Spore Stain of Bacillus subtilis

Jedná se o preparát Bacillus subtilis, obarvený k průkazu endospor. Po růstu na Nutrient agaru při 37 stupních Celsia po dobu 24 hodin byly organismy vyjmuty z destičky a suspendovány v kapce vody na skleněném sklíčku. Voda se nechala zaschnout a poté se bakterie tepelně fixovaly na sklíčku 3-4násobným průchodem plamenem Bunsenova hořáku. Sklíčko se nechalo vychladnout. Endospory byly obarveny 5 % malachitovou zelení tak, že sklíčko bylo zalito barvivem a pod sklíčko byl umístěn plamen, dokud nezačal roztok barviva vytvářet páru. Zahřátý roztok malachitové zeleně byl ponechán na buňkách po dobu 5 minut. Průběžné napařování (zahřívání) sklíčka nebylo nutné. Sklíčko bylo opláchnuto vodou z vodovodu a buňky byly po dobu 30 sekund protibarveny 0,25 % Safraninem O (stejným protibarvivem používaným při Gramově reakci). Po dokončení postupu barvení, pokud endospory nejsou zelené, může být nutné upravit techniku tak, aby zahrnovala nepřetržité napařování malachitovou zelení po dobu 5 minut. Průměrná velikost buněk byla 3-5 mikronů.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.