indicatore di pHModifica
| 4-Nitrofenolo (indicatore di pH) | ||
| sotto pH 5.4 | sopra il pH 7,5 | |
| 5,4 | ⇌ | 7,5 |
4-Nitrofenolo può essere usato come indicatore di pH. Una soluzione di 4-nitrofenolo appare incolore sotto il pH 5,4 e gialla sopra il pH 7,5. Questa proprietà di cambiamento di colore rende questo composto utile come indicatore di pH. Il colore giallo della forma 4-nitrofenolato (o 4-nitrofenossido) è dovuto a un massimo di assorbanza a 405 nm (ε = 18,3 a 18,4 mM-1 cm-1 in alcali forti). Al contrario, il 4-nitrofenolo ha una debole assorbanza a 405 nm (ε = 0,2 mM-1 cm-1).Il punto isosbetico per il 4-nitrofenolo/4-nitrofenossido è a 348 nm, con ε = 5,4 mM-1 cm-1.
Altri usiModifica
- 4-Nitrofenolo è un intermedio nella sintesi del paracetamolo. Viene ridotto a 4-aminofenolo, poi acetilato con anidride acetica.
- 4-Nitrofenolo è usato come precursore per la preparazione di fenetidina e acetofenetidina, indicatori e materie prime per i fungicidi. Il bioaccumulo di questo composto si verifica raramente.
- Nella sintesi peptidica, i derivati dell’estere carbossilato del 4-nitrofenolo possono servire come componenti attivati per la costruzione di società ammidiche.
Usi dei derivatiModifica
In laboratorio, è usato per rilevare la presenza di attività della fosfatasi alcalina per idrolisi del PNPP. In condizioni di base, la presenza di enzimi idrolitici farà diventare giallo il recipiente di reazione.
Il 4-Nitrofenolo è un prodotto della scissione enzimatica di diversi substrati sintetici come il 4-nitrofenil fosfato (usato come substrato per la fosfatasi alcalina), il 4-nitrofenil acetato (per l’anidrasi carbonica), il 4-nitrofenil-β-D-glucopiranoside e altri derivati dello zucchero che sono usati per dosare vari enzimi glicosidasi. Le quantità di 4-nitrofenolo prodotte da un particolare enzima in presenza del suo corrispondente substrato possono essere misurate con uno spettrofotometro a 405 nm o intorno ad esso e utilizzate come misura sostitutiva della quantità di attività dell’enzima nel campione.
Una misura accurata dell’attività enzimatica richiede che il prodotto 4-nitrofenolo sia completamente deprotonato, esistente come 4-nitrofenolato, data la debole assorbanza del 4-nitrofenolo a 405 nm. La completa ionizzazione del gruppo funzionale dell’alcool influenza la coniugazione dei legami pi sul composto. Una coppia solitaria dall’ossigeno può essere delocalizzata attraverso la coniugazione all’anello benzenico e al gruppo nitro. Poiché la lunghezza dei sistemi coniugati influenza il colore dei composti organici, questo cambiamento di ionizzazione fa sì che il 4-nitrofenolo diventi giallo quando è completamente deprotonato ed esiste come 4-nitrofenolato.
Un errore comune nella misurazione dell’attività enzimatica utilizzando questi substrati è quello di eseguire i saggi a pH neutro o acido senza considerare che solo parte del prodotto cromoforico è ionizzato. Il problema può essere superato fermando la reazione con idrossido di sodio (NaOH) o altra base forte, che converte tutto il prodotto in 4-nitrofenossido; il pH finale deve essere > circa 9,2 per garantire che più del 99% del prodotto sia ionizzato. In alternativa, l’attività dell’enzima può essere misurata a 348 nm, il punto isobestico per il 4-nitrofenolo/4-nitrofenossido.