Biol Res 41: 197-204, 2008
ARTICLE
Verschillen in lipogenese en lipolyse bij adulte menselijke adipocyten met en zonder obesitas
MARIANA CIFUENTES, CECILIA ALBALA en CECILIA V ROJAS
Instituut voor voeding en voedseltechnologie (INTA), Universidad de Chile, Santiago, Chili.
Dirección para Correspondencia
ABSTRACT
Er is voorgesteld dat verschillen in adipocytenfunctie en/of metabolisme tussen zwaarlijvige en magere individuen zich kunnen manifesteren in functionele vetweefselafwijkingen die leiden tot metabole stoornissen bij zwaarlijvigheid. Wij bestudeerden lipogenese en lipolyse van omental adipocyten van obese (OB) en niet-obese (NOB) mensen. De specifieke activiteit van het lipogene markerenzym G3PDH was 50% lager in totale adipocyten van OB vergeleken met die van NOB personen. Omentale adipocyten van OB personen hadden ook een lagere basale lipolytische levéis, en een lagere lipolytische respons op p-adrenerge stimulus. Cholesteroldepletie van het plasmamembraan van adipocyten met behulp van methyl-β-cyclodextrine veroorzaakte een lipolytisch effect op adipocyten van beide groepen samen, maar wanneer zwaarlijvige en magere personen afzonderlijk werden geanalyseerd, was de respons alleen significant bij de zwaarlijvige. Wij presenteren bewijs voor een verschillend lipogeen en lipolytisch profiel in de omental adipocyten van obese individuen, en stellen een relevante rol voor van plasmamembraan cholesterol, waarbij de invloed van de verwijdering ervan in OB en NOB adipocyten lipolyse verschilt.
Key terms: adipocyte, cholesterol, lipogenese, lipolyse, obesitas, triglyceridenmetabolisme.
INLEIDING
Het teveel aan visceraal vetweefsel wordt in verband gebracht met talrijke gezondheidsproblemen. Een verhoogde adipositas wordt geassocieerd met een verhoogd vetcelvolume. Zo hebben zwaarlijvige individuáis een relatief grote hoeveelheid hypertrofische adipocyten in vergelijking met magere personen. Studies op dierlijke en menselijke vetcellen hebben vastgesteld dat verschillende metabolische functies van adipocyten veranderen bij een grotere celgrootte, zoals insulinegevoeligheid en glucosemetabolisme, naast adipokine secretie en genexpressie profielen (Bluher et al., 2004; Salans and Doherty, 1971; Salans et al., 1974; Smith, 1971; Yang et al., 2004). Dit heeft geleid tot de suggestie dat een functionele predominantie van hypertrofische en/of metabolisch gestoorde cellen in vetweefsel een belangrijk oorzakelijk effect is voor een lage respons van het weefsel op homeostatische signáis, waardoor de obesitastoestand bestendigd of verergerd wordt. Om deze hypothese te testen, bestudeerden we in vitro lipogenese en lipolyse in geïsoleerde omental adipocyten van OB en NOB volwassenen. Aangezien de signalering van lipolyse afhankelijk is van eiwitten die zich in caveolae bevinden, en verstoring van de organisatie van deze cholesterolrijke structuren in verband is gebracht met metabole veranderingen in adipocyten met obesitas (Le Lay et al, 2004), evalueerden we ook de invloed van verwijdering van cholesterol uit de plasmamembraan met behulp van methyl (β-cyclodextrine (M(βCD) in OB en NOB adipocyten lipolyse.
De huidige resultaten onderstrepen een verschillend lipogeen en lipolytisch profiel tussen magere en obese personen. Onze gegevens bewijzen de metabole relevantie van het lagere cholesterolgehalte in de plasmamembraan in adipocyten van zwaarlijvige personen, die de fysiologische regulatie van lipolyse beïnvloeden.
