Questa è una preparazione di Bacillus subtilis, colorata per dimostrare le endospore. Dopo la crescita su Nutrient agar a 37 gradi Celsius per 24 ore, gli organismi sono stati rimossi dalla piastra e sospesi in una goccia d’acqua su un vetrino. L’acqua è stata lasciata asciugare all’aria e poi i batteri sono stati fissati a caldo sul vetrino facendolo passare attraverso la fiamma di un becco Bunsen 3-4 volte. Il vetrino è stato lasciato raffreddare. Le endospore sono state colorate con il 5% di verde malachite inondando il vetrino con il colorante e mettendo una fiamma sotto il vetrino finché la soluzione di colorazione ha iniziato a produrre vapore. La soluzione riscaldata di verde malachite è stata lasciata sulle cellule per 5 minuti. Il riscaldamento continuo del vetrino non era necessario. Il vetrino è stato risciacquato con acqua di rubinetto e le cellule sono state controcolorate per 30 secondi con lo 0,25% di Safranin O (la stessa controcolorazione usata nella reazione di Gram). Dopo aver completato la procedura di colorazione, se le endospore non sono verdi, può essere necessario modificare la tecnica per includere la vaporizzazione continua con verde malachite per 5 minuti. La dimensione media delle cellule era di 3-5 micron.