Biol Res 41: 197-204, 2008
ČÁST
Rozdíly v lipogenezi a lipolýze u obézních a neobézních dospělých lidských adipocytů
MARIANA CIFUENTES, CECILIA ALBALA a CECILIA V ROJAS
Institute of Nutrition and Food Technology (INTA), Universidad de Chile, Santiago, Chile.
Dirección para Correspondencia
ABSTRACT
Předpokládá se, že rozdíly ve funkci a/nebo metabolismu adipocytů mezi obézními a štíhlými jedinci se mohou projevit ve funkčních abnormalitách tukové tkáně, které vedou k metabolickým poruchám při obezitě. Studovali jsme lipogenezi a lipolýzu omentálních adipocytů obézních (OB) a neobézních (NOB) lidí. Specifická aktivita lipogenního markerového enzymu G3PDH byla v celkových adipocytech OB o 50 % nižší než u osob s NOB. Omentální adipocyty osob s OB měly také nižší bazální lipolytickou levéis a nižší lipolytickou odpověď na p-adrenergní podnět. Deplece cholesterolu z plazmatické membrány adipocytů pomocí methyl β-cyklodextrinu způsobila lipolytický účinek na adipocyty obou skupin dohromady, ale při oddělené analýze obézních a štíhlých subjektů byla odpověď významná pouze u obézních. Předkládáme důkazy o odlišném lipogenním a lipolytickém profilu v omentálních adipocytech obézních jedinců a navrhujeme relevantní roli cholesterolu v plazmatické membráně, kde se vliv jeho odstranění na lipolýzu OB a NOB adipocytů liší.
Klíčové pojmy: adipocyt, cholesterol, lipogeneze, lipolýza, obezita, metabolismus triglyceridů.
ÚVOD
Přebytek viscerální tukové tkáně je spojen s mnoha zdravotními problémy. Zvýšená adipozita je spojena se zvýšeným objemem tukových buněk. Obézní jedinci tak mají ve srovnání se štíhlými osobami relativně velké množství hypertrofických adipocytů. Studie na zvířecích a lidských tukových buňkách prokázaly, že s větší velikostí buněk se mění několik metabolických funkcí adipocytů, například citlivost na inzulín a metabolismus glukózy, kromě toho se mění sekrece adipokinů a profily genové exprese (Bluher et al., 2004; Salans a Doherty, 1971; Salans et al., 1974; Smith, 1971; Yang et al., 2004). To vedlo k domněnce, že funkční převaha hypertrofických a/nebo metabolicky oslabených buněk v tukové tkáni je důležitou příčinou nízké odezvy tkáně na homeostatické signály, což udržuje nebo zhoršuje stav obezity. Za účelem ověření této hypotézy jsme se rozhodli studovat in vitro lipogenezi a lipolýzu v izolovaných omentálních adipocytech dospělých osob s OB a NOB. Vzhledem k tomu, že signalizace lipolýzy závisí na proteinech umístěných v kavernách a že narušení organizace těchto struktur bohatých na cholesterol bylo spojeno s metabolickými změnami u obézních adipocytů (Le Lay et al., 2004), hodnotili jsme také vliv odstranění cholesterolu z plazmatické membrány pomocí methyl(β-cyklodextrinu (M(βCD) v lipolýze OB a NOB adipocytů.
Předložené výsledky podtrhují rozdílný lipogenní a lipolytický profil mezi štíhlými a obézními jedinci. Naše údaje dokládají metabolický význam nižšího obsahu cholesterolu v plazmatické membráně adipocytů obézních osob, který ovlivňuje fyziologickou regulaci lipolýzy.
