Biol Res 41: 197-204, 2008
ARTICLE
Diferențe în lipogeneză și lipoliză în adipocitele umane adulte obeze și non-obeze
MARIANA CIFUENTES, CECILIA ALBALA și CECILIA V ROJAS
Institutul de Nutriție și Tehnologie Alimentară (INTA), Universidad de Chile, Santiago, Chile.
Dirección para Correspondencia
ABSTRACT
A fost propus faptul că diferențele în funcția și/sau metabolismul adipocitelor între indivizii obezi și cei slabi se pot manifesta prin anomalii funcționale ale țesutului adipos care duc la tulburări metabolice în obezitate. Am studiat lipogeneza și lipoliza adipocitelor omentale de la oameni obezi (OB) și non-obezi (NOB). Activitatea specifică a enzimei marker lipogenic G3PDH a fost cu 50% mai mică în adipocitele totale ale OB în comparație cu cea a subiecților NOB. Adipocitele omentale de la subiecții OB au avut, de asemenea, levéis lipolitic bazal mai scăzut și un răspuns lipolitic mai mic la stimulul p-adrenergic. Epuizarea colesterolului din membrana plasmatică a adipocitelor cu ajutorul metil β-ciclodextrinei a provocat un efect lipolitic asupra adipocitelor din ambele grupuri împreună, dar atunci când subiecții obezi și cei slabi au fost analizați separat, răspunsul a fost semnificativ doar la cei obezi. Prezentăm dovezi ale unui profil lipogenic și lipolitic diferit în adipocitele omentale ale indivizilor obezi și propunem un rol relevant al colesterolului din membrana plasmatică, unde impactul eliminării acestuia în lipoliza adipocitelor OB și NOB diferă.
Termeni cheie: adipocit, colesterol, lipogeneză, lipoliză, obezitate, metabolism trigliceridic.
INTRODUCERE
Excesul de țesut adipos visceral este legat de numeroase probleme de sănătate. O adipozitate crescută este asociată cu creșterea volumului celulelor adipoase. Astfel, individuáis obezi au o cantitate relativ mare de adipocite hipertrofice în comparație cu subiecții slabi. Studiile efectuate pe celulele adipoase animale și umane au stabilit că mai multe funcții metabolice ale adipocitelor sunt modificate odată cu o dimensiune mai mare a celulelor, cum ar fi sensibilitatea la insulină și metabolismul glucozei, pe lângă secreția de adipokine și profilurile de expresie genetică (Bluher et al., 2004; Salans și Doherty, 1971; Salans et al., 1974; Smith, 1971; Yang et al., 2004). Acest lucru a dus la sugestia că predominanța funcțională a celulelor hipertrofice și/sau metabolice deficitare în țesutul adipos este un efect cauzal important pentru un răspuns scăzut al țesutului la semnalele homeostatice, perpetuând sau exacerbând astfel starea de obezitate. Pentru a testa această ipoteză, ne-am propus să studiem in vitro lipogeneza și lipoliza în adipocite omentale izolate de la adulți OB și NOB. Având în vedere că semnalizarea lipolizei depinde de proteinele localizate în caveolae și că perturbarea organizării acestor structuri bogate în colesterol a fost asociată cu modificări metabolice în adipocitele obeze (Le Lay et al., 2004), am evaluat, de asemenea, impactul eliminării colesterolului din membrana plasmatică folosind metil (β-ciclodextrină (M(βCD) în lipoliza adipocitelor OB și NOB.
Rezultatele prezente subliniază un profil lipogenic și lipolitic diferit între subiecții slabi și cei obezi. Datele noastre evidențiază relevanța metabolică a conținutului mai scăzut de colesterol din membrana plasmatică a adipocitelor subiecților obezi, care afectează reglarea fiziologică a lipolizei.
