Biol Res 41: 197-204, 2008
ARTICOLO
Differenze nella lipogenesi e nella lipolisi in adipociti umani adulti obesi e non obesi
MARIANA CIFUENTES, CECILIA ALBALA e CECILIA V ROJAS
Istituto di nutrizione e tecnologia alimentare (INTA), Universidad de Chile, Santiago, Chile.
Dirección para Correspondencia
ABSTRACT
È stato proposto che le differenze nella funzione degli adipociti e/o nel metabolismo tra individui obesi e magri possono manifestarsi in anomalie funzionali del tessuto adiposo che portano a disturbi metabolici nell’obesità. Abbiamo studiato la lipogenesi e la lipolisi degli adipociti omentali di persone obese (OB) e non obese (NOB). L’attività specifica dell’enzima marker lipogenico G3PDH era inferiore del 50% negli adipociti totali di OB rispetto a quelli dei soggetti NOB. Gli adipociti omentali dei soggetti OB avevano anche levéis lipolitico basale inferiore, e una risposta lipolitica inferiore allo stimolo p-adrenergico. La deplezione di colesterolo della membrana plasmatica degli adipociti con metile β-ciclodestrina ha causato un effetto lipolitico sugli adipociti di entrambi i gruppi insieme, ma quando i soggetti obesi e magri sono stati analizzati separatamente, la risposta era significativa solo negli obesi. Presentiamo l’evidenza di un diverso profilo lipogenico e lipolitico negli adipociti omentali dei soggetti obesi, e proponiamo un ruolo rilevante del colesterolo della membrana plasmatica, dove l’impatto della sua rimozione nella lipolisi degli adipociti OB e NOB differisce.
Termini chiave: adipociti, colesterolo, lipogenesi, lipolisi, obesità, metabolismo dei trigliceridi.
INTRODUZIONE
L’eccesso di tessuto adiposo viscerale è legato a numerosi problemi di salute. Un’adiposità aumentata è associata ad un aumento del volume delle cellule adipose. Così, gli individui obesi hanno una quantità relativamente grande di adipociti ipertrofici rispetto ai soggetti magri. Gli studi sulle cellule adipose animali e umane hanno stabilito che diverse funzioni metaboliche degli adipociti sono alterate da una maggiore dimensione delle cellule, come la sensibilità all’insulina e il metabolismo del glucosio, oltre alla secrezione di adipochine e ai profili di espressione genica (Bluher et al., 2004; Salans e Doherty, 1971; Salans et al., 1974; Smith, 1971; Yang et al., 2004). Questo ha portato al suggerimento che la predominanza funzionale di cellule ipertrofiche e/o metabolicamente compromesse nel tessuto adiposo è un importante effetto causale per una bassa risposta del tessuto ai segnali omeostatici, perpetuando o aggravando così lo stato obeso. Per testare questa ipotesi, ci siamo proposti di studiare in vitro la lipogenesi e la lipolisi in adipociti omentali isolati da adulti OB e NOB. Dato che la segnalazione della lipolisi dipende dalle proteine situate nei caveolae, e che l’interruzione dell’organizzazione di queste strutture ricche di colesterolo è stata associata ad alterazioni metaboliche negli adipociti obesi (Le Lay et al, 2004), abbiamo anche valutato l’impatto della rimozione del colesterolo dalla membrana plasmatica utilizzando la metil (β-ciclodestrina (M(βCD) nella lipolisi degli adipociti OB e NOB.
I presenti risultati sottolineano un diverso profilo lipogenico e lipolitico tra soggetti magri e obesi. I nostri dati evidenziano la rilevanza metabolica del minore contenuto di colesterolo della membrana plasmatica negli adipociti dei soggetti obesi, influenzando la regolazione fisiologica della lipolisi.