MATERIÁL A METODY
Izolace adipocytů
Lidský omentální tuk byl získán od 25 obézních (OB) a neobézních (NOB) osob, které podstoupily elektivní břišní operaci (buď žaludeční bypass, gynekologickou nebo gastrointestinální). Věkové rozmezí subjektů bylo 29-79 let a jejich index tělesné hmotnosti (BMI) se pohyboval mezi 18 a 54 kg/m2. Za hraniční bod pro definici obezity byl považován podle definice NIH BMI > 30 kg/m2. Dvanáct osob (9 mužů, 3 ženy) bylo NOB (BMI 23,3 ± 3,4 kg/m2), zatímco 13 osob bylo OB (BMI 38,2 ± 4,3 kg/m2; 4 muži, 9 žen). U sledovaných parametrů jsme nepozorovali žádný vliv pohlaví. Protokol byl schválen Institutional Review Board při INTA, University of Chile, a dárci podepsali informovaný souhlas. Tuková tkáň odebraná během operace byla ponořena do fyziologického roztoku a během jedné hodiny převezena do laboratoře ke zpracování. Po příjezdu byla tkáň několikrát promyta Hanksovým vyváženým solným roztokem (HBSS), přičemž byla odstraněna veškerá viditelná pojivová tkáň, krevní sraženiny a cévy, a poté rozmělněna na malé kousky (2-3 mm2) a kultivována v médiu MI99 (Invitrogen, Carlsbad, CA) doplněném antibiotiky (penicilin-streptomycin) při 37 °C v inkubátoru s řízenou atmosférou. Proběhla dvoudenní inkubace tkáně, aby se minimalizovala interindividuální variabilita způsobená faktory subjektu, jako je hormonální prostředí, aktuální zdravotní stav nebo léky. Adipocyty byly izolovány metodou založenou na práci Rodbella (1964). Stručně řečeno, mletá tuková tkáň byla inkubována s lg/1 kolagenázy typu I (Worthington Biochemical Corp. Lakewood, NJ) při 37 °C po dobu 60 minut za stálého míchání. Vzniklá buněčná suspenze byla přefiltrována přes sterilní gázovou podložku, a protože se adipocyty spontánně oddělily od vodné fáze, byly získány jemným odsátím plovoucí vrstvy pomocí plástové pipety a dvakrát promyty 5 objemy HBSS. Izolované adipocyty byly buď okamžitě použity ke studiu lipolýzy, nebo zmrazeny pro pozdější stanovení glycerol-β-fosfát dehydrogenázy (G3PDH).
Lipolytická reakce na (β-adrenergní stimul a detekce lipogenní aktivity (viz níže) prokázaly přítomnost životaschopných adipocytů po digesci tkáně.
Lipogeneze a lipolýza
Syntéza triglyceridů v adipocytu využívá jak pre-made, tak de novo-made mastné kyseliny, zatímco glycerolová páteř pochází z glycerol-β-fosfátu odvozeného od glukózy. Lipogenní kapacita byla hodnocena pomocí specifické aktivity enzymu G3PDH, který katalyzuje tvorbu glycerolové páteře triglyceridů z dihydroxyacetonfosfátu poskytovaného prostřednictvím glykolýzy. Tento enzym je považován za limitující pro syntézu triglyceridů v tukové tkáni, vzhledem k tomu, že v této tkáni je solé zdrojem glycerol-β-fosfátu. Jeho použití jako lipogenního markeru ve zralých adipocytech podporuje upregulace jeho mRNA a aktivity inzulinem (Moustaid et al., 1996; Rumberger et al., 2003). Stručně řečeno, izolované adipocyty byly homogenizovány (10 úderů při 1800 otáčkách za minutu pomocí homogenizačního systému Glas-Col, Glas-Col, IN) pomocí skleněné zkumavky vybavené teflonovým pěchovadlem při 4 °C v pufru obsahujícím 0,25M sacharózu, lmM EDTA, 50mM trietanolamin a lmM dithiotreithol. Homogenát byl centrifugován při 14 000 x g, 4 °C po dobu 30 minut. Aktivita G3PDH byla stanovena v supernatantu na základě metody Kozaka a Jensena (1974) měřením oxidace NADH (časový průběh změny absorbance při 340 nm při 37 °C) na mikrodestičkové čtečce (EL-808, BioTek Instruments Inc, Winooski, VT) za použití dihydroxyacetonfosfátu jako substrátu pro enzym. Reakce byla lineární vzhledem k času po celou dobu testu. Jedna jednotka enzymové aktivity odpovídá oxidaci 1 nmol NADH za minutu za výše uvedených podmínek. Koncentrace bílkovin v rozpustném extraktu byla měřena Bradfordovou metodou (Bradford, 1976).