MATERIALEN EN METHODEN
Isolatie van adipocyten
Humaan omentaal vet werd verkregen van 25 zwaarlijvige (OB) en niet-zwaarlijvige (NOB) personen die electieve abdominale chirurgie ondergingen (ofwel gastric bypass, gynaecologisch of gastro-intestinaal). De leeftijd van de proefpersonen lag tussen 29-79 jaar en hun body mass index (BMI) varieerde tussen 18 en 54 kg/m2. Het afkappunt om obesitas te definiëren werd beschouwd volgens de NIH-definitie van BMI > 30 kg/m2. Twaalf proefpersonen (9 mannen, 3 vrouwen) waren NOB (BMI 23,3 ± 3,4 kg/m2), terwijl 13 OB waren (BMI 38,2 ± 4,3 kg/m2; 4 mannen, 9 vrouwen). We hebben geen enkele invloed van het geslacht op de bestudeerde parameters waargenomen. Het protocol werd goedgekeurd door de Institutional Review Board van INTA, Universiteit van Chili, en informed consent werd ondertekend door de donoren. Tijdens de operatie verwijderd vetweefsel werd ondergedompeld in een zoutoplossing en naar het laboratorium vervoerd om binnen een uur te worden verwerkt. Bij aankomst werd het weefsel verschillende malen gewassen met Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS), waarbij al het zichtbare bindweefsel, bloedklonters en bloedvaten werden verwijderd, en vervolgens in kleine stukjes (2-3 mm2) gehakt en gekweekt in MI99 (Invitrogen, Carlsbad, CA) médium, aangevuld met antibiotica (penicilline-streptomycine) bij 37°C in een incubator met gecontroleerde atmosfeer. Het weefsel werd gedurende 2 dagen geïncubeerd om de inter-individuele variabiliteit, veroorzaakt door factoren zoals het hormonale milieu, de huidige gezondheidstoestand of medicatie, tot een minimum te beperken. Adipocyten werden geïsoleerd volgens een methode die gebaseerd is op het werk van Rodbell (1964). Kort gezegd werd gehakt vetweefsel geïncubeerd met lg/1 collagenase type I (Worthington Biochemical Corp. Lakewood, NJ) bij 37°C gedurende 60 minuten onder voortdurend mengen. De resulterende celsuspensie werd gefiltreerd door een steriel gaasje, en als adipocyten spontaan scheiden van de waterige fase, werden ze teruggewonnen door voorzichtig aspireren de drijvende laag met een plástic pipet, en tweemaal gewassen met 5 volumes van HBSS. Geïsoleerde adipocyten werden ofwel onmiddellijk gebruikt voor lipolyse studies, of bevroren voor latere glycerol-β-fosfaat dehydrogenase (G3PDH) bepaling.
De lipolytische responsiviteit op (β-adrenerge stimulus en detectie van lipogene activiteit (zie hieronder) bewees de aanwezigheid van levensvatbare adipocyten na de digestie van het weefsel.
Lipogenese en Lipolyse
De synthese van triglyceriden in de adipocyt gebruikt zowel vooraf gemaakte als de novo-gemaakte vetzuren, terwijl de glycerolruggengraat afkomstig is van glucose-afgeleid glycerol-β-fosfaat. De lipogene capaciteit werd beoordeeld aan de hand van de specifieke activiteit van het enzym G3PDH, dat de vorming van de glycerolruggengraat van triglyceriden katalyseert uit dihydroxyacetonfosfaat dat via de glycolyse wordt geleverd. Dit enzym wordt beschouwd als de snelheidslimiet voor de triglyceridesynthese in vetweefsel, aangezien het in dit weefsel de enige bron van glycerol-β-fosfaat is. Het gebruik ervan als lipogene marker in rijpe adipocyten wordt ondersteund door de upregulatie van zijn mRNA en activiteit door insuline (Moustaid et al., 1996; Rumberger et al., 2003). In het kort werden geïsoleerde adipocyten gehomogeniseerd (10 slagen bij 1800 rpm met een Glas-Col homogenizer systeem, Glas-Col, IN) met behulp van een glazen buis uitgerust met een teflon stamper, bij 4°C in een buffer die 0,25M sucrose, lmM EDTA, 50mM triethanolamine en lmM dithiotreithol bevat. Het homogenaat werd gecentrifugeerd bij 14.000 xg, 4°C gedurende 30 min. De G3PDH-activiteit werd in het supernatant bepaald volgens de methode van Kozak en Jensen (1974), door de oxidatie van NADH te meten (tijdsverloop van de verandering in extinctie bij 340 nm bij 37°C) op een microplaatlezer (EL-808, BioTek Instruments Inc, Winooski, VT), met dihydroxyacetonfosfaat als substraat voor het enzym. De reactie was lineair ten opzichte van de tijd gedurende de testperiode. Eén eenheid enzymactiviteit komt overeen met de oxidatie van 1 nmol NADH per minuut onder de hierboven aangegeven omstandigheden. De eiwitconcentratie in het oplosbare extract werd gemeten met de Bradford-methode (Bradford, 1976).
