イムノアッセイとは？

By Dr. Sanchari Sinha Dutta, Ph.D. Reviewed by Dr. Surat P, Ph.D.

Immunoassays is bianalytical methods that use the specificity of an antigen – antibody reaction to detect and quantality target molecules in biological samples.生体内試料を分析し、抗原抗体反応で標的分子を検出する方法です。 これらの方法は、臨床診断、創薬、薬物モニタリング、食品検査などで頻繁に使用されています。

Khamkhlai Thanet｜

免疫測定の種類

免疫測定の原理は、固定量の標識された分析物と可変量の非標識サンプル分析物が、分析物に対して特異的に上昇する抗体の限定数の結合部位に結合できるかどうかを競争させることに基づいています。 これらの方法は、定量的、半定量的、または定性的に標的分子を検出するために使用される。

ラジオイムノアッセイ（RIA）

ラジオイムノアッセイは、ホルモン、薬剤、ウイルス抗原を定量するためのラベルとしてラジオアイソトープを使用する。 既知濃度の放射性標識抗原を、その抗原に特異的な一定濃度の抗体とインキュベートする。 この放射性標識抗原抗体複合体を、未知濃度の同じ抗原を含む生体試料と混合します。

原理的には、試料抗原の濃度が放射性標識抗原より高ければ、試料抗原は放射性標識抗原と入れ替わり、限られた抗体結合部位に結合することになります。 この放射能は、生体試料中に存在する非標識抗原の濃度に正比例します。

しかしながら、放射性同位元素の半減期が短く、その使用に伴う健康被害があるため、多くの研究室でこの方法の適用がかなり制限されています。

Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA)

ELISAでは、酵素を目的の抗原に対して特異的に高められた抗体に連結します。

目的抗原を含む生物試料は酵素標識抗体に結合し、反応は反応混合物に加えた酵素特異的基質を使用して可視化します。 酵素特異的基質は、抗体に結合した酵素と結合し、発色した産物を生成します。この産物は、発色または化学発光イメージング技術を使用して検出することができます。

ELISA は高い特異性と感度を持っており、抗体や薬剤のハイスループット・スクリーニングによく使用されます。 目的の抗原を含む生体試料を蛍光標識された抗体とインキュベートします。

化学発光免疫測定法

発光分子は、励起状態から基底状態に戻る際に可視光または近可視光を放出し、この光を発光信号測定装置で検出することができる。

化学発光免疫測定法では、アクリジニウムエステルなどのルミノフォアマーカーを直接使用するか、アルカリホスファターゼやホースラディッシュペルオキシダーゼなどの酵素マーカーを、それぞれアダマンチル1、2ジオキセタンアリルホスファート（AMPPD）およびルミノール基質で間接使用することが可能である。

この方法の大きな利点は、エンハンサーを用いることにより、シグナル強度を下げずに反応を長時間継続させることができるため、読み出し量を増やすことができることです。

Counting immunoassays

カウンティングイムノアッセイは粒子計測技術を利用したものである。 ポリスチレンビーズ（ラテックス粒子）に、目的の抗原に特異的な抗体をコーティングする。 標的抗原を含む生体試料とインキュベートすると、これらのビーズは免疫複合体を形成し、目に見える塊を形成します（凝集）。

標的抗原の濃度に応じて、いくつかのビーズは結合せずに残り、セルカウンターを使用してカウントすることが可能です。 6391>

Trends in immunoassays

Advanced immunoassays are developed that is ultra-sensitive and less time consuming. 表面プラズモン共鳴（SPR）ベースのラベルフリー免疫測定法は、超高速分析（数分以内）、最小限のサンプルと試薬の要件、ラベルフリーのマイクロ流体免疫測定プロトコル、高スループットの全自動システムなど多くの特別な機能を備えたその一例である。

さらに、スマートフォンを用いたイムノアッセイフォーマット、マルチプレックスビーズベースアッセイ、ラテラルフローイムノアッセイフォーマットは、リアルタイムで健康関連の合併症を監視・管理することを容易にした最新の開発の一つである。

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