Lipolýza byla hodnocena během 48 hodin tukové kultury měřením kumulativního glycerolu uvolněného do média kultury MI99 (činidlo pro stanovení volného glycerolu, Sigma, St Louis MO). Kromě toho byla hodnocena akutní lipolytická odpověď na (β-adrenergní podnět s deplecí cholesterolu v plazmatické membráně nebo bez ní (60minutová preinkubace s 10 mM MβCD ) měřením celkového glycerolu uvolněného během 90minutové inkubace 10% suspenze adipocytů při 37 °C s jemným kontinuálním vířením a přídavkem 10 μM isoproterenolu (Sigma) nebo vehikula. Pro hodnocení lipolýzy během kultivace tukové tkáně jsou hodnoty glycerolu vyjádřeny na mg tkáně, zatímco pro stanovení lipolýzy v suspenzích adipocytů jsou hodnoty normalizovány na celkové buněčné lipidy, jak popisuje Carpéné (2001), nebo v experimentech s lipolytickými látkami na příslušnou bazální (nestimulovanou) kontrolu. Celkové buněčné lipidy byly extrahovány metodou Dolého a Meinertze (1960) a stanoveny gravimetricky. Vzhledem k uváděnému nezávislému vztahu mezi velikostí buněk a lipolýzou, který může působit jako matoucí faktor, zejména v našich studiích porovnávajících subjekty s OB a NOB, bylo za nejvhodnější považováno vyjádření na mg lipidů. Jak ukázali Large et al. (1999), glycerolreláza vyjádřená na obsah lipidů vysoce koreluje s aktivitou hormonálně citlivé lipázy ve studiích obézních a štíhlých lidských subjektů a je relevantnější pro lipolytickou kapacitu než na počet buněk vzhledem k většímu objemu tukových buněk u obézních.
Statistika
Rozdíly mezi průměry byly analyzovány pomocí Studentova t testu a byly považovány za významné při p≤0,05. Pro evalúaci asociací u spojitých proměnných byl použit Pearsonův korelační koeficient. Údaje jsou vyjádřeny jako střední hodnoty ± SEM.
Výsledky
Lipogeneze
Specifická aktivita lipogenního enzymu G3PDH byla u osob s OB téměř poloviční ve srovnání s adipocyty z NOB (p<0,05, obr. 1). V souladu s tím byla zjištěna významná inverzní korelace mezi markerem lipogeneze a BMI subjektů (obr. 1, vložka, r2=0,31, p=0,01). Stojí za zmínku, že mezi subjekty OB a NOB nebyly zjištěny žádné rozdíly v koncentraci bílkovin (použité k normalizaci aktivity G3PDH), které by mohly tyto výsledky zkreslit.
Lipolýza
Relase glycerolu do inkubačního média během kultivace celé omentální tukové tkáně nebo izolovaných adipocytů byla použita jako ukazatel lipolytické aktivity. Jak bazální, tak izoproterenolem stimulovaná lipolýza byla nižší u izolovaných adipocytů osob s OB (p<0,05, resp. p<0,01, obr. 2). V souladu s těmito pozorováními byla zjištěna vysoce významná inverzní korelace mezi lipolýzou a BMI subjektu pro celou tkáň (r2=0,46, p<0,0005, vložka, obr. 2) a izolované adipocyty (bazální: r2=0,28, p<0,01; β-adrenergně stimulované: r2=0,17, p<0,05, n=20). Adipocyty obézních jedinců vykazovaly nižší odpověď na (β-adrenergní podnět ve srovnání s adipocyty jejich štíhlých protějšků (obr. 3, p<0,05).