MATERIALI E METODI
Isolamento degli adipociti
Il grasso omentale umano è stato ottenuto da 25 soggetti obesi (OB) e non obesi (NOB) sottoposti a chirurgia addominale elettiva (sia gastrica, ginecologica o gastrointestinale). L’età dei soggetti era compresa tra 29 e 79 anni e il loro indice di massa corporea (BMI) era compreso tra 18 e 54 kg/m2. Il punto di cutoff per definire l’obesità è stato considerato secondo la definizione NIH di BMI > 30 kg/m2. Dodici soggetti (9 uomini, 3 donne) erano NOB (BMI 23,3 ±3,4 kg/m2), mentre 13 erano OB (BMI 38,2 ± 4,3 kg/m2; 4 uomini, 9 donne). Non abbiamo osservato alcuna influenza del sesso nei parametri studiati. Il protocollo è stato approvato dall’Institutional Review Board dell’INTA, Università del Cile, e i donatori hanno firmato il consenso informato. Il tessuto adiposo rimosso durante l’intervento chirurgico è stato immerso in una soluzione salina e trasportato al laboratorio per essere trattato entro un’ora. All’arrivo, il tessuto è stato lavato più volte con la soluzione salina bilanciata di Hanks (HBSS), rimuovendo tutto il tessuto connettivo visibile, i coaguli di sangue e i vasi, e poi tritato in piccoli pezzi (2-3 mm2) e coltivato in médium MI99 (Invitrogen, Carlsbad, CA), integrato con antibiotici (penicillina-streptomicina) a 37°C in un incubatore ad atmosfera controllata. C’era un periodo di incubazione di 2 giorni del tessuto al fine di ridurre al minimo la variabilità interindividuale causata da fattori del soggetto come l’ambiente ormonale, lo stato di salute attuale o i farmaci. Gli adipociti sono stati isolati utilizzando un metodo basato sul lavoro di Rodbell (1964). In breve, il tessuto adiposo tritato è stato incubato con lg/1 di collagenasi di tipo I (Worthington Biochemical Corp. Lakewood, NJ) a 37°C per 60 minuti con miscelazione continua. La sospensione cellulare risultante è stato filtrato attraverso un tampone di garza sterile, e come adipociti spontaneamente sepárate dalla fase acquosa, sono stati recuperati aspirando delicatamente lo strato galleggiante con una pipetta plástica, e lavato due volte con 5 volumi di HBSS. Gli adipociti isolati sono stati immediatamente utilizzati per gli studi di lipolisi, o congelati per la successiva determinazione della glicerolo-β-fosfato deidrogenasi (G3PDH).
La reattività lipolitica allo stimolo β-adrenergico e la rilevazione dell’attività lipogenica (vedi sotto) hanno evidenziato la presenza di adipociti vitali dopo la digestione del tessuto.
Lipogenesi e lipolisi
La sintesi dei trigliceridi nell’adipocita utilizza sia acidi grassi pre-fatti che de novo-fatti, mentre la spina dorsale del glicerolo viene dal glicerolo-β-fosfato derivato dal glucosio. La capacità lipogenica è stata valutata dall’attività specifica dell’enzima G3PDH, che catalizza la formazione della spina dorsale di glicerolo dei trigliceridi dal diidrossiacetone fosfato fornito attraverso la glicolisi. Questo enzima è considerato limitante per la sintesi dei trigliceridi nel tessuto adiposo, dato che in questo tessuto è la fonte solé di glicerolo-β-fosfato. Il suo uso come marker lipogenico negli adipociti maturi è supportato dall’upregulation del suo mRNA e dell’attività da parte dell’insulina (Moustaid et al., 1996; Rumberger et al., 2003). Brevemente, gli adipociti isolati sono stati omogeneizzati (10 colpi a 1800 rpm con un sistema Glas-Col homogenizer, Glas-Col, IN) utilizzando un tubo di vetro dotato di un pestello in teflon, a 4 ° C in un tampone contenente 0,25M saccarosio, lmM EDTA, 50mM trietanolamina e lmM ditiotreitolo. L’omogeneizzato è stato centrifugato a 14.000 x g, 4°C per 30 minuti. L’attività di G3PDH è stata determinata nel surnatante sulla base del metodo di Kozak e Jensen (1974), misurando l’ossidazione di NADH (andamento temporale della variazione di assorbanza a 340 nm a 37°C) su un lettore di micropiastre (EL-808, BioTek Instruments Inc, Winooski, VT), utilizzando il diidrossiacetone fosfato come substrato per l’enzima. La reazione è stata lineare rispetto al tempo per tutto il periodo del test. Un’unità di attività enzimatica corrisponde all’ossidazione di 1 nmol di NADH al minuto nelle condizioni indicate sopra. La concentrazione di proteine nell’estratto solubile è stata misurata con il metodo Bradford (Bradford, 1976).
La lipolisi è stata valutata durante le 48 ore di coltura adiposa tramite la misurazione del glicerolo cumulativo rilasciato nel médium di coltura MI99 (reagente per la determinazione del glicerolo libero, Sigma, St Louis MO). Inoltre, la risposta lipolitica acuta allo stimolo β-adrenergico, con o senza deplezione del colesterolo della membrana plasmatica (60 minuti di preincubazione con 10 mM MβCD ), è stata valutata misurando il glicerolo totale rilasciato durante un’incubazione di 90 minuti di sospensioni di adipociti al 10% a 37°C con un delicato turbinio continuo e l’aggiunta di isoproterenolo 10μM (Sigma) o veicolo. Per la valutazione della lipolisi durante la cultura del tessuto adiposo, i valori di glicerolo sono espressi per mg di tessuto, mentre per il saggio di lipolisi nelle sospensioni di adipociti, i valori sono normalizzati ai lipidi cellulari totali, come descritto da Carpéné (2001) o, negli esperimenti con agenti lipolitici, al rispettivo controllo basale (non stimolato). I lipidi cellulari totali sono stati estratti usando il metodo di Dolé e Meinertz (1960), e determinati gravimetricamente. Alla luce di una relazione indipendente riportata tra le dimensioni delle cellule e la lipolisi che può agire come un confonditore, soprattutto nei nostri studi che confrontano soggetti OB e NOB, l’espressione per mg di lipidi è stata considerata la più adeguata. Come dimostrato da Large et al. (1999), la glicerolo reléase espressa per contenuto lipidico è altamente correlata con l’attività della lipasi ormono-sensibile in studi su soggetti umani obesi e magri, e più rilevante per la capacità lipolitica che per il numero di cellule a causa dell’aumentato volume delle cellule adipose negli obesi.
Statistiche
Le differenze tra le medie sono state analizzate usando il test t di Student e sono state considerate significative a p≤0.05. Il coefficiente di correlazione di Pearson è stato utilizzato per valutare le associazioni per le variabili continue. I dati sono espressi come media ± SEM.
RISULTATI
Lipogenesi
L’attività specifica dell’enzima lipogenico G3PDH era quasi la metà nei soggetti OB rispetto a quella degli adipociti di NOB (p<0,05, Fig. 1). Coerentemente con questo, c’era una significativa correlazione inversa tra il marker di lipogenesi e il BMI dei soggetti (Fig. 1, inserto, r2=0,31, p=0,01). Vale la pena notare che non c’erano differenze nella concentrazione di proteine (utilizzate per normalizzare l’attività di G3PDH) tra i soggetti OB e NOB che avrebbero potuto falsare questi risultati.
Lipolisi
La reléase di glicerolo al médium di incubazione durante la cultura del tessuto adiposo omentale intero o degli adipociti isolati è stato utilizzato come indicatore di attività lipolitica. Sia la lipolisi basale che quella stimolata dall’isoproterenolo erano inferiori negli adipociti isolati dei soggetti OB (p<0.05 e p<0.01, rispettivamente, Fig. 2). Coerentemente con queste osservazioni, c’era una correlazione inversa altamente significativa tra lipolisi e BMI del soggetto per il tessuto intero (r2 = 0,46, p<0,0005, inserto, Fig. 2) e adipociti isolati (basale: r2 = 0,28, p<0,01; β-adrenergico-stimolato: r2 = 0,17, p<0,05, n=20). Gli adipociti dei soggetti obesi hanno mostrato una risposta inferiore allo stimolo β-adrenergico rispetto a quelli delle loro controparti magre (Fig. 3, p<0.05).
L’esposizione degli adipociti a 10 mM MβCD in un sottoinsieme di 11 campioni ha causato un aumento significativo della lipolisi basale. Questo aumento era direttamente proporzionale al BMI del soggetto (r2=0,5, p<0,05, Fig. 4). La risposta lipolitica alla stimolazione β-adrenergica è stata significativamente ridotta quando gli adipociti sono stati esposti a M(βCD (345 ± 50 % vs 199 ± 33 %, rispettivamente, p< 0.05). È interessante notare che confrontando l’effetto del M(βCD rispetto al veicolo, una riduzione significativa della risposta lipolitica all’isoproterenolo è stata osservata negli adipociti di soggetti con BMI>40 kg/ m2 (morbosamente obesi, secondo la definizione NIH), mentre i soggetti magri non hanno mostrato alcuna differenza significativa (Fig. 5). Coerentemente con questo, una correlazione significativa è stata trovata tra BMI e il rapporto della risposta lipolitica a 10μM isoproterenolo in presenza e assenza di 10 mM M(βCD (r2=0,46, p<0,05).
DISCUSSIONE
Nel presente lavoro, abbiamo studiato la lipogenesi e la lipolisi negli adipociti isolati dal tessuto adiposo omentale di adulti OB e NOB in un ampio range di BMI (18-54 kg/m2). Le nostre osservazioni mostrano che l’attività specifica del marker di lipogenesi G3PDH negli OB era la metà di quella degli adipociti delle loro controparti NOB. D’altra parte, gli IMC più alti erano associati a una minore lipolisi basale e (β-adrenergica-stimolata) e a una maggiore sensibilità alla compromissione della segnalazione della membrana plasmatica dovuta alla rimozione del colesterolo. Un maggiore accumulo di trigliceridi nell’adipocita OB può essere legato alla minore attività lipolitica che abbiamo osservato in questo gruppo, come altri hanno anche proposto (Langin et al., 2005). Inoltre, la minore attività specifica di G3PDH che abbiamo trovato nell’OB, che può risultare controintuitiva, potrebbe rappresentare una diminuita capacità di immagazzinare i trigliceridi circolanti in eccesso, con probabile risultato di ipertrigliceridemia e accumulo di grasso in altre regioni del corpo, con i noti effetti dannosi associati alla sindrome metabolica.
Utilizzando un approccio in vivo negli esseri umani, Dodt et al. (2003) hanno osservato una risposta lipolitica smussata alla stimolazione intraneurale nelle femmine obese, che è coerente con i nostri risultati in vitro e supporta la nozione che l’obesità può essere almeno in parte associata a una bassa risposta lipolitica all’attivazione simpatica. In accordo, Gómez-Ambrosi et al. (2004) hanno studiato il modello di espressione genica del tessuto adiposo omentale e hanno dimostrato che i soggetti obesi avevano un’espressione ridotta e migliorata dei geni induttori e repressori della lipolisi, rispettivamente.
C’è una notevole discrepanza nella letteratura riguardo alla normalizzazione dei dati della lipolisi. Dato il rapporto diretto riportato tra le dimensioni delle cellule degli adipociti e la lipolisi (Large et al., 1999), e la maggiore abbondanza relativa di adipociti più grandi negli obesi (Large et al., 1999), il tessuto adiposo dovrebbe mostrare una maggiore lipolisi non normalizzata tra gli obesi che tra gli individui NOB. Così, per evitare un fattore di confusione dovuto alla diversa distribuzione delle dimensioni delle cellule in OB rispetto a NOB, i nostri valori di glicerolo reléase sono stati normalizzati esprimendoli per mg di lipidi totali, valutando così l’attività lipolitica per una data massa lipidica. A sostegno di ciò, studi su esseri umani obesi e magri hanno osservato un’elevata correlazione tra l’attività dell’enzima lipolitico chiave HSL (hormone sensitive Upase) e la glicerolo reléase degli adipociti espressa per contenuto lipidico (Large et al., 1999). Gli autori hanno affermato che il contenuto lipidico è più rilevante per la capacità lipolitica rispetto alla normalizzazione per numero di cellule, a causa dell’aumento del volume delle cellule adipose negli obesi. Vale la pena notare che (anche la stimolazione β-adrenergica rispetto alle condizioni basali si è dimostrata inferiore nei soggetti OB, e questa valutazione è indipendente dalle dimensioni o dal numero delle cellule, dato che è normalizzata con il controllo corrispondente (ogni valué basale).
Il ruolo del contenuto di colesterolo di membrana per l’integrità dei caveolae, la trasduzione del segnale specifico e la corretta funzione cellulare è già stato riconosciuto (Le Lay et al. 2001). È stato dimostrato che gli adipociti ipertrofici hanno un metabolismo alterato, insieme a un minore contenuto di colesterolo nella membrana plasmatica (Le Lay et al. 2001). Le nostre osservazioni espandono quelle di Le Lay et al. (2001, 2004) che hanno dimostrato che la deplezione di colesterolo negli adipociti induce resistenza all’insulina e cambiamenti nell’espressione di una serie di geni rilevanti per il metabolismo adiposo. Questi risultati sono stati forniti come prova della riduzione del colesterolo nella membrana plasmatica come collegamento tra l’ipertrofia degli adipociti e il deterioramento metabolico, che è supportato dai nostri risultati attuali. I nostri esperimenti esponendo gli adipociti a M(βCD hanno causato un aumento significativo della lipolisi basale (previsto dopo aver alterato l’integrità dei caveolae della membrana plasmatica, con conseguente diminuzione dell’attività della fosfodiesterasi 3B) e, di conseguenza, in una ridotta risposta lipolitica allo stimolo β-adrenergico. È interessante notare che abbiamo osservato un’associazione significativa tra l’impatto del M(βCD sulla lipolisi basale e il BMI. Inoltre, la correlazione significativa tra BMI e il rapporto tra isoproterenolo e lipolisi basale in presenza e assenza di M(βCD supporta una maggiore suscettibilità degli adipociti da soggetti obesi alla deplezione di colesterolo guidato dalla membrana plasmatica alterata segnalazione.
Le cellule adipose allargate, note per essere più abbondanti con l’aumento del BMI dei soggetti (Julien et al., 1989; Salans et al., 1973; Van Harmelen et al, 2003) sono resistenti all’insulina (Olefsky 1977) e mostrano un modello di secrezione distinto che li ha collegati ai disturbi associati all’obesità (Imbeault et al., 1999; Van Harmelen et al., 2000).
Interessante, i topi knockout del recettore dell’insulina specifico del tessuto adiposo (Bluher et al, 2004) mostrano la polarizzazione degli adipociti in due sottopopolazioni di cellule piccole (<50μm di diametro) e grandi >1OOμm), che è accompagnata da differenze nella sintesi dei trigliceridi e nella lipolisi, tra altri parametri. Le osservazioni qui riportate mostrano differenze intrinseche nel metabolismo dei trigliceridi tra gli adipociti omentali dei soggetti OB e NOB, e proponiamo che l’arricchimento in adipociti ipertrofizzati e privi di colesterolo di membrana possa guidare tali alterazioni. È possibile che l’alterata risposta lipolitica contribuisca nel tempo all’allargamento del deposito di trigliceridi. La ridotta capacità di immagazzinare ulteriori trigliceridi, si tradurrebbe in un aumento della quantità di lipidi circolanti, elevando i rischi associati alla sindrome metabolica.
Al meglio delle nostre conoscenze, nessun altro studio ha valutato la lipogenesi e la lipolisi negli adipociti omentali da soggetti umani OB e NOB. Il presente lavoro mostra differenze rilevanti nel metabolismo dei trigliceridi degli adipociti omentali nei soggetti obesi rispetto a quelli non obesi e suggerisce che gli adipociti degli individui obesi sono più suscettibili al ridotto contenuto di colesterolo della membrana plasmatica. Anche se abbiamo voluto minimizzare i fattori del soggetto, non possiamo escludere che le comorbidità presenti nei soggetti obesi possano influenzare il diverso comportamento delle cellule adipose. Il confronto della manipolazione dei trigliceridi tra questi gruppi e in un deposito di grasso di tale rilevanza patogenetica aiuta a comprendere le differenze nel metabolismo e nella reattività, che possono essere bersaglio di interventi farmacologici e richiedono ulteriori studi.
Riconoscimenti
Vorremmo ringraziare il Dr. Miguel A. Celis dell’Ospedale Tisné, il Dr. Leonardo Rodríguez dell’Ospedale DIPRECA e i Dr. Cristian Cavalla, James Hamilton e Gonzalo Wiedmaier dell’Ospedale Padre Hurtado per il prezioso aiuto nell’ottenere il tessuto adiposo, così come la signora Marisol Blanco e il Sig. Marisol Blanco e il signor Rodrigo Brücher per la loro assistenza tecnica.
Sostegno delle sovvenzioni
Sostenuto da sovvenzioni del DI-U de Chile (N°s Mult 04/06-2 a C. Rojas e 1-04/01-2 a M. Cifuentes), e FONDECYT (N° 1070632 a C. Rojas, N°1080232 a M. Cifuentes).
BLUHER M, WILSON-FRITCH L, LESZYK J, LAUSTSEN P G, COR VERA S, KAHN CR (2004) Ruolo dell’azione dell’insulina e delle dimensioni delle cellule sui modelli di espressione delle proteine negli adipociti. J Biol Chem 279: 31902-31909.
BRADFORD MM (1976) Un metodo rapido e sensibile per la quantificazione di quantità di microgrammi di proteine utilizzando il principio del legame proteina-colore. Anal Biochem 72: 248-254.
CARPENÉ C (2001) Saggi di recettori adrenergici tra cui lipolisi e misure di legame. In: AILHAUD G (ed) Adipose Tissue Protocols. New Jersey: Humana Press. pp. 129-140.
DODT C, LONNROTH P, WELLHONER JP, FEHM HL, ELAM M (2003) Controllo simpatico del tessuto adiposo bianco in esseri umani magri e obesi. Acta Physiol Scand 177: 351-357.
DOLÉ VP, MEINERTZ H (1960) Microdeterminazione degli acidi grassi a catena lunga nel plasma e nei tessuti. J Biol Chem 235: 2595-2599.
GÓMEZ-AMBROSI J, CATALÁN V, DIEZ-CABALLERO A, MARTÍNEZ-CRUZ LA, GIL MJ, GARCÍA-FONCILLAS J, CIENFUEGOS JA, SALVADOR J, MATO JM, FRUHBECK G (2004) Gene expression profile of omental adipose tissue in human obesity. FASEB J 18: 215-217.
IMBEAULT P, LEMIEUX S, PRUDHOMME D, TREMBLAY A, NADEAU A, DESPRES JP, MAURIEGE P (1999) Relazione del tessuto adiposo viscerale ai fattori di rischio metabolici per la malattia coronarica: c’è un contributo di ipertrofia delle cellule adipose sottocutanee? Metabolismo 48: 355-362.
JULIEN P, DESPRES JP, ÁNGEL A (1989) Scanning electrón microscopy di cellule di grasso molto piccole e cellule di grasso mature nell’obesità umana. J Lipid Res 30: 293-299.
KOZAK LP, JENSEN JT (1974) Controllo genetico e di sviluppo di forme múltiple di L-glicerolo 3-fosfato deidrogenasi. J Biol Chem 249: 7775-7781.
LANGIN D, DICKER A, TAVERNIER G, HOFFSTEDT J, MAIRAL A, RYDEN M, ARNER E, SICARD C, JENKINS M, VIGUERIE N, VAN HARMELEN V, GROSS RW, HOLM C, ARNER P (2005) Adipocyte Upases e difetto di lipolisi in obesità umana. Diabete 54: 3190-3197.