MATERIALE ȘI METODE
Isolarea adipocitelor
Grasa omentală umană a fost obținută de la 25 de subiecți obezi (OB) și non-obezi (NOB) supuși unei intervenții chirurgicale abdominale elective (fie bypass gastric, ginecologic sau gastrointestinal). Intervalul de vârstă al subiecților a fost de 29-79 de ani, iar indicele lor de masă corporală (IMC) a variat între 18 și 54 kg/m2. Punctul de tăiere pentru definirea obezității a fost considerat conform definiției NIH de IMC > 30 kg/m2. Doisprezece subiecți (9 bărbați, 3 femei) au fost NOB (IMC 23,3 ± 3,4 kg/m2), în timp ce 13 au fost OB (IMC 38,2 ± 4,3 kg/m2; 4 bărbați, 9 femei). Nu am observat nicio influență a sexului în parametrii studiați. Protocolul a fost aprobat de Comitetul de evaluare instituțională de la INTA, Universitatea din Chile, iar consimțământul informat a fost semnat de către donatori. Țesutul adipos prelevat în timpul intervenției chirurgicale a fost scufundat în soluție salină și transportat la laborator pentru a fi procesat în termen de o oră. La sosire, țesutul a fost spălat de mai multe ori cu soluție salină echilibrată Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS), îndepărtând tot țesutul conjunctiv vizibil, cheagurile de sânge și vasele, apoi a fost tocat în bucăți mici (2-3 mm2) și cultivat în MI99 (Invitrogen, Carlsbad, CA) médium, suplimentat cu antibiotice (penicilină-streptomicină) la 37°C într-un incubator cu atmosferă controlată. A existat o perioadă de incubație a țesutului de 2 zile pentru a minimiza variabilitatea interindividuală cauzată de factori ai subiectului, cum ar fi mediul hormonal, starea de sănătate curentă sau medicamentele. Adipocitele au fost izolate folosind o metodă bazată pe lucrarea lui Rodbell (1964). Pe scurt, țesutul adipos tocat mărunt a fost incubat cu lg/1 colagenază de tip I (Worthington Biochemical Corp. Lakewood, NJ) la 37°C timp de 60 de minute, cu amestecare continuă. Suspensia celulară rezultată a fost filtrată printr-un tampon de tifon steril și, deoarece adipocitele se separă spontan de faza apoasă, acestea au fost recuperate prin aspirarea ușoară a stratului plutitor cu o pipetă plastică și spălate de două ori cu 5 volume de HBSS. Adipocitele izolate au fost fie utilizate imediat pentru studii de lipoliză, fie congelate pentru determinarea ulterioară a glicerol-β-fosfat dehidrogenazei (G3PDH).
Răspunsul lipolitic la (stimulul β-adrenergic și detectarea activității lipogenice (a se vedea mai jos) au evidențiat prezența adipocitelor viabile după digestia țesutului.
Lipogeneza și lipoliza
Sinteza trigliceridelor în adipocit utilizează atât acizi grași prefabricați, cât și de novo, în timp ce coloana vertebrală de glicerol provine din glicerol-β-fosfat derivat din glucoză. Capacitatea lipogenică a fost evaluată prin activitatea specifică a enzimei G3PDH, care catalizează formarea coloanei vertebrale de glicerol a trigliceridelor din fosfatul de dihidroxiacetonă furnizat prin glicoliză. Această enzimă este considerată ca fiind cea care limitează rata de sinteză a trigliceridelor în țesutul adipos, având în vedere că în acest țesut este sursa solé de glicerol-β-fosfat. Utilizarea sa ca marker lipogenic în adipocitele mature este susținută de amplificarea ARNm și a activității sale de către insulină (Moustaid et al., 1996; Rumberger et al., 2003). Pe scurt, adipocitele izolate au fost omogenizate (10 lovituri la 1800 rpm cu un sistem de omogenizare Glas-Col, Glas-Col, IN) folosind un tub de sticlă echipat cu un pistil de teflon, la 4°C într-un tampon care conține 0,25M zaharoză, lmM EDTA, 50mM trietanolamină și lmM ditiotreitol. Omogenatul a fost centrifugat la 14.000 x g, la 4°C, timp de 30 de minute. Activitatea G3PDH a fost determinată în supernatant pe baza metodei lui Kozak și Jensen (1974), prin măsurarea oxidării NADH (evoluția în timp a modificării absorbției la 340 nm la 37°C) pe un cititor de microplăci (EL-808, BioTek Instruments Inc, Winooski, VT), folosind dihidroxiacetonă fosfat ca substrat pentru enzimă. Reacția a fost liniară în raport cu timpul pe parcursul perioadei de testare. O unitate de activitate enzimatică corespunde oxidării a 1 nmol de NADH pe minut în condițiile indicate mai sus. Concentrația de proteine din extractul solubil a fost măsurată prin metoda Bradford (Bradford, 1976).
