Bacillus subtilisを内胞子を示すように染色した調製品です。 Nutrient寒天培地上で37℃、24時間生育後、菌体をプレートから取り出し、スライドグラス上の水滴に懸濁させた。 水を自然乾燥させた後、スライドをブンゼンバーナーの炎に3-4回通し、細菌を熱固定した。 スライドは冷却させた。 スライドに染色液を流し、染色液が蒸気を発生し始めるまでスライドの下に炎を置いて、エンドスポアを5％マラカイトグリーンで染色した。 温めたマラカイトグリーン溶液を細胞上に5分間放置した。 スライドを継続的に蒸す（加熱する）必要はない。 スライドを水道水で洗い、0.25パーセントのサフラニンO（グラム反応に用いたのと同じ対比染色剤）で30秒間細胞を対比染色した。 染色手順の終了後、内生胞子が緑色でない場合は、マラカイトグリーンで5分間連続蒸煮するなどの手法の変更が必要な場合がある。 平均細胞サイズは3〜5ミクロンであった
。