Lipolyse werd gedurende de 48 uur van de vetkweek beoordeeld door meting van de cumulatieve glycerol die in het MI99-kweekmedium vrijkwam (Free glycerol determination reagent, Sigma, St Louis MO). Bovendien werd de acute lipolytische respons op (β-adrenerge stimulus, met of zonder uitputting van plasmamembraan cholesterol (60 min preincubatie met 10 mM MβCD ), geëvalueerd door het meten van de totale glycerol vrijgegeven tijdens een 90-min incubatie van 10% adipocyt suspensies bij 37 ° C met zachte continue swirling en de toevoeging van 10μM isoproterenol (Sigma) of voertuig. Voor lipolyse beoordeling tijdens vetweefsel cultuur, worden glycerol valúes uitgedrukt per mg weefsel, terwijl voor lipolyse assay in adipocyte schorsingen, valúes worden genormaliseerd naar totaal cellulaire lipiden, zoals beschreven door Carpéné (2001) of, in experimenten met lipolytische middelen, om de respectieve basale (niet-gestimuleerde) controle. Het totaal aan cellulaire lipiden is geëxtraheerd volgens de methode van Dolé en Meinertz (1960), en gravimetrisch bepaald. In het licht van een gerapporteerde onafhankelijke relatie tussen celgrootte en lipolyse die als confounder kan fungeren, vooral in onze studies waarin OB- en NOB-proefpersonen werden vergeleken, werd de uitdrukking per mg lipide het meest adequaat geacht. Zoals aangetoond door Large et al. (1999), is glycerol reléase uitgedrukt per lipidegehalte sterk gecorreleerd met de activiteit van hormoongevoelig lipase in studies van zwaarlijvige en magere menselijke proefpersonen, en relevanter voor de lipolytische capaciteit dan per celaantal vanwege het toegenomen vetcelvolume bij zwaarlijvigen.
Statistieken
De verschillen tussen de gemiddelden werden geanalyseerd met behulp van de Student’s t-test en werden significant geacht bij p≤0.05. De correlatiecoëfficiënt van Pearson werd gebruikt om de verbanden voor continue variabelen te evalueren. Gegevens worden uitgedrukt in gemiddelden ± SEM.
RESULTATEN
Lipogenese
De specifieke activiteit van het lipogene enzym G3PDH was bijna de helft bij OB proefpersonen vergeleken met die in adipocyten van NOB (p<0.05, Fig. 1). In overeenstemming hiermee was er een significante omgekeerde correlatie tussen de lipogenesemarker en de BMI van de proefpersonen (Fig. 1, inzet, r2=0,31, p=0,01). Opgemerkt zij dat er geen verschillen in eiwitconcentratie (gebruikt om de G3PDH-activiteit te normaliseren) waren tussen OB- en NOB-proefpersonen die deze resultaten hadden kunnen vertekenen.
