Mik azok az immunpróbák?

By Dr. Sanchari Sinha Dutta, Ph.D.Reviewed by Dr. Surat P, Ph.D.

Az immunpróbák olyan bioanalitikai módszerek, amelyek az antigén-antitest reakció specifitását használják a célmolekulák biológiai mintákban történő kimutatására és mennyiségi meghatározására. Ezeket a módszereket gyakran alkalmazzák a klinikai diagnosztikában, a gyógyszerkutatásban, a gyógyszerellenőrzésben és az élelmiszer-vizsgálatokban.

Khamkhlai Thanet |

Az immunoassayk típusai

Az immunoassay elve azon alapul, hogy egy fix mennyiségű jelölt analit és egy változó mennyiségű nem jelölt minta analit verseng az analit ellen specifikusan termelt antitest korlátozott számú kötőhelyének megkötéséért. Ezek a módszerek a célmolekula kvantitatív, félkvantitatív vagy kvalitatív kimutatására használhatók.

Radioimmunoassay (RIA)

A radioimmunoassayk radioizotópot használnak jelölőként hormonok, gyógyszerek és vírusantigének mennyiségi meghatározására. A radioaktívan jelölt antigén ismert koncentrációját inkubálják az adott antigénre specifikus antitest rögzített koncentrációjával. Ezt a radioaktívan jelölt antigén-antitest komplexet ezután összekeverik egy biológiai mintával, amely ugyanannak az antigénnek egy ismeretlen koncentrációját tartalmazza.

Elvileg, ha a minta antigénjének koncentrációja magasabb, mint a radioaktívan jelölt antigéné, a minta antigénje a radioaktívan jelölt antigén helyettesítésével megköti a korlátozott számú antitest-kötőhelyet. Ezután ezeknek a szabad (nem antitesthez kötött) radioaktívan jelölt antigéneknek a radioaktivitását mérik; ami egyenesen arányos a biológiai mintában jelen lévő nem jelölt antigén koncentrációjával.

A radioizotópok rövid felezési ideje, valamint a használatukkal járó egészségügyi kockázatok azonban jelentősen korlátozzák e módszer alkalmazását számos laboratóriumban.

Enzimhez kötött immunoszorbens próba (ELISA)

Az ELISA során egy enzimet egy olyan antitesthez kötnek, amelyet specifikusan egy adott antigén ellen neveltek.

A célantigént tartalmazó biológiai mintáknak meg kell kötniük az enzimmel jelölt antitestet, és a reakciót a reakcióelegyhez adott enzimspecifikus szubsztrát segítségével láthatóvá kell tenni. Az enzim-specifikus szubsztrát kötődik az antitesthez kötött enzimhez, és színes terméket hoz létre, amely kromogén vagy kemilumineszcens képalkotó technikákkal kimutatható.

Az ELISA nagy specificitással és érzékenységgel rendelkezik, ezért gyakran használják antitestek vagy gyógyszerek nagy áteresztőképességű szűrésére.

Fluorimmunoassays

Az antitestek jelölésére fluoreszcens szondákat használnak. Az érdeklődésre számot tartó antigént tartalmazó biológiai mintákat fluoreszcensen jelölt antitesttel inkubálják. Az így kapott antigén-antitest komplex fluoreszcencia-intenzitását mérik a célantigén mennyiségi meghatározásához.

Kémilumineszcens immunoassays

A lumineszcens molekulák a gerjesztett állapotból az alapállapotba való visszatéréskor látható vagy közel látható fényt (lumineszcenciát) bocsátanak ki, amely lumineszcens jelmérő eszközökkel detektálható.

A kemilumineszcens immunvizsgálatokban a luminofor markerek, mint például az akridínium-észterek, közvetlenül használhatók; vagy enzimatikus markerek, beleértve az alkalikus foszfatázt és a lóretek-peroxidázt, adamantil-1,2-dioxetán-aril-foszfát (AMPPD), illetve luminol szubsztrátokkal közvetve használhatók.

A módszer legfőbb előnye, hogy a kiolvasás fokozók alkalmazásával növelhető, amelyek lehetővé teszik a reakció hosszabb ideig történő folytatását anélkül, hogy a jel intenzitása csökkenne.

Counting immunoassays

A counting immunoassays részecskeszámlálási technológiát alkalmaz. A polisztirol gyöngyöket (latex részecskéket) az adott antigénre specifikus antitestekkel vonják be. A célantigént tartalmazó biológiai mintával inkubálva ezek a gyöngyök immunkomplexeket képeznek, amelyek látható csomókat alkotnak (agglutináció).

A célantigén koncentrációjától függően néhány gyöngy nem kötődik, és egy sejtszámláló segítségével megszámolható. A nem kötött gyöngyök száma fordítottan jelzi a célantigén koncentrációját.

Trendek az immunoassay-kben

Korszerű immunoassay-ket fejlesztenek, amelyek ultraérzékenyek és kevésbé időigényesek. A felületi plazmonrezonancia (SPR) alapú, jelölésmentes immunoassay az egyik ilyen példa, amely számos különleges tulajdonsággal rendelkezik, mint például szupergyors elemzés (perceken belül), minimális minta- és reagensigény, jelölésmentes mikrofluidikus immunoassay protokoll és teljesen automatizált, nagy áteresztőképességű rendszer.

Az okostelefon-alapú immunoassay-formátumok, a multiplex gyöngyalapú vizsgálatok, a laterális áramlású immunoassay-formátumok emellett a legújabb fejlesztések közé tartoznak, amelyek megkönnyítették az egészséggel kapcsolatos szövődmények valós idejű nyomon követését és kezelését.

Az író

Dr. Sanchari Sinha Dutta

Dr. Sanchari Sinha Dutta tudománykommunikátor, aki hisz a tudomány erejének terjesztésében a világ minden szegletében. Biológiából és humán fiziológiából szerzett alapdiplomát (Bachelor of Science, B.Sc.) és mesterdiplomát (Master of Science, M.Sc.). A mesterdiploma megszerzése után Sanchari humán fiziológiából doktorált. Több mint 10 eredeti kutatási cikk szerzője, amelyek mindegyike világhírű nemzetközi folyóiratokban jelent meg.

Hivatkozások