Lipoliza a fost evaluată pe parcursul celor 48 de ore de cultură adipoasă prin măsurarea glicerolului cumulat eliberat în mediul de cultură MI99 (reactiv de determinare a glicerolului liber, Sigma, St Louis MO). În plus, răspunsul lipolitic acut la (stimulul β-adrenergic, cu sau fără epuizarea colesterolului din membrana plasmatică (preincubare de 60 de minute cu 10 mM MβCD ), a fost evaluat prin măsurarea glicerolului total eliberat în timpul unei incubări de 90 de minute a suspensiilor de adipocite 10% la 37°C cu o ușoară agitare continuă și adăugarea de 10μM izoproterenol (Sigma) sau vehicul. Pentru evaluarea lipolizei în timpul culturii țesutului adipos, valorile glicerolului sunt exprimate pe mg de țesut, în timp ce pentru testarea lipolizei în suspensiile de adipocite, valorile sunt normalizate la lipidele celulare totale, așa cum este descris de Carpéné (2001) sau, în experimentele cu agenți lipolitici, la controlul bazal (nestimulat) respectiv. Lipidele celulare totale au fost extrase prin metoda lui Dolé și Meinertz (1960) și determinate gravimetric. Având în vedere o relație independentă raportată între dimensiunea celulelor și lipoliză, care poate acționa ca un factor de confuzie, în special în studiile noastre care compară subiecții OB și NOB, expresia pe mg de lipide a fost considerată cea mai adecvată. După cum au arătat Large et al. (1999), glicerol reléază exprimată per conținut de lipide este foarte corelată cu activitatea lipazei sensibile la hormoni în studiile efectuate pe subiecți umani obezi și slabi și mai relevantă pentru capacitatea lipolitică decât per număr de celule, datorită volumului crescut al celulelor adipoase la obezi.
Statistici
Diferențele dintre medii au fost analizate cu ajutorul testului t al lui Student și au fost considerate semnificative la p≤0,05. Coeficientul de corelație Pearson a fost utilizat pentru a evalua asociațiile pentru variabilele continue. Datele sunt exprimate ca medii ± SEM.
REZULTATE
Lipogeneza
Activitatea specifică a enzimei lipogenice G3PDH a fost aproape la jumătate la subiecții OB în comparație cu cea din adipocitele din NOB (p<0,05, Fig. 1). În concordanță cu acest lucru, a existat o corelație inversă semnificativă între markerul lipogenezei și IMC-ul subiecților (Fig. 1, inset, r2=0,31, p=0,01). Este demn de remarcat faptul că nu au existat diferențe în concentrația de proteine (utilizată pentru a normaliza activitatea G3PDH) între subiecții OB și NOB care ar fi putut să influențeze aceste rezultate.
Lipoliza
Releza de glicerol la mediul de incubare în timpul cultivării țesutului adipos omental întreg sau a adipocitelor izolate a fost utilizată ca indicator al activității lipolitice. Atât lipoliza bazală, cât și cea stimulată de izoproterenol au fost mai scăzute în adipocitele izolate ale subiecților OB (p<0,05 și, respectiv, p<0,01, Fig. 2). În concordanță cu aceste observații, a existat o corelație inversă foarte semnificativă între lipoliză și IMC-ul subiectului pentru întregul țesut (r2=0,46, p<0,0005, inset, Fig. 2) și adipocitele izolate (bazal: r2=0,28, p<0,01; β-adrenergic-stimulat: r2=0,17, p<0,05, n=20). Adipocitele de la subiecții obezi au prezentat un răspuns mai scăzut la (stimulul β-adrenergic în comparație cu cele de la omologii lor slabi (Fig. 3, p<0,05).
Expunerea adipocitelor la 10 mM MβCD într-un subset de 11 probe a determinat o creștere semnificativă a lipolizei bazale. Această creștere a fost direct proporțională cu IMC al subiectului (r2=0,5, p<0,05, Fig. 4). Răspunsul lipolitic la (β-stimularea adrenergică a fost semnificativ redus atunci când adipocitele au fost expuse la M(βCD (345 ± 50 % vs. 199 ± 33 %, respectiv, p< 0,05). În mod interesant, atunci când se compară efectul M(βCD față de vehicul, s-a observat o reducere semnificativă a răspunsului lipolitic la izoproterenol în adipocitele de la subiecții cu IMC>40 kg/ m2 (obezitate morbidă, conform definiției NIH), în timp ce subiecții slabi nu au prezentat nicio diferență semnificativă (Fig. 5). În concordanță cu aceasta, s-a constatat o corelație semnificativă între IMC și raportul dintre răspunsul lipolitic la 10μM izoproterenol în prezența și absența a 10 mM M(βCD) (r2=0,46, p<0,05).