Lipolyse
De reléase van glycerol aan het incubatiemedium tijdens de kweek van heel omental adipose weefsel of geïsoleerde adipocyten werd gebruikt als een indicator van lipolytische activiteit. Zowel de basale als de door isoproterenol gestimuleerde lipolyse waren lager in geïsoleerde adipocyten van OB subjecten (p<0.05 en p<0.01, respectievelijk, Fig. 2). In overeenstemming met deze waarnemingen was er een zeer significante omgekeerde correlatie tussen lipolyse en de BMI van de proefpersoon voor het gehele weefsel (r2=0,46, p<0,0005, inzet, Fig. 2) en geïsoleerde adipocyten (basaal: r2=0,28, p<0,01; β-adrenergisch gestimuleerd: r2=0,17, p<0,05, n=20). Adipocyten van zwaarlijvige personen vertoonden een lagere respons op (β-adrenerge stimulus in vergelijking met die van hun magere tegenhangers (fig. 3, p<0,05).
Exposure of adipocytes to 10 mM MβCD in a subset of 11 samples caused a significant increase in basal lipolysis. Deze toename was recht evenredig met de BMI van de proefpersoon (r2=0,5, p<0,05, Fig. 4). De lipolytische respons op (β-adrenerge stimulatie werd significant verminderd wanneer adipocyten werden blootgesteld aan M(βCD (345 ± 50 % vs. 199 ± 33 %, respectievelijk, p< 0.05). Interessant is dat bij vergelijking van het effect van M(βCD versus voertuig, een significante vermindering van de lipolytische respons op isoproterenol werd waargenomen bij adipocyten van personen met een BMI>40 kg/ m2 (morbide obesitas, volgens de NIH-definitie), terwijl magere personen geen significant verschil vertoonden (Fig. 5). In overeenstemming hiermee werd een significante correlatie gevonden tussen BMI en de verhouding van lipolytische respons op 10μM isoproterenol in de aanwezigheid en afwezigheid van 10 mM M(βCD (r2=0,46, p<0,05).
DISCUSSIE
In het huidige werk bestudeerden we lipogenese en lipolyse in adipocyten geïsoleerd uit omental adipose weefsel van OB en NOB volwassenen binnen een brede range van BMI (18-54 kg/m2). Onze waarnemingen tonen aan dat de specifieke activiteit van de lipogenese marker G3PDH in OB de helft was van die in de adipocyten van hun NOB tegenhangers. Anderzijds werden hogere BMI’s geassocieerd met een lagere basale en (β-adrenergisch gestimuleerde) lipolyse en een grotere gevoeligheid voor de verstoring van de plasmamembraan signalering als gevolg van cholesterolverwijdering. Een grotere accumulatie van triglyceriden in de OB adipocyt kan in verband staan met de lagere lipolytische activiteit die wij in deze groep waarnamen, zoals anderen ook hebben voorgesteld (Langin et al., 2005). Bovendien zou de lagere G3PDH-specifieke activiteit die we in de OB vonden, wat contra-intuïtief kan zijn, een verminderde capaciteit kunnen vertegenwoordigen om het teveel aan circulerende triglyceriden op te slaan, wat waarschijnlijk zal resulteren in hypertriglyceridemie en vetophoping in andere regio’s van het lichaam, met de bekende nadelige effecten die geassocieerd worden met het metabool syndroom.
Bij een in vivo benadering bij mensen zagen Dodt e.a. (2003) een afgestompte lipolytische respons op intraneurale stimulatie bij zwaarlijvige vrouwen, hetgeen overeenkomt met onze in vitro resultaten en het idee ondersteunt dat zwaarlijvigheid althans gedeeltelijk kan samenhangen met een geringe lipolytische respons op sympathische activering. Gómez-Ambrosi et al. (2004) onderzochten het genexpressiepatroon van omentalig vetweefsel en toonden aan dat zwaarlijvige personen een verlaagde en verhoogde expressie hadden van respectievelijk lipolyse-inducerende en -onderdrukkende genen.
