Spore Stain of Bacillus subtilis

Dit is een preparaat van Bacillus subtilis, gekleurd om endosporen aan te tonen. Na groei op Nutrient agar bij 37 graden Celsius gedurende 24 uur, werden de organismen van de plaat verwijderd en in een druppel water op een glasplaatje gesuspendeerd. Het water liet men aan de lucht drogen en vervolgens werden de bacteriën op het glaasje gefixeerd door het 3-4 keer door de vlam van een bunsenbrander te halen. Het glaasje liet men afkoelen. De endosporen werden gekleurd met 5 % malachietgroen door het glaasje met de kleurstof te vullen en een vlam onder het glaasje te plaatsen totdat de kleurstof stoom begon te produceren. De opgewarmde malachietgroenoplossing werd gedurende 5 minuten op de cellen gelaten. Het glaasje hoefde niet voortdurend te worden gestoomd (verwarmd). Het glaasje werd afgespoeld met leidingwater en de cellen werden gedurende 30 seconden tegengekleurd met 0,25 % Safranine O (dezelfde tegenkleuring die bij de Gram-reactie wordt gebruikt). Als de endosporen na afloop van de kleuring niet groen zijn, kan het nodig zijn de techniek aan te passen en gedurende 5 minuten te blijven stomen met malachietgroen. De gemiddelde celgrootte was 3-5 micron.

Geef een antwoord

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd.