Cosa sono gli immunodosaggi?

Di Sanchari Sinha Dutta, Ph.D.Reviewed by Dr. Surat P, Ph.D.

Immunodosaggi sono metodi bioanalitici che utilizzano la specificità di una reazione antigene-anticorpo per rilevare e quantificare molecole target in campioni biologici. Questi metodi sono frequentemente usati nella diagnostica clinica, nella scoperta di farmaci, nel monitoraggio dei farmaci e nei test alimentari.

Khamkhlai Thanet |

Tipi di immunodosaggi

Il principio di un immunodosaggio si basa sulla competizione tra una quantità fissa di analita etichettato e una quantità variabile di analita campione non etichettato per legare un numero limitato di siti di legame di un anticorpo specificamente cresciuto contro l’analita. Questi metodi possono essere usati per rilevare una molecola bersaglio quantitativamente, semiquantitativamente o qualitativamente.

Radioimmunoassay (RIA)

I radioimmunoassaggi usano un radioisotopo come etichetta per quantificare ormoni, farmaci e antigeni virali. Una concentrazione nota di antigene radiomarcato viene incubata con una concentrazione fissa di anticorpo specifico per quell’antigene. Questo complesso antigene-anticorpo radiomarcato viene poi mescolato con un campione biologico contenente una concentrazione sconosciuta dello stesso antigene.

In linea di principio, se la concentrazione dell’antigene campione è superiore a quella dell’antigene radiomarcato, l’antigene campione legherà il numero limitato di siti di legame dell’anticorpo sostituendo l’antigene radiomarcato. Successivamente, viene misurata la radioattività di questi antigeni radiomarcati liberi (non legati a un anticorpo), che è direttamente proporzionale alla concentrazione di antigene non marcato presente nel campione biologico.

Tuttavia, la breve emivita dei radioisotopi, così come i rischi per la salute associati al loro uso, limitano notevolmente l’applicazione di questo metodo in molti laboratori.

Saggio immunoassorbente legato all’enzima (ELISA)

In un ELISA, un enzima è legato a un anticorpo che è stato cresciuto specificamente contro un antigene di interesse.

I campioni biologici contenenti l’antigene bersaglio possono legare l’anticorpo marcato con l’enzima e la reazione viene visualizzata utilizzando un substrato enzima-specifico che viene aggiunto alla miscela di reazione. Il substrato enzima-specifico si lega all’enzima attaccato all’anticorpo, generando un prodotto colorato che può essere rilevato usando tecniche di imaging cromogenico o chemiluminescente.

ELISA ha un’alta specificità e sensibilità, quindi è spesso usato per lo screening ad alta produttività di anticorpi o farmaci.

Saggi fluoroimmunologici

Sonde fluorescenti sono usate per marcare gli anticorpi. I campioni biologici contenenti un antigene di interesse vengono incubati con un anticorpo marcato con la fluorescenza. L’intensità di fluorescenza del complesso antigene-anticorpo risultante viene misurata per quantificare l’antigene bersaglio.

Molecole luminescenti quando ritornano da uno stato eccitato a uno stato di terra, emettono luce visibile o quasi-visibile (luminescenza), che può essere rilevata da dispositivi di misurazione del segnale luminescente.

Nei saggi immunologici in chemiluminescenza, i marcatori luminofori, come gli esteri di acridinio, possono essere usati direttamente; oppure i marcatori enzimatici, tra cui la fosfatasi alcalina e la perossidasi di rafano, possono essere usati indirettamente con substrati di adamantyl 1, 2-dioxetane aryl phosphate (AMPPD) e luminol, rispettivamente.

Il vantaggio principale di questo metodo è che la lettura può essere aumentata utilizzando stimolatori, che permettono alla reazione di continuare per un tempo più lungo senza ridurre l’intensità del segnale.

Immunodosaggi di conteggio

Immunodosaggi di conteggio utilizzano la tecnologia di conteggio delle particelle. Le perle di polistirene (particelle di lattice) sono rivestite con anticorpi specifici per un antigene di interesse. Quando vengono incubate con un campione biologico contenente l’antigene target, queste sfere formano immunocomplessi, che formano grumi visibili (agglutinazione).

A seconda della concentrazione dell’antigene target, alcune sfere rimangono non legate e possono essere contate utilizzando un contatore di cellule. Il numero di microsfere non legate denota inversamente la concentrazione dell’antigene bersaglio.

Tendenze nei test immunologici

Sono stati sviluppati test immunologici avanzati che sono ultrasensibili e richiedono meno tempo. La risonanza plasmonica di superficie (SPR) basata sull’immunodosaggio senza etichetta è uno di questi esempi che ha molte caratteristiche speciali, come l’analisi superveloce (in pochi minuti), il requisito minimo di campioni e reagenti, il protocollo microfluidico di immunodosaggio senza etichetta e il sistema completamente automatizzato con un alto rendimento.

Inoltre, i formati di immunodosaggio basati su smartphone, i saggi multiplex basati su microsfere, i formati di immunodosaggio a flusso laterale sono tra gli ultimi sviluppi che hanno facilitato il monitoraggio e la gestione delle complicazioni legate alla salute in tempo reale.

Scritto da

Dr. Sanchari Sinha Dutta

Dr. Sanchari Sinha Dutta è un comunicatore scientifico che crede nella diffusione del potere della scienza in ogni angolo del mondo. Ha una laurea in scienze (B.Sc.) e un master in biologia e fisiologia umana. Dopo il suo master, Sanchari ha proseguito gli studi con un dottorato in fisiologia umana. È autrice di più di 10 articoli di ricerca originali, tutti pubblicati in riviste internazionali di fama mondiale.

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