Vystavení adipocytů 10 mM MβCD v podskupině 11 vzorků způsobilo významné zvýšení bazální lipolýzy. Toto zvýšení bylo přímo úměrné BMI subjektu (r2=0,5, p<0,05, obr. 4). Lipolytická odpověď na (β-adrenergní stimulaci byla významně snížena, když byly adipocyty vystaveny M(βCD (345 ± 50 % vs. 199 ± 33 %, p< 0,05). Zajímavé je, že při porovnání účinku M(βCD oproti vehikulu bylo pozorováno významné snížení lipolytické odpovědi na isoproterenol u adipocytů od osob s BMI>40 kg/ m2 (morbidně obézní podle definice NIH), zatímco u štíhlých osob nebyl zjištěn žádný významný rozdíl (obr. 5). V souladu s tím byla zjištěna významná korelace mezi BMI a poměrem lipolytické odpovědi na 10 μM isoproterenolu v přítomnosti a nepřítomnosti 10 mM M(βCD (r2=0,46, p<0,05).
DISKUSE
V této práci jsme studovali lipogenezi a lipolýzu v adipocytech izolovaných z omentální tukové tkáně dospělých OB a NOB v širokém rozmezí BMI (18-54 kg/m2). Naše pozorování ukazují, že specifická aktivita markeru lipogeneze G3PDH v OB byla poloviční než v adipocytech jejich NOB protějšků. Na druhou stranu vyšší BMI byl spojen s nižší bazální a (β-adrenergně stimulovanou lipolýzou a větší citlivostí na zhoršení signalizace plazmatické membrány v důsledku odstranění cholesterolu. Větší akumulace triglyceridů v adipocytech OB může souviset s nižší lipolytickou aktivitou, kterou jsme u této skupiny pozorovali, jak navrhují i jiní (Langin et al., 2005). Kromě toho nižší specifická aktivita G3PDH, kterou jsme zjistili v OB, což může působit kontraintuitivně, by mohla představovat sníženou schopnost ukládat přebytečné cirkulující triglyceridy, což by pravděpodobně vedlo k hypertriglyceridemii a akumulaci tuku v jiných oblastech těla se známými škodlivými účinky spojenými s metabolickým syndromem.
Při použití přístupu in vivo u lidí Dodt et al. (2003) pozorovali otupenou lipolytickou odpověď na intraneurální stimulaci u obézních žen, což je v souladu s našimi výsledky in vitro a podporuje názor, že obezita může být alespoň částečně spojena s nízkou lipolytickou odpovědí na aktivaci sympatiku. V souladu s tím Gómez-Ambrosi et al. (2004) studovali vzorec genové exprese omentální tukové tkáně a ukázali, že obézní subjekty mají sníženou, resp. zvýšenou expresi genů induktorů a represorů lipolýzy.
V literatuře existují značné rozpory ohledně normalizace údajů o lipolýze. Vzhledem k uváděnému přímému vztahu mezi velikostí adipocytů a lipolýzou (Large et al., 1999) a většímu relativnímu množství větších adipocytů u obézních (Large et al., 1999) se očekává, že tuková tkáň bude vykazovat větší neupravenou lipolýzu u obézních než u jedinců s NOB. Proto, abychom se vyhnuli matoucímu faktoru způsobenému rozdílnou distribucí velikosti buněk u OB oproti NOB, byly naše hodnoty glycerol reléázy normalizovány jejich vyjádřením na mg celkového lipidu, čímž byla posouzena lipolytická aktivita pro danou hmotnost lipidů. Na podporu toho studie obézních a štíhlých lidí pozorovaly vysokou korelaci mezi aktivitou klíčového lipolytického enzymu HSL (hormone sensitive Upase) a adipocytární glycerol reléázou vyjádřenou na obsah lipidů (Large et al., 1999). Autoři uvedli, že obsah lipidů má větší význam pro lipolytickou kapacitu než normalizace na počet buněk, a to vzhledem ke zvýšenému objemu tukových buněk u obézních. Stojí za zmínku, že (β-adrenergní stimulace nad bazálními podmínkami se také ukázala být nižší u OB subjektů a toto hodnocení je nezávislé na velikosti nebo počtu buněk, vzhledem k tomu, že je normalizováno s odpovídající kontrolou (každá bazální valué).
