Această confuzie, în special în domeniul biofarmaceutic al antigenelor infecțioase și, în special, al virusurilor, conduce la situații de nepricepere tehnică, neconformitate și, în cele din urmă, la un risc crescut de contaminare încrucișată între produse. Toate acestea subliniază importanța clarității în biocontaminare.
La începutul anilor 2000, din cauza presiunilor externe, industria a fost obligată să elimine formolul (CMR) care era utilizat pe scară largă ca reactiv de decontaminare. Adoptarea unor reactivi de decontaminare alternativi a evidențiat trei puncte principale: (i) decontaminarea istorică a scos la iveală ineficiența relativă a formalinei în lumina practicilor actuale; (ii) validarea eficienței performanței decontaminanților este dificilă (prea mulți factori variabili externi care îi influențează performanța); (iii) a evidențiat necesitatea unei analize aprofundate a performanței tuturor instrumentelor și proceselor de decontaminare. Aceste observații sunt susținute și de ambițiile de eradicare a poliomielitei realizate de OMS (GAP-III), care a evidențiat, de asemenea, aceste lacune și puncte slabe.
În prezent, tehnologiile asociate diferitelor metode de decontaminare (de exemplu, fizică, termică, chimică) sunt numeroase și oferă un panou larg de opțiuni care pot fi utilizate în industriile biofarmaceutice și, în special, în companiile producătoare de vaccinuri. În consecință, datoria de stăpânire și validare a performanțelor proceselor de decontaminare nu mai este o opțiune (!) Cu toate acestea, apar noi constrângeri care necesită resurse umane și tehnice substanțiale cu impact asupra costurilor proiectului, poate exponențial, ajungând la milioane de euro!
Acest articol își propune să servească drept „lecții învățate” și se bazează pe mulți ani de investigații de decontaminare alternativă. Articolul împărtășește, de asemenea, strategia, concepută inițial în 2004, care a fost concepută pentru a anticipa noua paradigmă a stării de fapt a decontaminării. În cele din urmă, acest articol își propune să participe la educația cu privire la acest subiect adesea neînțeles și adesea ignorat…
Definiții
Este important să se clarifice definițiile farmaceutice ale „curățării” și „dezinfecției”, iar o elucidare suplimentară poate fi evidențiată prin exemple.
Curățare
Rezultat al unei operațiuni într-un timp limitat, care permite retragerea tuturor compușilor inerți indezirabili dobândiți pe suprafețele contaminate, în conformitate cu obiectivele stabilite. Rezultatul acestei operațiuni se limitează la compușii prezenți în momentul operațiunilor.
Acesti compuși provin din surse naturale din mediul înconjurător sau din produsul manipulat.
Obiectivele vizate de CURĂȚARE sunt compușii inerți (zone de producție sau de laborator)
Disinfecție:
Rezultatul unei operațiuni într-un timp limitat, care permite retragerea, inactivarea sau uciderea tuturor microorganismelor nedorite purtate de mediile inerte contaminate, în conformitate cu obiectivele stabilite. Rezultatul acestei operațiuni este limitat la microorganismele prezente în momentul operațiunilor (AFNOR NFT 72-101).
Aceste microorganisme nu sunt specifice și provin din surse naturale din mediul înconjurător.
Obiectivele urmărite prin DEZINFECȚIE sunt microorganismele din mediul înconjurător (zonele de producție sau de laborator).
Definirea decontaminării poate decurge din cele două anterioare:
Decontaminare:
Rezultatul unei operații într-un timp limitat, care permite inactivarea, uciderea sau distrugerea tuturor microorganismelor specifice manipulate în funcție de obiectivele stabilite. Aceste microorganisme sunt cunoscute și specifice.
Obiectivele urmărite prin DECONTAMINAȚIE sunt de a controla diseminarea microorganismelor specifice (produse vaccinale sau microorganisme manipulate în laborator)
În concluzie, trebuie interzisă utilizarea termenului de dezinfecție ca sinonim al decontaminării. În cele din urmă Curățarea nu asigură dezinfecția sau decontaminarea. În mod similar, dezinfecția nu asigură decontaminarea sau curățarea.