DISCUȚII
În lucrarea de față, am studiat lipogeneza și lipoliza în adipocitele izolate din țesutul adipos omental al adulților OB și NOB într-o gamă largă de IMC (18-54 kg/m2). Observațiile noastre arată că activitatea specifică a markerului de lipogeneză G3PDH în OB a fost la jumătate față de cea din adipocitele omologilor lor NOB. Pe de altă parte, IMC-urile mai mari au fost asociate cu o lipoliză bazală și (β-adrenergică stimulată și cu o sensibilitate mai mare la afectarea semnalizării membranei plasmatice datorată eliminării colesterolului. O acumulare mai mare de trigliceride în adipocitul OB poate fi legată de activitatea lipolitică mai scăzută pe care am observat-o în acest grup, așa cum au propus și alții (Langin et al., 2005). În plus, activitatea specifică G3PDH mai scăzută pe care am constatat-o în OB, ceea ce poate rezulta contraintuitiv, ar putea reprezenta o capacitate scăzută de stocare a trigliceridelor circulante în exces, ceea ce ar putea duce probabil la hipertrigliceridemie și la acumularea de grăsime în alte regiuni ale corpului, cu efectele dăunătoare cunoscute asociate cu sindromul metabolic.
Utilizând o abordare in vivo la om, Dodt și colab. (2003) au observat un răspuns lipolitic atenuat la stimularea intraneurală la femelele obeze, ceea ce este în concordanță cu rezultatele noastre in vitro și susține ideea că obezitatea poate fi asociată, cel puțin parțial, cu un răspuns lipolitic scăzut la activarea simpatică. În concordanță, Gómez-Ambrosi și colab. (2004) au studiat modelul de expresie a genelor din țesutul adipos omental și au arătat că subiecții obezi aveau o expresie scăzută și crescută a genelor inductoare și, respectiv, represoare ale lipolizei.
Există o discrepanță considerabilă în literatura de specialitate în ceea ce privește normalizarea datelor de lipoliză. Având în vedere relația directă raportată între dimensiunea celulelor adipocitare și lipoliză (Large et al., 1999) și abundența relativă mai mare a adipocitelor mai mari la obezi (Large et al., 1999), este de așteptat ca țesutul adipos să prezinte o lipoliză neajustată mai mare în rândul obezilor decât în rândul indivizilor NOB. Astfel, pentru a evita un factor de confuzie datorat distribuției diferite a dimensiunii celulelor în OB față de NOB, valorile noastre de glicerol reléase au fost normalizate prin exprimarea lor pe mg de lipide totale, evaluând astfel activitatea lipolitică pentru o anumită masă lipidică. În sprijinul acestei afirmații, studiile efectuate pe oameni obezi și slabi au observat o corelație ridicată între activitatea enzimei lipolitice cheie HSL (Upase sensibilă la hormoni) și glicerol reléase adipocitară exprimată pe conținut de lipide (Large et al., 1999). Autorii au afirmat că conținutul de lipide este mai relevant pentru capacitatea lipolitică decât normalizarea pe număr de celule, din cauza volumului crescut al celulelor adipoase la obezi. Este demn de remarcat faptul că (stimularea β-adrenergică peste condițiile bazale s-a dovedit a fi, de asemenea, mai mică la subiecții OB, iar această evaluare este independentă de mărimea sau numărul de celule, având în vedere că este normalizată cu martorul corespunzător (fiecare valué bazal).
Rolul conținutului de colesterol din membrană pentru integritatea caveolei, transducția semnalului specific și buna funcționare celulară a fost deja recunoscut (Le Lay et al. 2001). S-a demonstrat că adipocitele hipertrofice au un metabolism deficitar, împreună cu un conținut mai scăzut de colesterol în membrana plasmatică (Le Lay et al. 2001). Observațiile noastre le extind pe cele ale lui Le Lay et al. (2001, 2004), care au arătat că depleția de colesterol în adipocite induce rezistența la insulină și modificări în expresia unui număr de gene relevante pentru metabolismul adipos. Aceste rezultate au fost furnizate ca dovadă a reducerii colesterolului în membrana plasmatică ca o legătură între hipertrofia adipocitelor și afectarea metabolică, care este susținută de rezultatele noastre actuale. Experimentele noastre de expunere a adipocitelor la M(βCD au provocat o creștere semnificativă a lipolizei bazale (așteptată după alterarea integrității caveolei membranei plasmatice, ceea ce a dus la o scădere a activității fosfodiesterazei 3B ) și, în consecință, la un răspuns lipolitic redus la stimulul (β-adrenergic. În mod interesant, am observat o asociere semnificativă între impactul M(βCD asupra lipolizei bazale și IMC. Mai mult, corelația semnificativă dintre IMC și raportul dintre izoproterenol și lipoliza bazală în prezența și absența M(βCD susține o sensibilitate mai mare a adipocitelor de la subiecții obezi la semnalizarea alterată a membranei plasmatice determinată de epuizarea colesterolului.
