Forskelle i lipogenese og lipolyse i overvægtige og ikke-overvægtige voksne humane adipocytter

Biol Res 41: 197-204, 2008

ARTIKEL

Forskelle i lipogenese og lipolyse i overvægtige og ikke-overvægtige voksne humane adipocytter

MARIANA CIFUENTES, CECILIA ALBALA og CECILIA V ROJAS

Instituttet for ernæring og fødevareteknologi (INTA), Universidad de Chile, Santiago, Chile.

Dirección para Correspondencia

ABSTRACT

Det er blevet foreslået, at forskelle i adipocytfunktion og/eller metabolisme mellem overvægtige og magre individer kan manifestere sig i funktionelle abnormiteter i fedtvævet, der fører til metaboliske forstyrrelser i forbindelse med fedme. Vi undersøgte lipogenese og lipolyse af omentale adipocytter fra overvægtige (OB) og ikke-overvægtige (NOB) mennesker. Den specifikke aktivitet af det lipogene markørenzym G3PDH var 50 % lavere i samlede adipocytter fra OB sammenlignet med den specifikke aktivitet hos NOB-personer. Omentale adipocytter fra OB-personer havde også lavere basal lipolytisk levéis og et lavere lipolytisk respons på p-adrenerge stimulus. Kolesteroludtømning af adipocytplasmamembranen ved hjælp af methyl β-cyclodextrin forårsagede en lipolytisk effekt på adipocytter i begge grupper tilsammen, men da overvægtige og magre forsøgspersoner blev analyseret separat, var responsen kun signifikant hos de overvægtige. Vi fremlægger beviser for en anderledes lipogen og lipolytisk profil i adipocytter i omentale adipocytter hos overvægtige individer og foreslår en relevant rolle for plasmamembran-kolesterol, hvor virkningen af dets fjernelse i OB- og NOB adipocytlipolyse er forskellig.

Nøglebegreber: adipocytter, kolesterol, lipogenese, lipolyse, fedme, triglyceridmetabolisme.

INDLEDNING

Overskuddet af visceralt fedtvæv er forbundet med adskillige sundhedsproblemer. En forøget adipositet er forbundet med øget fedtcellevolumen. Således har overvægtige individáis en relativt stor mængde hypertrofiske adipocytter sammenlignet med magre personer. Undersøgelser af dyre- og menneskefedtceller har vist, at flere metaboliske funktioner i adipocytter ændres med en større cellestørrelse, f.eks. insulinfølsomhed og glukosemetabolisme, foruden adipokinsekretion og genekspressionsprofiler (Bluher et al., 2004; Salans og Doherty, 1971; Salans et al., 1974; Smith, 1971; Yang et al., 2004). Dette har ført til den antydning, at funktionel dominans af hypertrofiske og/eller metabolisk forringede celler i fedtvævet er en vigtig kausal effekt for et lavt respons fra vævets side på homeostatiske signáis og dermed foreviger eller forværrer den overvægtige tilstand. For at teste denne hypotese undersøgte vi in vitro lipogenese og lipolyse i isolerede omentale adipocytter fra voksne med OB og NOB. I betragtning af at lipolysesignalering afhænger af proteiner, der er placeret i caveolae, og at forstyrrelse af organiseringen af disse kolesterolrige strukturer er blevet forbundet med metaboliske ændringer i adipocytter med fedme (Le Lay et al., 2004), evaluerede vi også virkningen af fjernelse af kolesterol fra plasmamembranen ved hjælp af methyl (β-cyclodextrin (M(βCD) i OB og NOB adipocytlipolyse.

De nuværende resultater understreger en forskellig lipogen og lipolytisk profil mellem magre og overvægtige personer. Vores data viser den metaboliske relevans af det lavere indhold af kolesterol i plasmamembranen i adipocytter hos overvægtige personer, hvilket påvirker den fysiologiske regulering af lipolyse.