Strategia decontaminării virale
Considerând toate tehnologiile de decontaminare (tehnica fizică, reactivi chimici…) cu mecanisme diferite, pe care le vom numi „Arme” (vezi tabelele 1 & 2) cuplate cu numărul imens de virusuri, pe care le vom numi „Ținte” , lista validărilor de efectuat poate deveni imposibil de gestionat, lungă și cu costuri prohibitive.
| Modalități chimice | |
| Reactivi lichizi | Decontaminare în profunzime și/sau de suprafață |
| Decontaminare gazoasă | Decontaminare preponderent de suprafață |
| Modele fizice | |
| Radiații | Decontaminare în profunzime și la suprafață |
| Lumină (pulsată) | Decontaminare în profunzime și/sau la suprafață |
| e-fascicul | (în principal) Decontaminare de suprafață |
| Modele termice | Utilizate în principal pentru decontaminarea în profunzime |
| (Autoclave, Cuptor) | |
Tabelul 1: Moduri de decontaminare, pe care le vom numi „arme”
Din fericire, virusurile eliberează proprietăți interesante, cum ar fi (i) incapacitatea lor de a genera mutații rezistente împotriva reactivilor chimici (deoarece apariția mutațiilor rezistente poate fi dobândită numai în timpul replicării lor virale, ceea ce nu este cazul aici) (ii) compoziția lor cu 4 compuși de bază, acizi nucleici, aminoacizi, zaharuri și lipide care, în esență, transformă virușii în simple ținte chimice, mai degrabă decât în viruși „descurajatori”.
Considerând aceste noi paradigme ale proprietăților virale, apar posibilități, inclusiv o „strategie de bracketing” pentru a crea modele de virusuri care să reprezinte cele mai rele scenarii. Evident, regula de bracketing nu poate fi generalizată în mod absolut, dar poate fi legată de un raționament științific clar și puternic, de o listă de criterii specifice și, de asemenea, legată de o listă de viruși luați în considerare. În exemplul următor, vor fi analizați 9 virusuri manipulate în mod curent într-o companie de vaccinuri (tabelul 3).
După ce au fost identificate țintele și armele, trebuie identificate toate „Constrângerile”.
Din partea țintelor:
Disponibilitatea țintei (de ex.: nivelul de concentrație, fragilitatea microorganismelor…), disponibilitatea capacității de manipulare a laboratorului (izolare de biosecuritate), disponibilitatea Metode de cuantificare: sunt ele disponibile, dacă da, care sunt limitele de detecție, robustețea lor (virusul matricei și/sau citotoxicitatea)?
| Modalități / Reactivi | Obiective principale asupra structurii virale |
| Temperatură | Învelișul viral, (Glico)proteine , ARN apoi ADN |
| Acizi / baze | Învelișul viral, (Glicoproteine |
| Alcooli / Eter | Înveliș viral, (Glicoproteine |
| Oxidanți (Cl- , O3, H2O2, formalină, b-propiolactonă…) |
Înveliș viral, (Glicoproteine, acizi nucleici |
| Detergenți (ionici / neionici) | Înveliș viral |
| UV / p-Light | Acizi nucleici, (Gluco)proteine |
Tabelul 2: Moduri de decontaminare versus elemente virale biochimice: impactul asupra structurii virale
Din partea Armelor:
Sunt disponibile compozițiile reactivilor chimici? (adică natura și concentrația fiecărui component)? Sunt disponibili reactivi de neutralizare corespunzători? Care este impactul acestora asupra metodelor de cuantificare din cauza citotoxicității?
Din cauza constrângerilor țintelor (sensibilitate, nivel de concentrație, sisteme de expresie…), una dintre strategii este de a pune microorganismele între paranteze pentru a defini cel mai bun model care va putea acoperi un număr maxim de microorganisme și va permite definirea parametrilor de decontaminare eficienți. Modelul de microorganism selectat trebuie să fie derivat din cel puțin 3 criterii principale (i) o analiză de risc cu reguli bine definite de clasificare. (ii)Disponibilitatea fizică a modelului potențialului microorganism, inclusiv nivelul de titru infecțios compatibil cu obiectivele finale, și iii) metoda de cuantificare utilizată (limită de detecție mai mică, acuratețea sa la nivel scăzut, robustețe…).
Cunoscând toate aceste elemente cheie, trebuie stabilite specificațiile de eficiență. Din nefericire, lipsesc orientările de reglementare clare și exhaustive (cele franceze, europene, americane, internaționale…) și, dacă sunt furnizate, sunt limitate și nu acoperă toate cazurile, în special pentru viruși(Tabelul 4). În ceea ce privește fiecare mod de decontaminare, specificațiile de reglementare nu sunt atât de clare și deseori derivă din experiențele de asigurare a sterilității, cum ar fi faimoasa „reducere de 6 log”
Specific pentru țintele virale, se poate găsi o reducere de 4 log a titrului infecțios folosind modul chimic, dar în majoritatea cazurilor virale, aceasta nu este adecvată. Acest lucru ne conduce la următoarele întrebări: care sunt specificațiile potrivite pentru (i) decontaminarea suprafețelor, (ii) deșeuri lichide, (iii) deșeuri solide, (iv) aer? Fără această îndrumare, este necesar cel puțin un studiu bibliografic.