Er is een aanzienlijke discrepantie in de literatuur met betrekking tot de normalisatie van lipolysegegevens. Gezien de gerapporteerde directe relatie tussen adipocyte celgrootte en lipolyse (Large et al., 1999), en de grotere relatieve overvloed van grotere adipocyten bij zwaarlijvige mensen (Large et al., 1999), wordt verwacht dat vetweefsel bij zwaarlijvige mensen een grotere ongecorrigeerde lipolyse vertoont dan bij NOB individuáis. Dus, om een verstorende factor als gevolg van verschillende celgrootte verdeling in OB versus NOB te vermijden, werden onze glycerol reléase valúes genormaliseerd door ze uit te drukken per mg van de totale lipide, dus het beoordelen van lipolytische activiteit voor een bepaalde lipide massa. Dit wordt ondersteund door studies bij zwaarlijvige en magere mensen, waarin een hoge correlatie is waargenomen tussen de activiteit van het belangrijkste lipolytische enzym HSL (hormoongevoelige Upase) en adipocytaire glycerolreléase, uitgedrukt per lipidegehalte (Large et al., 1999). De auteurs stelden dat het lipidegehalte relevanter is voor de lipolytische capaciteit dan de normalisatie per celaantal, vanwege het toegenomen vetcelvolume bij zwaarlijvigen. Het is vermeldenswaard dat (β-adrenerge stimulatie over basale condities ook lager bleek te zijn bij OB proefpersonen, en deze beoordeling is onafhankelijk van celgrootte of aantal, gezien het feit dat genormaliseerd is met de corresponderende controle (elke basale valué).
De rol van membraancholesterolgehalte voor caveolae integriteit, specifieke signaaltransductie en goede celfunctie is reeds erkend (Le Lay et al. 2001). Het is aangetoond dat hypertrofische adipocyten een verstoord metabolisme hebben, samen met een lager cholesterolgehalte in het plasmamembraan (Le Lay et al. 2001). Onze waarnemingen breiden die van Le Lay et al. (2001, 2004) die aantoonden dat cholesteroldepletie in adipocyten insulineresistentie induceert en veranderingen in de expressie van een aantal genen die relevant zijn voor het vetmetabolisme. Deze resultaten werden aangevoerd als bewijs dat cholesterolverlaging in het plasmamembraan een verband legt tussen adipocythypertrofie en metabolische stoornissen, hetgeen wordt ondersteund door onze huidige resultaten. Onze experimenten waarbij adipocyten werden blootgesteld aan M(βCD veroorzaakten een significante toename in basale lipolyse (verwacht na het veranderen van de caveolae integriteit van het plasmamembraan, resulterend in een verminderde fosfodiësterase 3B activiteit) en dientengevolge in een verminderde lipolytische respons op de (β-adrenerge stimulus. Interessant is dat we een significant verband hebben waargenomen tussen de invloed van M(βCD op basale lipolyse en BMI. Bovendien ondersteunt de significante correlatie tussen BMI en de verhouding tussen isoproterenol en basale lipolyse in aanwezigheid en afwezigheid van M(βCD een grotere gevoeligheid van adipocyten van obese personen voor cholesterol depletie-gedreven plasmamembraan veranderde signalering.
Grote vetcellen, waarvan bekend is dat ze overvloediger aanwezig zijn naarmate de BMI van personen toeneemt (Julien et al., 1989; Salans et al., 1973; Van Harmelen et al, 2003) zijn insulineresistent (Olefsky 1977) en vertonen een verschillend secretiepatroon dat hen in verband heeft gebracht met obesitas-geassocieerde aandoeningen (Imbeault et al., 1999; Van Harmelen et al., 2000).
Intrigerend is dat de vetweefselspecifieke insulinereceptor knock-out muizen (Bluher et al., 2004) vertonen adipocyten polarisatie in twee subpopulaties van kleine (<50μm diameter) en grote >1OOμm) cellen, wat gepaard gaat met verschillen in triglyceride synthese en lipolyse, naast andere parameters. De hier gerapporteerde waarnemingen tonen intrinsieke verschillen in het triglyceridenmetabolisme tussen omentale adipocyten van OB en NOB personen, en wij stellen voor dat de verrijking in hypertrofe en membraancholesterol-arme adipocyten de drijvende kracht kan zijn achter dergelijke veranderingen. Het is mogelijk dat de verminderde lipolytische respons na verloop van tijd bijdraagt aan de vergroting van het triglyceride depot. Het verminderde vermogen om extra triglyceriden op te slaan, zou resulteren in een verhoogde hoeveelheid circulerende lipiden, waardoor de risico’s geassocieerd met het metabool syndroom worden verhoogd.