LARGE V, REYNISDOTTIR S, LANGIN D, FREDBY K, KLANNEMARK M, HOLM C, ARNER P (1999) Diminuita espressione e funzione dell’Upase sensibile agli ormoni degli adipociti nelle cellule di grasso sottocutaneo di soggetti obesi. J Lipid Res 40: 2059-2066.
LE LAY S, KRIEF S, FARNIER C, LEFRERE I, LE LIEPVRE X, BAZIN R, FERRÉ P, DUGAIL I (2001) Colesterolo, un segnale dipendente dalle dimensioni delle cellule che regola il metabolismo del glucosio e l’espressione genica negli adipociti. J Biol Chem 276: 16904-16910.
LE LAY S, FERRÉ P, DUGAIL I (2004) equilibrio del colesterolo degli adipociti nell’obesità. Biochem Soc Trans 32: 103-106.
MOUSTAID N, JONES BH, TAYLOR JW (1996) L’insulina aumenta l’attività enzimatica lipogenica negli adipociti umani in coltura primaria. J Nutr 126: 865-870.
NILSSON R, AHMAD F, SWARD K, ANDERSSON U, WESTON M, MANGANIELLO V, DEGERMAN E (2006) La fosfodiesterasi 3B (PDE3B) del nucleotide ciclico della membrana plasmatica è associata alle caveole negli adipociti primari. Cell Signal 18: 1713-1721.
OLEFSKY JM (1977) Meccanismi di diminuzione della risposta all’insulina di grandi adipociti. Endocrinologia 100: 1169-1177.
RODBELL M (1964) Metabolismo delle cellule grasse isolate. I. Effetti degli ormoni sul metabolismo del glucosio e la lipolisi. J Biol Chem 239: 375-380.
RUMBERGER JM, WU T, HERING MA, MARSHALL S (2003) Ruolo della biosintesi esosamina in glucosio-mediata up-regolazione di mRNA levéis enzima lipogenico: effetti di glucosio, glutammina e glucosamina su glicerofosfato deidrogenasi, acido grasso sintasi, e acetil-CoA carbossilasi mRNA levéis. J Biol Chem 278: 28547-28552.
SALANS LB, DOUGHERTY JW (1971): L’effetto dell’insulina sul metabolismo del glucosio da cellule adipose di dimensioni diverse Influenza del contenuto di lipidi e proteine delle cellule, età e stato nutrizionale. J Clin Invest 50: 1399-1410.
SALANS LB, CUSHMAN SW, WEISMANN RE (1973) Studi sul tessuto adiposo umano. Dimensioni e numero delle cellule adipose in pazienti nonobesi e obesi. J Clin Invest 52: 929-941.
SALANS SB, BRAY GA, CUSHMAN SW, DANFORTH JR E, GLENNON JA, HORTON ES, SIMS EA (1974) Il metabolismo del glucosio e la risposta all’insulina del tessuto adiposo umano nell’obesità spontanea e sperimentale. Effetti della composizione della dieta e delle dimensioni delle cellule adipose. J Clin Invest 53: 848-856.
SMITH U (1971) Effetto della dimensione delle cellule sulla sintesi dei lipidi da parte del tessuto adiposo umano in vitro. J Lipid Res 12: 65-70.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, WEYER C, FOLEY JE, BOGARDUS C, TATARANNI PA, PRATLEY RE (2000) La dimensione degli adipociti addominali sottocutanei ingranditi, ma non l’obesità stessa, predice il diabete di tipo II indipendentemente dall’insulino-resistenza. Diabetologia 43: 1498-1506.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, HAUNER H (2003) Effetto del BMI e dell’età sulla cellularità del tessuto adiposo e capacità di differenziazione nelle donne. Int J Obes Relat Metab Disord 27: 889-895.
YANG X, JANSSON PA, NAGAEV I, JACK MM, CARVALHO E, SUNNERHAGEN KS, CAM MC, CUSHMAN SW, SMITH U (2004) Evidenza di adipogenesi compromessa nell’insulino-resistenza. Biochem Biophys Res Commun 317: 1045-1051.