MATERIALER OG METODER

Isolering af adipocytter

Humant omental fedt blev opnået fra 25 overvægtige (OB) og ikke-overvægtige (NOB) personer, der undergik valgfri abdominal kirurgi (enten gastrisk bypass, gynækologisk eller gastrointestinal). Emnernes aldersinterval var 29-79 år, og deres body mass index (BMI) varierede mellem 18 og 54 kg/m2. Grænseværdien for at definere fedme blev anset for at være i overensstemmelse med NIH’s definition af BMI > 30 kg/m2. Tolv personer (9 mænd, 3 kvinder) var NOB (BMI 23,3 ± 3,4 kg/m2), mens 13 personer var OB (BMI 38,2 ± 4,3 kg/m2; 4 mænd, 9 kvinder). Vi observerede ikke nogen indflydelse af køn på de undersøgte parametre. Protokollen blev godkendt af Institutional Review Board ved INTA, University of Chile, og informeret samtykke blev underskrevet af donorerne. Adiposevæv, der blev fjernet under operationen, blev nedsænket i saltopløsning og transporteret til laboratoriet for at blive behandlet inden for en time. Ved ankomsten blev vævet vasket flere gange med Hanks’ balanceret saltopløsning (HBSS) for at fjerne alt synligt bindevæv, blodpropper og kar, hvorefter det blev hakket i små stykker (2-3 mm2) og dyrket i MI99 (Invitrogen, Carlsbad, CA) médium, suppleret med antibiotika (penicillin-streptomycin) ved 37 °C i et inkubator med kontrolleret atmosfære. Der var en 2-dages inkubationsperiode for vævet for at minimere interindividuel variabilitet forårsaget af emnefaktorer som f.eks. hormonelt miljø, nuværende sundhedstilstand eller medicinering. Adipocytter blev isoleret ved hjælp af en metode baseret på Rodbell’s (1964) arbejde. Kort fortalt blev hakket fedtvæv inkuberet med lg/1 collagenase type I (Worthington Biochemical Corp. Lakewood, NJ) ved 37 °C i 60 minutter under konstant omrøring. Den resulterende cellesuspension blev filtreret gennem en steril gazepude, og da adipocytter spontant løsner sig fra den vandige fase, blev de genvundet ved forsigtigt at suge det flydende lag op med en plástisk pipette og skyllet to gange med 5 volumener HBSS. De isolerede adipocytter blev enten straks anvendt til lipolyseundersøgelser eller frosset ned med henblik på senere bestemmelse af glycerol-β-fosfatdehydrogenase (G3PDH).

Den lipolytiske respons på (β-adrenerge stimulus og påvisning af lipogen aktivitet (se nedenfor) viste tilstedeværelsen af levedygtige adipocytter efter digestión af vævet.

Lipogenese og lipolyse

Syntesen af triglycerider i adipocytten anvender både præfabrikerede og de novo-fremstillede fedtsyrer, mens glycerolryggen kommer fra glukoseafledt glycerol-β-fosfat. Den lipogene kapacitet blev vurderet ved hjælp af den specifikke aktivitet af enzymet G3PDH, som katalyserer dannelsen af triglyceridernes glycerolryggekæde fra dihydroxyacetonephosphat, der leveres via glykolysen. Dette enzym anses for at være hastighedsbegrænsende for triglyceridsyntese i fedtvæv, da det i dette væv er den solé kilde til glycerol-β-fosfat. Dets anvendelse som en lipogen markør i modne adipocytter understøttes af opreguleringen af dets mRNA og aktivitet ved insulin (Moustaid et al., 1996; Rumberger et al., 2003). Kort fortalt blev isolerede adipocytter homogeniseret (10 slag ved 1800 rpm med et Glas-Col homogeniseringssystem, Glas-Col, IN) ved hjælp af et glasrør udstyret med en teflonpisel ved 4°C i en buffer indeholdende 0,25 M saccharose, lmM EDTA, 50mM triethanolamin og lmM dithiotreithol. Homogenatet blev centrifugeret ved 14 000 x g, 4°C i 30 min. G3PDH-aktiviteten blev bestemt i supernatanten efter metoden af Kozak og Jensen (1974) ved at måle NADH-oxidation (tidsforløb af ændringen i absorbans ved 340 nm ved 37°C) på en mikropladelæser (EL-808, BioTek Instruments Inc, Winooski, VT) ved hjælp af dihydroxyacetonephosphat som substrat for enzymet. Reaktionen var lineær i forhold til tiden i hele analyseperioden. En enhed af enzymaktivitet svarer til oxidation af 1 nmol NADH pr. minut under de ovenfor anførte betingelser. Proteinkoncentrationen i det opløselige ekstrakt blev målt ved hjælp af Bradford-metoden (Bradford, 1976).

