al. Molekylär heterogenitet av beta-thalassemi i Thailand. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1992;23 Suppl 2:14-21. |
|
|
Thein SL, Winichagoon P, Hesketh C, et al. The molecular basis of beta-thalassemia in Thailand: application to prenatal diagnosis. Am J Hum Genet. 1990;47(3):369-375. |
|
|
Fucharoen S, Fucharoen G, Sriroongrueng W, et al. Molekylär grund för beta-thalassemi i Thailand: analys av mutationer för beta-thalassemi med hjälp av polymeraskedjereaktion. Hum Genet. 1989;84(1):41-46. |
|
|
Mirasena S, Shimbhu D, Sanguansermsri M, Sanguansermsri T. Detection of beta-thalassemia mutations using a multiplex amplification refractory mutation system assay. Hemoglobin. 2008;32(4):403-409. |
|
|
Bhardwaj U, Zhang YH, Lorey F, McCabe LL, McCabe ER. Molekylärgenetiska bekräftande tester från screeningprover för nyfödda för vanliga afroamerikanska, asiatiska indiska, sydostasiatiska och kinesiska mutationer för beta-thalassemi. Am J Hematol. 2005;78(4):249-255. |
|
|
Sirichotiyakul S, Saetung R, Sanguansermsri T. Analysis of beta-thalassemia mutationer in northern Thailand using an automated fluorescence DNA sequencing technique. Hemoglobin. 2003;27(2): 89-95. |
|
|
Fucharoen S, Fucharoen G, Ratanasiri T, Jetsrisuparb A, Fukumaki Y. En enkel icke-radioaktiv metod för att upptäcka beta-thalassemi/hbe-sjukdom: tillämpning på prenatal diagnostik. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1995;26 Suppl 1:278-281. |
|
|
Ho PJ, Hall GW, Luo LY, Weatherall DJ, Thein SL. Beta-thalassemi intermedia: är det möjligt att konsekvent förutsäga fenotyp utifrån genotyp? Br J Haematol. 1998;100(1):70-78. |
|
|
Old JM, Khan SN, Verma I, et al. En multicenterstudie för att ytterligare definiera den molekylära grunden för beta-thalassemi i Thailand, Pakistan, Sri Lanka, Mauritius, Syrien och Indien, och för att utveckla en enkel molekylärdiagnostisk strategi med hjälp av amplifikationsrefraktär mutationssystem-polymeraskedjereaktion. Hemoglobin. 2001;25(4):397-407. |
|
|
Kazazian HH Jr, Dowling CE, Waber PG, Huang S, Lo WH. Spektrumet av beta-thalassemiagener i Kina och Sydostasien. Blood. 1986;68(4):964-966. |
|
|
Sanguansermsri T, Pape M, Laig M, Hundrieser J, Flatz G. Beta nollthalassemi i en thailändsk familj orsakas av en deletion på 3,4 kb som omfattar hela betaglobingenen. Hemoglobin. 1990;14(2):157-168. |
|
|
Nuntakarn L, Fucharoen S, Fucharoen G, Sanchaisuriya K, Jetsrisuparb A, Wiangnon S. Molekylära, hematologiska och kliniska aspekter av thalassemia major och thalassemia intermedia i samband med Hb E-beta-talassemi i nordöstra Thailand. Blood Cells Mol Dis. 2009;42(1):32-35. |
|
|
Nopparatana C, Panich V, Saechan V, et al. Spektrumet av mutationer för beta-thalassemi i södra Thailand. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1995;26 Suppl 1:229-234. |
|
|
Laosombat V, Nopparatana C, Wongchanchailert M, Wiriyasateinkul A. Molekylär grund för beta-thalassemi hos thailändska muslimska patienter i södra Thailand. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1997; 28 Suppl 3:104-105. |
|
|
Lam VM, Xie SS, Tam JW, Woo YK, Gu YL, Li AM. En ny enkel nukleotidförändring vid initieringskoden (ATG—-AGG) identifierad i amplifierat genomiskt DNA från en kinesisk beta-thalassemisk patient. Blood. 1990;75(5):1207-1208. |
|
|
Viprakasit V, Chinchang W, Suwanthol L, Tanphaichitr VS. Gemensamt ursprung för en sällsynt mutation i initieringskoden för betaglobin (ATG–>AGG) hos asiater. Clin Lab Haematol. Dec 2005;27(6):409-415. |
|
|
Fucharoen G, Fuchareon S, Jetsrisuparb A, Fukumaki Y. Åttabasdeletion i exon 3 i betaglobingenen gav upphov till en ny variant (beta khon kaen) med en inklusionskropp av betatalassemi. Blood. 1991;78(2):537-539. |
|
|
Yang KG, Kutlar F, George E, et al. Molekylär karakterisering av mutationer i betaglobingenen hos malajiska patienter med Hb E-beta-talassemi och thalassemi major. Br J Haematol. 1989;72(1):73-80. |
|
|
Olivieri NF, Pakbaz Z, Vichinsky E. HbE/beta-thalassemi: grund för markerad klinisk mångfald. Hematol Oncol Clin North Am. 2010;24(6): 1055-1070. |
|
|
Rund D, Fucharoen S. Genetic modifiers in hemoglobinopathies. Cur Mol Med. 2008;8(7):600-608. |
|
|
Nasri NW, Jamal AR, Abdullah NC, Razi ZR, Mokhtar NM. Preimplantatorisk genetisk diagnos för beta-thalassemi med hjälp av DNA-analys av enstaka celler för kodon 17 och 26 i betaglobingenen. Arch Med Res. 2009;40(1):1-9. |
|
|
Hung CC, Chen SU, Lin SY, et al. Preimplantatorisk genetisk diagnos av beta-thalassemi med hjälp av realtids-polymeraskedjereaktion med fluorescensresonansenergiöverföringshybridiseringssonder. Anal Biochem. 2010;400(1):69-77. |