Voor zover wij weten, heeft geen ander onderzoek de lipogenese en lipolyse in omental adipocyten van menselijke OB en NOB personen geëvalueerd. Het huidige werk toont relevante verschillen aan in het omental adipocyte triglyceride metabolisme bij obese vergeleken met niet-obese proefpersonen en suggereert dat de adipocyten van obese individuáis vatbaarder zijn voor een verlaagd cholesterolgehalte in het plasmamembraan. Hoewel het onze bedoeling was de factoren van de proefpersonen te minimaliseren, kunnen we niet uitsluiten dat comorbiditeiten bij zwaarlijvige personen het verschillende gedrag van de vetcellen kunnen beïnvloeden. De vergelijking van de triglycerideverwerking tussen deze groepen en in een vetdepot met een dergelijke pathogene relevantie helpt bij het begrijpen van verschillen in metabolisme en responsiviteit, die doelwit kunnen zijn voor farmacologische interventie en verdere studies vereisen.
ACKNOWLEDGMENTS
Wij danken Dr. Miguel A. Celis van het Tisné Ziekenhuis, Dr. Leonardo Rodríguez van het DIPRECA Ziekenhuis en Drs. Cristian Cavalla, James Hamilton en Gonzalo Wiedmaier van het Padre Hurtado Ziekenhuis voor de onschatbare hulp bij het verkrijgen van vetweefsel, evenals Mevr. Marisol Blanco en de heer Rodrigo Brücher voor hun technische bijstand.
GIFTENSTEUN
Gesteund door subsidies van DI-U de Chile (N°s Mult 04/06-2 aan C. Rojas en 1-04/01-2 aan M. Cifuentes), en FONDECYT (N° 1070632 aan C. Rojas, N°1080232 aan M. Cifuentes).
BLUHER M, WILSON-FRITCH L, LESZYK J, LAUSTSEN P G, COR VERA S, KAHN CR (2004) Role of insulin action and cell size on protein expression patterns in adipocytes. J Biol Chem 279: 31902-31909.
BRADFORD MM (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principie of protein-dye binding. Anal Biochem 72: 248-254.
CARPENÉ C (2001) Assays of adrenergic receptors including lipolysis and binding measurements. In: AILHAUD G (ed) Adipose Tissue Protocols. New Jersey: Humana Press. pp. 129-140.
DODT C, LONNROTH P, WELLHONER JP, FEHM HL, ELAM M (2003) Sympathetic control of white adipose tissue in lean and obese humans. Acta Physiol Scand 177: 351-357.
DOLÉ VP, MEINERTZ H (1960) Microdetermination of long-chain fatty acids in plasma and tissues. J Biol Chem 235: 2595-2599.
GÓMEZ-AMBROSI J, CATALÁN V, DIEZ-CABALLERO A, MARTÍNEZ-CRUZ LA, GIL MJ, GARCÍA-FONCILLAS J, CIENFUEGOS JA, SALVADOR J, MATO JM, FRUHBECK G (2004) Genexpressieprofiel van omental adipose weefsel bij menselijke obesitas. FASEB J 18: 215-217.
IMBEAULT P, LEMIEUX S, PRUDHOMME D, TREMBLAY A, NADEAU A, DESPRES JP, MAURIEGE P (1999) Verband tussen visceraal vetweefsel en metabole risicofactoren voor coronaire hartziekten: is er een bijdrage van subcutane vetcelhypertrofie? Metabolisme 48: 355-362.
JULIEN P, DESPRES JP, ÁNGEL A (1989) Scanning electrón microscopy of very small fat cells and mature fat cells in human obesity. J Lipid Res 30: 293-299.
KOZAK LP, JENSEN JT (1974) Genetic and developmental control of múltiple forms of L-glycerol-3phosphate dehydrogenase. J Biol Chem 249: 7775-7781.