De cele mai multe ori, parametrii eficienți revendicați pe etichetă pentru produsele de decontaminare gata de utilizare nu sunt adecvați din cauza unei mari absențe de informații metodologice, cum ar fi condițiile de mediu, abordarea științifică și cerințele minime de performanță (de ex. reducerea de 4 loguri legată de o normă…)
| Compoziție structurală | |||||||||
| Virusuri | Picuri externe : glicoproteină | Înveliș : fosfolipide |
Nucleu : proteină | Genul : ARN | Concluzii conform regulilor „bracketing strategy” | ||||
| Poliovirus (Enterovirus) | Nu | Nu | Nu | Da | Da | Viruși din grupa 1 Model reprezentat de Poliovirus |
|||
| Hepatita A (Enterovirus) | Nu | Nu | Da | Da | Da | ||||
| Virusul gripal (Flu) | Da | Da | Da | Da | Da | Virusuri din grupa 2 Model reprezentat de virusul gripal |
|||
| Measles (Morbilivirus) | Da | Da | Da | Da | Da | Da | |||
| Virusul oreionului (Rubulavirus) | Da | Da | Da | Da | Da | Da | Da | Da | Da |
| Virusul rubeolei (Rubivirus) | Da | Da | Da | Da | Da | ||||
| Virusul rabiei (Lyssavirus) | Da | Da | Da | Da | Da | ||||
| Da-Febra (Flavivirus) | Da | Da | Da | Da | Da | ||||
| Dengue (Flavivirus) | Da | Da | Da | Da | Da | ||||
Tabelul 3: Lista celor 9 virusuri luate în considerare, pe care le vom numi „Ținte”
Pe baza structurii biochimice a fiecărui virus, aici se pot defini 2 modele, în funcție de următoarele caracteristici și de „constrângerile” care au fost identificate în regulile specifice stabilite
În final Strategiile de validare pot fi rezumate astfel: Arma potrivită împotriva țintei potrivite, cu cea mai bună trusă de instrumente, care trebuie definită în mod specific. În orice caz, toate specificațiile (dumneavoastră) trebuie să fie stabilite în ceea ce privește fiecare utilizare specifică.
| Specificații de decontaminare chimică lichidă | ||||
| Bactericid | Norma franceză | AFNOR NF T 72-170 și 171 | 5 Reducere logaritmică | |
| Norma europeană | NF EN 1040 | |||
| Sporicid | Norma franceză | AFNOR NF T 72-230 și 231 | 5 Reducere logaritmică | |
| Fungicid | Norma franceză | AFNOR NF T 72-200 și 201 | 4 Reducere logaritmică | |
| Norma europeană | NF EN 1275 | |||
| Virucid | Norma franceză | AFNOR NF T 72-180, 181 și 185 | 4 Reducerea logaritmilor | |
| Norma europeană | NF EN, 14675/14476 și 13610 | |||
| Specificații pentru decontaminarea chimică a aerului | ||||
Bactericid 5 Reducere logaritmicăSporicid Norma franceză AFNOR NF T 72-2813 Reducere logaritmicăFungicid 4 Reducere logaritmicăVirucid 4 Reducere logaritmică
(Nou! Nov.14)
Tabelul 4: exemple de norme pentru stabilirea specificațiilor
După mai mult de 10 ani de experiență, lecția învățată ne-a oferit o experiență pozitivă valoroasă. Toți virușii (noștri) sunt legați de parametrii lor eficienți de decontaminare validați, într-un sistem conform, coerent și robust, realizând în același timp economii prin abordarea noastră. Acum, fiecare nou reactiv potențial de decontaminare este ușor de validat, iar o actualizare completă a sistemului nostru de decontaminare pentru toți virușii în poate fi realizată în câteva experimente. Mai mult decât atât, strategia a fost verificată cu autoritățile de reglementare, rezultând o mai mare conformitate fără observații semnificative.
Provocarea rămasă, este de a educa auditorii care nu sunt toți familiarizați cu virușii reducând noțiunile preconcepute ale acestora despre complexitatea virală, permițând astfel aprobarea deplină a performanței și eficienței acestor abordări și date.
.