Úloha obsahu cholesterolu v membráně pro integritu kavely, specifický přenos signálu a správnou funkci buněk již byla uznána (Le Lay et al. 2001). Bylo prokázáno, že hypertrofické adipocyty mají narušený metabolismus spolu s nižším obsahem cholesterolu v plazmatické membráně (Le Lay et al. 2001). Naše pozorování rozšiřují pozorování Le Lay et al. (2001, 2004), kteří ukázali, že deplece cholesterolu v adipocytech vyvolává inzulinovou rezistenci a změny v expresi řady genů důležitých pro tukový metabolismus. Tyto výsledky byly uvedeny jako důkaz snížení cholesterolu v plazmatické membráně jako spojovacího článku mezi hypertrofií adipocytů a metabolickým postižením, což podporují i naše současné výsledky. Naše experimenty vystavující adipocyty M(βCD způsobily významné zvýšení bazální lipolýzy (očekávané po změně integrity kavely plazmatické membrány, což vedlo ke snížení aktivity fosfodiesterázy 3B ) a následně ke snížení lipolytické odpovědi na (β-adrenergní podnět. Zajímavé je, že jsme pozorovali významnou souvislost mezi vlivem M(βCD na bazální lipolýzu a BMI. Navíc významná korelace mezi BMI a poměrem isoproterenolu k bazální lipolýze v přítomnosti a nepřítomnosti M(βCD podporuje větší náchylnost adipocytů obézních subjektů ke změněné signalizaci plazmatické membrány způsobené deplecí cholesterolu.
Zvětšené tukové buňky, o kterých je známo, že jsou hojnější s rostoucím BMI subjektů (Julien et al., 1989; Salans et al., 1973; Van Harmelen et al., 2003) jsou rezistentní na inzulín (Olefsky 1977) a vykazují odlišný vzorec sekrece, který je spojen s poruchami spojenými s obezitou (Imbeault et al., 1999; Van Harmelen et al., 2000).
Zajímavé je, že myši s knokautem inzulínového receptoru specifickým pro tukovou tkáň (Bluher et al., 2004) vykazují polarizaci adipocytů na dvě subpopulace malých (<50μm průměr) a velkých >1OOμm) buněk, což je doprovázeno mimo jiné rozdíly v syntéze triglyceridů a lipolýze. Zde uvedená pozorování ukazují vnitřní rozdíly v metabolismu triglyceridů mezi omentálními adipocyty osob s OB a NOB a navrhujeme, že obohacení o hypertrofované adipocyty a adipocyty zbavené membránového cholesterolu může být příčinou těchto změn. Je možné, že zhoršená lipolytická odpověď časem přispívá ke zvětšení triglyceridového depa. Snížená schopnost ukládat další triglyceridy by vedla ke zvýšení množství cirkulujících lipidů, což by zvýšilo rizika spojená s metabolickým syndromem.
