¿Qué son los inmunoensayos?

Por el Dr. Sanchari Sinha Dutta, Ph.D.Revisado por el Dr. Surat P, Ph.D.

Los inmunoensayos son métodos bioanalíticos que utilizan la especificidad de una reacción antígeno-anticuerpo para detectar y cuantificar moléculas objetivo en muestras biológicas. Estos métodos se utilizan con frecuencia en el diagnóstico clínico, el descubrimiento de fármacos, la monitorización de fármacos y las pruebas alimentarias.

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Tipos de inmunoensayos

El principio de un ensayo inmunológico se basa en las competiciones entre una cantidad fija de analito marcado y una cantidad variable de analito de muestra no marcado para unir un número limitado de sitios de unión de un anticuerpo criado específicamente contra el analito. Estos métodos pueden utilizarse para detectar una molécula objetivo de forma cuantitativa, semicuantitativa o cualitativa.

Radioinmunoanálisis (RIA)

Los radioinmunoanálisis utilizan un radioisótopo como etiqueta para cuantificar hormonas, fármacos y antígenos virales. Una concentración conocida de antígeno radiomarcada se incuba con una concentración fija de anticuerpos específicos para ese antígeno. A continuación, este complejo antígeno-anticuerpo radiomarcado se mezcla con una muestra biológica que contiene una concentración desconocida del mismo antígeno.

En principio, si la concentración del antígeno de la muestra es mayor que la del antígeno radiomarcado, el antígeno de la muestra se unirá al número limitado de sitios de unión del anticuerpo sustituyendo al antígeno radiomarcado. A continuación, se mide la radiactividad de estos antígenos libres (no unidos a un anticuerpo) radiomarcados; que es directamente proporcional a la concentración de antígeno no marcado presente en la muestra biológica.

Sin embargo, la corta vida media de los radioisótopos, así como los peligros para la salud asociados a su uso, limitan considerablemente la aplicación de este método en muchos laboratorios.

Asunto de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

En un ELISA, una enzima está ligada a un anticuerpo que ha sido criado específicamente contra un antígeno de interés.

Se permite que las muestras biológicas que contienen el antígeno objetivo se unan al anticuerpo marcado con la enzima y la reacción se visualiza utilizando un sustrato específico de la enzima que se añade a la mezcla de reacción. El sustrato específico de la enzima se une a la enzima unida al anticuerpo, generando un producto coloreado que puede detectarse mediante técnicas de imagen cromogénicas o quimioluminiscentes.

ELISA tiene una alta especificidad y sensibilidad, por lo que se utiliza con frecuencia para el cribado de alto rendimiento de anticuerpos o fármacos.

Fluoroinmunoensayos

Se utilizan sondas fluorescentes para marcar anticuerpos. Las muestras biológicas que contienen un antígeno de interés se incuban con un anticuerpo marcado con fluorescencia. La intensidad de la fluorescencia del complejo antígeno-anticuerpo resultante se mide para cuantificar el antígeno diana.

Inmunoensayos de quimioluminiscencia

Las moléculas luminiscentes, al volver de un estado excitado a un estado básico, emiten luz visible o casi visible (luminiscencia), que puede ser detectada por dispositivos de medición de señales luminiscentes.

En los inmunoensayos de quimioluminiscencia, los marcadores luminóforos, como los ésteres de acridinio, pueden utilizarse directamente; o los marcadores enzimáticos, incluyendo la fosfatasa alcalina y la peroxidasa de rábano de caballo, pueden utilizarse indirectamente con el adamantílico 1, 2-dioxetano aril fosfato (AMPPD) y los sustratos de luminol, respectivamente.

La mayor ventaja de este método es que la lectura puede aumentarse utilizando potenciadores, que permiten que la reacción continúe durante más tiempo sin reducir la intensidad de la señal.

Inmunoensayos de recuento

Los inmunoensayos de recuento utilizan la tecnología de recuento de partículas. Las perlas de poliestireno (partículas de látex) se recubren con anticuerpos específicos para un antígeno de interés. Cuando se incuban con una muestra biológica que contiene el antígeno diana, estas perlas forman complejos inmunes, que forman grupos visibles (aglutinación).

Dependiendo de la concentración del antígeno diana, algunas perlas permanecen sin unirse y pueden contarse utilizando un contador de células. El número de perlas no unidas denota inversamente la concentración del antígeno diana.

Tendencias en inmunoensayos

Se están desarrollando inmunoensayos avanzados que son ultrasensibles y consumen menos tiempo. El inmunoensayo sin etiquetas basado en la resonancia de plasmón de superficie (SPR) es uno de esos ejemplos que presenta muchas características especiales, como un análisis ultrarrápido (en cuestión de minutos), un requisito mínimo de muestra y reactivos, un protocolo de inmunoensayo microfluídico sin etiquetas y un sistema totalmente automatizado con un alto rendimiento.

Además, los formatos de inmunoensayo basados en teléfonos inteligentes, los ensayos múltiplex basados en microesferas y los formatos de inmunoensayo de flujo lateral son algunos de los últimos avances que han facilitado el seguimiento y la gestión de las complicaciones relacionadas con la salud en tiempo real.

Escrito por

Dra. Sanchari Sinha Dutta

La Dra. Sanchari Sinha Dutta es una comunicadora científica que cree en la difusión del poder de la ciencia en todos los rincones del mundo. Es licenciada en Ciencias (B.Sc.) y tiene un Máster en Ciencias (M.Sc.) en biología y fisiología humana. Tras su máster, Sanchari cursó un doctorado en fisiología humana. Es autora de más de 10 artículos de investigación originales, todos ellos publicados en revistas internacionales de renombre.

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