Lipolyse blev vurderet i løbet af 48 timers fedtkulturen ved måling af kumulativ glycerol frigivet i MI99-kulturmediet (Reagens til bestemmelse af fri glycerol, Sigma, St Louis MO). Desuden blev det akutte lipolytiske respons på (β-adrenerge stimulus, med eller uden udtømning af plasmamembran-kolesterol (60 min præinkubation med 10 mM MβCD ), evalueret ved at måle det samlede glycerol, der blev frigivet under en 90-minutters inkubation af 10% adipocyt-suspensioner ved 37°C med let kontinuerlig omrøring og tilsætning af 10μM isoproterenol (Sigma) eller vehikel. Til lipolysevurdering under fedtvævskultur udtrykkes glycerolværdierne pr. mg væv, mens de ved lipolysebestemmelse i adipocyttesuspensioner normaliseres i forhold til de samlede cellulære lipider, som beskrevet af Carpéné (2001) eller, i forsøg med lipolytiske midler, i forhold til den respektive basale (ikke-stimulerede) kontrol. De samlede cellulære lipider blev ekstraheret efter metoden af Dolé og Meinertz (1960) og bestemt gravimetrisk. I lyset af en rapporteret uafhængig sammenhæng mellem cellestørrelse og lipolyse, der kan fungere som en forvirrende faktor, især i vores undersøgelser, hvor vi sammenlignede OB- og NOB-emner, blev udtrykket pr. mg lipid anset for at være det mest hensigtsmæssige. Som vist af Large et al. (1999) er glycerolreléase udtrykt pr. lipidindhold i høj grad korreleret med aktiviteten af hormonfølsom lipase i undersøgelser af overvægtige og magre menneskelige forsøgspersoner og mere relevant for lipolytisk kapacitet end pr. celleantal på grund af det øgede fedtcellevolumen hos overvægtige.

Statistik

Differencerne mellem middelværdierne blev analyseret ved hjælp af Student’s t-test og blev betragtet som signifikante ved p≤0,05. Pearsons korrelationskoefficient blev anvendt til at evaluere associationerne for kontinuerlige variabler. Data er udtrykt som gennemsnit ± SEM.

RESULTATER

Lipogenese

Den specifikke aktivitet af det lipogene enzym G3PDH var næsten halvt i OB-personerne sammenlignet med den i adipocytter fra NOB (p<0,05, Fig. 1). I overensstemmelse hermed var der en signifikant omvendt korrelation mellem lipogenesemarkøren og forsøgspersonernes BMI (Fig. 1, indsat, r2=0,31, p=0,01). Det er værd at bemærke, at der ikke var nogen forskelle i proteinkoncentrationen (brugt til at normalisere G3PDH-aktiviteten) mellem OB- og NOB-fagene, som kunne have skævvredet disse resultater.