LANGIN D, DICKER A, TAVERNIER G, HOFFSTEDT J, MAIRAL A, RYDEN M, ARNER E, SICARD C, JENKINS M, VIGUERIE N, VAN HARMELEN V, GROSS RW, HOLM C, ARNER P (2005) Adipocyte Upases and defect of lipolysis in human obesity. Diabetes 54: 3190-3197.
LARGE V, REYNISDOTTIR S, LANGIN D, FREDBY K, KLANNEMARK M, HOLM C, ARNER P (1999) Decreased expression and function of adipocyte hormone-sensitive Upase in subcutaneous fat cells of obese subjects. J Lipid Res 40: 2059-2066.
LE LAY S, KRIEF S, FARNIER C, LEFRERE I, LE LIEPVRE X, BAZIN R, FERRÉ P, DUGAIL I (2001) Cholesterol, a cell size-dependent signal that regulates glucose metabolism and gene expression in adipocytes. J Biol Chem 276: 16904-16910.
LE LAY S, FERRÉ P, DUGAIL I (2004) Adipocyte cholesterol balance in obesity. Biochem Soc Trans 32: 103-106.
MOUSTAID N, JONES BH, TAYLOR JW (1996) Insulin increases lipogenic enzyme activity in human adipocytes in primary culture. J Nutr 126: 865-870.
NILSSON R, AHMAD F, SWARD K, ANDERSSON U, WESTON M, MANGANIELLO V, DEGERMAN E (2006) Plasma membrane cyclic nucleotide phosphodiesterase 3B (PDE3B) is associated with caveolae in primary adipocytes. Cell Signal 18: 1713-1721.
OLEFSKY JM (1977) Mechanisms of decreased insulin responsiveness of large adipocytes. Endocrinology 100: 1169-1177.
RODBELL M (1964) Metabolisme van geïsoleerde vetcellen. I. Effects of hormones on glucose metabolism and lipolysis. J Biol Chem 239: 375-380.
RUMBERGER JM, WU T, HERING MA, MARSHALL S (2003) Role of hexosamine biosynthesis in glucose-mediated up-regulation of lipogenic enzyme mRNA levéis: effects of glucose, glutamine, and glucosamine on glycerophosphate dehydrogenase, fatty acid synthase, and acetyl-CoA carboxylase mRNA levéis. J Biol Chem 278: 28547-28552.
SALANS LB, DOUGHERTY JW (1971): The effect of insulin upon glucose metabolism by adipose cells of different size Influence of cell lipid and protein content, age, and nutritional state. J Clin Invest 50: 1399-1410.
SALANS LB, CUSHMAN SW, WEISMANN RE (1973) Studies van menselijk vetweefsel. Adipose cell size and number in nonobese and obese patients. J Clin Invest 52: 929-941.
SALANS SB, BRAY GA, CUSHMAN SW, DANFORTH JR E, GLENNON JA, HORTON ES, SIMS EA (1974) Glucose metabolism and the response to insulin by human adipose tissue in spontaneous and experimental obesity. Effecten van de samenstelling van het dieet en de grootte van de vetcellen. J Clin Invest 53: 848-856.
SMITH U (1971) Effect of cell size on lipid synthesis by human adipose tissue in vitro. J Lipid Res 12: 65-70.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, WEYER C, FOLEY JE, BOGARDUS C, TATARANNI PA, PRATLEY RE (2000) Enlarged subcutaneous abdominal adipocyte size, but not obesity itself, predicts type II diabetes independent of insulin resistance. Diabetologia 43: 1498-1506.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, HAUNER H (2003) Effect of BMI and age on adipose tissue cellularity and differentiation capacity in women. Int J Obes Relat Metab Disord 27: 889-895.
YANG X, JANSSON PA, NAGAEV I, JACK MM, CARVALHO E, SUNNERHAGEN KS, CAM MC, CUSHMAN SW, SMITH U (2004) Evidence of impaired adipogenesis in insulin resistance. Biochem Biophys Res Commun 317: 1045-1051.