Podle našich znalostí žádná jiná studie nehodnotila lipogenezi a lipolýzu v omentálních adipocytech z lidských OB a NOB subjektů. Tato práce ukazuje relevantní rozdíly v metabolismu triglyceridů v omentálních adipocytech u obézních osob ve srovnání s neobézními a naznačuje, že adipocyty obézních jedinců jsou náchylnější ke snížení obsahu cholesterolu v plazmatické membráně. I když jsme měli v úmyslu minimalizovat předmětné faktory, nemůžeme vyloučit, že komorbidity přítomné u obézních osob mohou mít vliv na odlišné chování tukových buněk. Srovnání manipulace s triglyceridy mezi těmito skupinami a v tukovém depu s takovým patogenním významem pomáhá pochopit rozdíly v metabolismu a reaktivitě, které mohou být cílem farmakologické intervence a vyžadují další studie.
PODĚKOVÁNÍ
Rádi bychom poděkovali Dr. Miguelu A. Celisovi z nemocnice Tisné, Dr. Leonardu Rodríguezovi z nemocnice DIPRECA a Dr. Cristianu Cavallovi, Jamesi Hamiltonovi a Gonzalu Wiedmaierovi z nemocnice Padre Hurtado za neocenitelnou pomoc při získávání tukové tkáně, stejně jako paní Mgr. Marisol Blanco a panu Rodrigu Brücherovi za technickou pomoc.
GRANT SUPPORT
Podpořeno granty DI-U de Chile (č. Mult 04/06-2 pro C. Rojase a č. 1-04/01-2 pro M. Cifuentese) a FONDECYT (č. 1070632 pro C. C. Rojas, N°1080232 to M. Cifuentes).
BLUHER M, WILSON-FRITCH L, LESZYK J, LAUSTSEN P G, COR VERA S, KAHN CR (2004) Role of insulin action and cell size on protein expression patterns in adipocytes. J Biol Chem 279: 31902-31909.
BRADFORD MM (1976) Rychlá a citlivá metoda kvantifikace mikrogramových množství bílkovin využívající princip vazby bílkovinného barviva. Anal Biochem 72: 248-254.
CARPENÉ C (2001) Testy adrenergních receptorů včetně měření lipolýzy a vazby. In: Srovnávací studie k problematice adrenalinových receptorů: AILHAUD G (ed) Adipose Tissue Protocols. New Jersey: Humana Press. s. 129-140.
DODT C, LONNROTH P, WELLHONER JP, FEHM HL, ELAM M (2003) Sympatická kontrola bílé tukové tkáně u štíhlých a obézních lidí. Acta Physiol Scand 177: 351-357.
DOLÉ VP, MEINERTZ H (1960) Mikrostanovení mastných kyselin s dlouhým řetězcem v plazmě a tkáních. J Biol Chem 235: 2595-2599.
GÓMEZ-AMBROSI J, CATALÁN V, DIEZ-CABALLERO A, MARTÍNEZ-CRUZ LA, GIL MJ, GARCÍA-FONCILLAS J, CIENFUEGOS JA, SALVADOR J, MATO JM, FRUHBECK G (2004) Gene expression profile of omental adipose tissue in human obesity. FASEB J 18: 215-217.
IMBEAULT P, LEMIEUX S, PRUDHOMME D, TREMBLAY A, NADEAU A, DESPRES JP, MAURIEGE P (1999) Relationship of visceral adipose tissue to metabolic risk factors for coronary heart disease: is there a contribution of subcutaneous fat cell hypertrophy? Metabolism 48: 355-362.
JULIEN P, DESPRES JP, ÁNGEL A (1989) Scanning electrón microscopy of very small fat cells and mature fat cells in human obesity (Skenovací elektronová mikroskopie velmi malých tukových buněk a zralých tukových buněk u lidské obezity). J Lipid Res 30: 293-299.
KOZAK LP, JENSEN JT (1974) Genetická a vývojová kontrola múltiple forem L-glycerol-3-fosfát dehydrogenázy. J Biol Chem 249: 7775-7781.
LANGIN D, DICKER A, TAVERNIER G, HOFFSTEDT J, MAIRAL A, RYDEN M, ARNER E, SICARD C, JENKINS M, VIGUERIE N, VAN HARMELEN V, GROSS RW, HOLM C, ARNER P (2005) Adipocyte Upases and defect of lipolysis in human obesity. Diabetes 54: 3190-3197.