Lipolyse

Lipolysen

Reléase af glycerol til inkubationsmediet under dyrkning af helt omentalt fedtvæv eller isolerede adipocytter blev anvendt som en indikator for lipolytisk aktivitet. Både basal og isoproterenolstimuleret lipolyse var lavere i isolerede adipocytter fra OB-personerne (henholdsvis p<0,05 og p<0,01, fig. 2). I overensstemmelse med disse observationer var der en meget signifikant omvendt korrelation mellem lipolyse og forsøgspersonens BMI for hele vævet (r2=0.46, p<0.0005, indsat, Fig. 2) og isolerede adipocytter (basal: r2=0.28, p<0.01; β-adrenerge-stimuleret: r2=0.17, p<0.05, n=20). Adipocytter fra overvægtige personer viste et lavere respons på (β-adrenerge stimulus sammenlignet med dem fra deres magre modstykker (Fig. 3, p<0.05).

Bekæmpelse af adipocytter til 10 mM MβCD i en delmængde af 11 prøver forårsagede en signifikant stigning i basal lipolyse. Denne stigning var direkte proportional med forsøgspersonens BMI (r2=0,5, p<0,05, fig. 4). Det lipolytiske respons på (β-adrenerge stimulering blev signifikant reduceret, når adipocytter blev udsat for M(βCD (henholdsvis 345 ± 50 % vs. 199 ± 33 %, p< 0,05). Interessant nok blev der ved sammenligning af virkningen af M(βCD versus vehikel observeret en signifikant reduktion i det lipolytiske respons på isoproterenol i adipocytter fra personer med BMI>40 kg/ m2 (morbidt overvægtig, i henhold til NIH-definitionen), mens magre personer ikke viste nogen signifikant forskel (Fig. 5). I overensstemmelse hermed blev der fundet en signifikant korrelation mellem BMI og forholdet mellem lipolytisk respons på 10μM isoproterenol i tilstedeværelse og fravær af 10 mM M(βCD (r2=0,46, p<0,05).

DISKUSSION

I det foreliggende arbejde undersøgte vi lipogenese og lipolyse i adipocytter isoleret fra omentalt fedtvæv af OB- og NOB-voksne inden for et bredt BMI-område (18-54 kg/m2). Vores observationer viser, at den specifikke aktivitet af lipogenesemarkøren G3PDH i OB var halvdelen af den specifikke aktivitet i adipocytter fra deres NOB-modstykker. På den anden side var højere BMI’er forbundet med lavere basal og (β-adrenerge stimuleret lipolyse og en større følsomhed over for plasmamembransignaleringsforringelse som følge af kolesterolfjernelse. En større triglyceridakkumulering i OB adipocytten kan være relateret til den lavere lipolytiske aktivitet, som vi observerede i denne gruppe, som andre også har foreslået (Langin et al., 2005). Desuden kunne den lavere G3PDH-specifikke aktivitet, som vi fandt i OB, hvilket kan resultere kontraintuitivt, repræsentere en nedsat kapacitet til at lagre de overskydende cirkulerende triglycerider, hvilket sandsynligvis vil resultere i hypertriglyceridæmi og fedtophobning i andre regioner af kroppen, med de kendte skadelige virkninger, der er forbundet med det metaboliske syndrom.

Ved anvendelse af en in vivo tilgang hos mennesker observerede Dodt et al. (2003) et afstumpet lipolytisk respons på intraneural stimulering hos overvægtige kvinder, hvilket er i overensstemmelse med vores in vitro resultater og understøtter den opfattelse, at fedme i det mindste delvist kan være forbundet med et lavt lipolytisk respons på sympatisk aktivering. I overensstemmelse hermed undersøgte Gómez-Ambrosi et al. (2004) mønstret for genekspression af omentalt fedtvæv og viste, at overvægtige personer havde sænket og øget ekspression af henholdsvis lipolyseinducerende og -repressorgener.

Der er betydelig uoverensstemmelse i litteraturen med hensyn til normalisering af lipolysedata. I betragtning af den rapporterede direkte sammenhæng mellem adipocytcellestørrelse og lipolyse (Large et al., 1999) og den større relative overflod af større adipocytter hos de overvægtige (Large et al., 1999), forventes det, at fedtvævet viser større ujusteret lipolyse blandt de overvægtige end blandt NOB-individuáis. For at undgå en forvirrende faktor på grund af forskellig cellestørrelsesfordeling i OB versus NOB blev vores glycerol reléase valúes således normaliseret ved at udtrykke dem pr. mg total lipid, hvorved lipolytisk aktivitet for en given lipidmasse blev vurderet. Til støtte for dette har undersøgelser af overvægtige og magre mennesker observeret en høj korrelation mellem aktiviteten af det centrale lipolytiske enzym HSL (hormonfølsom Upase) og adipocytglycerolreléase udtrykt pr. lipidindhold (Large et al., 1999). Forfatterne anførte, at lipidindholdet er mere relevant for den lipolytiske kapacitet end normalisering pr. celleantal på grund af det øgede fedtcellevolumen hos de overvægtige. Det er værd at bemærke, at (β-adrenerge stimulering over basale forhold også viste sig at være lavere hos OB-personerne, og denne vurdering er uafhængig af cellestørrelse eller -antal, da den er normaliseret med den tilsvarende kontrol (hver basal valué).

Rollen af membranens kolesterolindhold for caveolae-integritet, specifik signaltransduktion og korrekt cellefunktion er allerede blevet anerkendt (Le Lay et al. 2001). Det er blevet vist, at hypertrofiske adipocytter har et forringet stofskifte sammen med et lavere kolesterolindhold i plasmamembranen (Le Lay et al. 2001). Vores observationer udvider dem af Le Lay et al. (2001, 2004), som viste, at kolesteroludtømning i adipocytter inducerer insulinresistens og ændringer i ekspressionen af en række gener, der er relevante for fedtstofskiftet. Disse resultater blev fremlagt som bevis for kolesterolreduktion i plasmamembranen som en forbindelse mellem adipocythypertrofi og metabolisk forringelse, hvilket understøttes af vores nuværende resultater. Vores forsøg med eksponering af adipocytter for M(βCD forårsagede en betydelig stigning i basal lipolyse (forventet efter ændring af plasmamembranens caveolae-integritet, hvilket resulterede i en nedsat fosfodiesterase 3B-aktivitet ) og følgelig i et reduceret lipolytisk respons på den (β-adrenerge stimulus. Interessant nok observerede vi en signifikant sammenhæng mellem virkningen af M(βCD på basal lipolyse og BMI. Desuden understøtter den signifikante korrelation mellem BMI og forholdet mellem isoproterenol og basal lipolyse i tilstedeværelse og fravær af M(βCD en større modtagelighed for adipocytter fra overvægtige personer for kolesteroludtømningsdrevet plasmamembranforandret signalering.

Udvidede fedtceller, der vides at være mere talrige, når personers BMI stiger (Julien et al., 1989; Salans et al., 1973; Van Harmelen et al.., 2003) er insulinresistente (Olefsky 1977) og viser et særskilt sekretionsmønster, der har knyttet dem til fedmeassocierede lidelser (Imbeault et al., 1999; Van Harmelen et al., 2000).

Interessant nok er de fedtvævsspecifikke insulinreceptor knockout-mus (Bluher et al, 2004) viser polarisering af adipocytter i to subpopulationer af små (<50μm diameter) og store >1OOμm) celler, hvilket ledsages af forskelle i triglyceridsyntese og lipolyse, blandt andre parametre. De her rapporterede observationer viser iboende forskelle i triglyceridmetabolisme mellem omentale adipocytter fra OB- og NOB-emner, og vi foreslår, at berigelsen i hypertrofierede og membran-kolesterolfattige adipocytter kan være drivkraften bag sådanne ændringer. Det er muligt, at det nedsatte lipolytiske respons med tiden bidrager til udvidelsen af triglyceriddepotet. Den reducerede evne til at lagre yderligere triglycerider, ville resultere i en øget mængde cirkulerende lipider, hvilket forhøjer de risici, der er forbundet med det metaboliske syndrom.