LARGE V, REYNISDOTTIR S, LANGIN D, FREDBY K, KLANNEMARK M, HOLM C, ARNER P (1999) Decreased expression and function of adipocyte hormone-sensitive Upase in subcutaneous fat cells of obese subjects. J Lipid Res 40: 2059-2066.
LE LAY S, KRIEF S, FARNIER C, LEFRERE I, LE LIEPVRE X, BAZIN R, FERRÉ P, DUGAIL I (2001) Cholesterol, signál závislý na velikosti buňky, který reguluje metabolismus glukózy a expresi genů v adipocytech. J Biol Chem 276: 16904-16910.
LE LAY S, FERRÉ P, DUGAIL I (2004) Adipocyte cholesterol balance in obesity. Biochem Soc Trans 32: 103-106.
MOUSTAID N, JONES BH, TAYLOR JW (1996) Insulin zvyšuje aktivitu lipogenních enzymů v lidských adipocytech v primární kultuře. J Nutr 126: 865-870.
NILSSON R, AHMAD F, SWARD K, ANDERSSON U, WESTON M, MANGANIELLO V, DEGERMAN E (2006) Plasma membrane cyclic nucleotide phosphodiesterase 3B (PDE3B) is associated with caveolae in primary adipocytes. Cell Signal 18: 1713-1721.
OLEFSKY JM (1977) Mechanismy snížené reaktivity velkých adipocytů na inzulin. Endocrinology 100: 1169-1177.
RODBELL M (1964) Metabolismus izolovaných tukových buněk. I. Vliv hormonů na metabolismus glukózy a lipolýzu. J Biol Chem 239: 375-380.
RUMBERGER JM, WU T, HERING MA, MARSHALL S (2003) Role biosyntézy hexosaminu v glukózou zprostředkované up-regulaci levé části mRNA lipogenních enzymů: účinky glukózy, glutaminu a glukosaminu na levé části mRNA glycerofosfátdehydrogenázy, syntázy mastných kyselin a acetyl-CoA karboxylázy. J Biol Chem 278: 28547-28552.
SALANS LB, DOUGHERTY JW (1971): The effect of insulin upon glucose metabolism by adipose cells of different size Vliv obsahu buněčných lipidů a proteinů, věku a stavu výživy. J Clin Invest 50: 1399-1410.
SALANS LB, CUSHMAN SW, WEISMANN RE (1973): Studie lidské tukové tkáně. Velikost a počet tukových buněk u neobézních a obézních pacientů. J Clin Invest 52: 929-941.
SALANS SB, BRAY GA, CUSHMAN SW, DANFORTH JR E, GLENNON JA, HORTON ES, SIMS EA (1974) Glucose metabolism and the response to insulin by human adipose tissue in spontaneous and experimental obesity. Vliv složení stravy a velikosti tukových buněk. J Clin Invest 53: 848-856.
SMITH U (1971) Vliv velikosti buněk na syntézu lipidů lidskou tukovou tkání in vitro. J Lipid Res 12: 65-70.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, WEYER C, FOLEY JE, BOGARDUS C, TATARANNI PA, PRATLEY RE (2000) Enlarged subcutaneous abdominal adipocyte size, but not obesity itself, predicts type II diabetes independent of insulin resistance. Diabetologia 43: 1498-1506.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, HAUNER H (2003) Effect of BMI and age on adipose tissue cellularity and differentiation capacity in women. Int J Obes Relat Metab Disord 27: 889-895.
YANG X, JANSSON PA, NAGAEV I, JACK MM, CARVALHO E, SUNNERHAGEN KS, CAM MC, CUSHMAN SW, SMITH U (2004) Evidence of impaired adipogenesis in insulin resistance. Biochem Biophys Res Commun 317: 1045-1051.