Så vidt vi ved, har ingen anden undersøgelse evalueret lipogenese og lipolyse i omentale adipocytter fra menneskelige OB- og NOB-emner. Det foreliggende arbejde viser relevante forskelle i omentale adipocytters triglyceridmetabolisme hos overvægtige personer sammenlignet med ikke-overvægtige personer og tyder på, at overvægtige individáis’ adipocytter er mere modtagelige for plasmamembranens reducerede kolesterolindhold. Selv om vi havde til hensigt at minimere emnefaktorer, kan vi ikke udelukke, at komorbiditeter, der er til stede hos overvægtige personer, kan påvirke fedtcellernes forskellige adfærd. Sammenligningen af triglyceridhåndteringen mellem disse grupper og i et fedtdepot af så patogen relevans hjælper med at forstå forskelle i metabolisme og reaktionsevne, som kan være mål for farmakologisk intervention og kræver yderligere undersøgelser.

TEKNOLOGIER

Vi vil gerne takke Dr. Miguel A. Celis på Tisné Hospital, Dr. Leonardo Rodríguez på DIPRECA Hospital og Dr. Cristian Cavalla, James Hamilton og Gonzalo Wiedmaier på Padre Hurtado Hospital for den uvurderlige hjælp med at fremskaffe fedtvæv, samt Mrs. Marisol Blanco og Rodrigo Brücher for deres tekniske bistand.

STIPSSTØTTE

Støttet af tilskud fra DI-U de Chile (nr. Mult 04/06-2 til C. Rojas og 1-04/01-2 til M. Cifuentes) og FONDECYT (nr. 1070632 til C. Rojas og 1-04/01-2 til M. Cifuentes) og FONDECYT (nr. 1070632 til C. Rojas). Rojas, nr. 1080232 til M. Cifuentes).

BLUHER M, WILSON-FRITCH L, LESZYK J, LAUSTSEN P G, COR VERA S, KAHN CR (2004) Role of insulin action and cell size on protein expression patterns in adipocytes. J Biol Chem 279: 31902-31909.

BRADFORD MM (1976) En hurtig og følsom metode til kvantificering af mikrogram mængder af protein ved hjælp af princippet om binding af proteinfarvestof. Anal Biochem 72: 248-254.

CARPENÉ C (2001) Assays af adrenerge receptorer, herunder lipolyse og bindingsmålinger. In: AILHAUD G (ed) Adipose Tissue Protocols. New Jersey: Humana Press.

DODT C, LONNROTH P, WELLHONER JP, FEHM HL, ELAM M (2003) Sympatic control of white adipose tissue in lean and obese humans. Acta Physiol Scand 177: 351-357.

DOLÉ VP, MEINERTZ H (1960) Mikrobestemmelse af langkædede fedtsyrer i plasma og væv. J Biol Chem 235: 2595-2599.

GÓMEZ-AMBROSI J, CATALÁN V, DIEZ-CABALLERO A, MARTÍNEZ-CRUZ LA, GIL MJ, GARCÍA-FONCILLAS J, CIENFUEGOS JA, SALVADOR J, MATO JM, FRUHBECK G (2004) Gene expression profile of omental adipose tissue in human obesity. FASEB J 18: 215-217.

IMBEAULT P, LEMIEUX S, PRUDHOMME D, TREMBLAY A, NADEAU A, DESPRES JP, MAURIEGE P (1999) Relationship of visceral adipose tissue to metabolic risk factors for coronary heart disease: is there a contribution of subcutaneous fat cell hypertrophy? Metabolisme 48: 355-362.

JULIEN P, DESPRES JP, ÁNGEL A (1989) Scanning electrón microscopy of very small fat cells and mature fat cells in human obesity. J Lipid Res 30: 293-299.

KOZAK LP, JENSEN JT (1974) Genetisk og udviklingsmæssig kontrol af flere former af L-glycerol 3-fosfatdehydrogenase. J Biol Chem 249: 7775-7781.

LANGIN D, DICKER A, TAVERNIER G, HOFFSTEDT J, MAIRAL A, RYDEN M, ARNER E, SICARD C, JENKINS M, VIGUERIE N, VAN HARMELEN V, GROSS RW, HOLM C, ARNER P (2005) Adipocyte Upases and defect of lipolysis in human obesity. Diabetes 54: 3190-3197.

LARGE V, REYNISDOTTIR S, LANGIN D, FREDBY K, KLANNEMARK M, HOLM C, ARNER P (1999) Decreased expression and function of adipocyte hormone-sensitive Upase in subcutaneous fat cells of obese subjects. J Lipid Res 40: 2059-2066.

LE LAY S, KRIEF S, FARNIER C, LEFRERE I, LE LIEPVRE X, BAZIN R, FERRÉ P, DUGAIL I (2001) Cholesterol, et cellestørrelsesafhængigt signal, der regulerer glukosemetabolisme og genekspression i adipocytter. J Biol Chem 276: 16904-16910.

LE LAY S, FERRÉ P, DUGAIL I (2004) Adipocyte cholesterolbalance i fedme. Biochem Soc Trans 32: 103-106.

MOUSTAID N, JONES BH, TAYLOR JW (1996) Insulin øger den lipogene enzymaktivitet i humane adipocytter i primærkultur. J Nutr 126: 865-870.

NILSSON R, AHMAD F, SWARD K, ANDERSSON U, WESTON M, MANGANIELLO V, DEGERMAN E (2006) Plasmamembranens cykliske nukleotidfosfodiesterase 3B (PDE3B) er associeret med caveolae i primære adipocytter. Cell Signal 18: 1713-1721.

OLEFSKY JM (1977) Mekanismer for nedsat insulinresponsivitet hos store adipocytter. Endocrinology 100: 1169-1177.

RODBELL M (1964) Metabolisme hos isolerede fedtceller. I. Effekter af hormoner på glukosemetabolisme og lipolyse. J Biol Chem 239: 375-380.

RUMBERGER JM, WU T, HERING MA, MARSHALL S (2003) Rolle af hexosamin biosyntese i glukose-medieret opregulering af lipogene enzym mRNA levéis: virkninger af glukose, glutamin og glucosamin på glycerophosphat dehydrogenase, fedtsyresyntase og acetyl-CoA carboxylase mRNA levéis. J Biol Chem 278: 28547-28552.

SALANS LB, DOUGHERTY JW (1971): The effect of insulin on glucose metabolism by adipose cells of different size Influence of cell lipid and protein content, age, and nutritional state. J Clin Invest 50: 1399-1410.

SALANS LB, CUSHMAN SW, WEISMANN RE (1973): Undersøgelser af humant fedtvæv. Adiposecellestørrelse og -antal hos ikke-obese og overvægtige patienter. J Clin Invest 52: 929-941.

SALANS SB, BRAY GA, CUSHMAN SW, DANFORTH JR E, GLENNON JA, HORTON ES, SIMS EA (1974) Glukosemetabolisme og respons på insulin i humant fedtvæv ved spontan og eksperimentel fedme. Virkninger af kostsammensætning og fedtcellestørrelse. J Clin Invest 53: 848-856.

SMITH U (1971) Effekten af cellestørrelse på lipidsyntese af humant fedtvæv in vitro. J Lipid Res 12: 65-70.

VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, WEYER C, FOLEY JE, BOGARDUS C, TATARANNI PA, PRATLEY RE (2000) Enlarged subcutaneous abdominal adipocyte size, but not obesity itself, predicts type II diabetes independent of insulin resistance. Diabetologia 43: 1498-1506.

VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, HAUNER H (2003) Effect of BMI and age on adipose tissue cellularity and differentiation capacity in women. Int J Obes Relat Metab Disord 27: 889-895.

YANG X, JANSSON PA, NAGAEV I, JACK MM, CARVALHO E, SUNNERHAGEN KS, CAM MC, CUSHMAN SW, SMITH U (2004) Bevis for nedsat adipogenese ved insulinresistens. Biochem Biophys Res Commun 317: 1045-1051.