Celele adipoase mărite, cunoscute ca fiind mai abundente pe măsură ce IMC-ul subiecților crește (Julien et al., 1989; Salans et al., 1973; Van Harmelen et al, 2003) sunt rezistente la insulină (Olefsky 1977) și prezintă un model de secreție distinct care le-a legat de tulburările asociate obezității (Imbeault et al., 1999; Van Harmelen et al., 2000).
Interesant este faptul că șoarecii knock-out ai receptorilor de insulină specifici țesutului adipos (Bluher et al., 2004) prezintă o polarizare a adipocitelor în două subpopulații de celule mici (<50μm diametru) și mari >1OOμm), care este însoțită de diferențe în sinteza trigliceridelor și lipoliză, printre alți parametri. Observațiile raportate aici arată diferențe intrinseci în metabolismul trigliceridelor între adipocitele omentale de la subiecții OB și NOB, și propunem că îmbogățirea în adipocitele hipertrofiate și lipsite de colesterol membranar ar putea conduce la astfel de modificări. Este posibil ca răspunsul lipolitic deficitar să contribuie în timp la mărirea depozitului de trigliceride. Capacitatea redusă de a stoca trigliceride suplimentare, ar duce la o cantitate crescută de lipide circulante, crescând riscurile asociate cu sindromul metabolic.
Din câte știm noi, niciun alt studiu nu a evaluat lipogeneza și lipoliza în adipocitele omentale de la subiecții umani OB și NOB. Lucrarea de față arată diferențe relevante în metabolismul trigliceridelor din adipocitele omentale la subiecții obezi comparativ cu subiecții non-obezi și sugerează că adipocitele indivizilor obezi sunt mai sensibile la conținutul redus de colesterol din membrana plasmatică. Chiar dacă am intenționat să minimizăm factorii subiecților, nu putem exclude faptul că comorbiditățile prezente la subiecții obezi pot influența comportamentul diferit al celulelor adipoase. Comparația manipulării trigliceridelor între aceste grupuri și într-un depozit de grăsime cu o asemenea relevanță patogenică ajută la înțelegerea diferențelor de metabolism și de reacție, care pot fi ținta unei intervenții farmacologice și necesită studii suplimentare.
RECUNOȘTINȚE
Am dori să mulțumim Dr. Miguel A. Celis de la Spitalul Tisné, Dr. Leonardo Rodríguez de la Spitalul DIPRECA și Dr. Cristian Cavalla, James Hamilton și Gonzalo Wiedmaier de la Spitalul Padre Hurtado pentru ajutorul neprețuit în obținerea țesutului adipos, precum și dnei. Marisol Blanco și dl Rodrigo Brücher pentru asistența lor tehnică.
Sprijin financiar
Sprijinit prin granturi de la DI-U de Chile (Nr. Mult 04/06-2 pentru C. Rojas și 1-04/01-2 pentru M. Cifuentes), și FONDECYT (Nr. 1070632 pentru C. Rojas, N°1080232 către M. Cifuentes).
BLUHER M, WILSON-FRITCH L, LESZYK J, LAUSTSEN P G, COR VERA S, KAHN CR (2004) Rolul acțiunii insulinei și al dimensiunii celulelor asupra modelelor de exprimare a proteinelor în adipocite. J Biol Chem 279: 31902-31909.
BRADFORD MM (1976) O metodă rapidă și sensibilă de cuantificare a unor cantități de micrograme de proteine utilizând principiile de legare a proteinelor de coloranți. Anal Biochem 72: 248-254.
CARPENÉ C (2001) Assays of adrenergic receptors including lipolysis and binding measurements. În: A: AILHAUD G (ed) Adipose Tissue Protocols. New Jersey: Humana Press. pp. 129-140.
DODT C, LONNROTH P, WELLHONER JP, FEHM HL, ELAM M (2003) Controlul simpatic al țesutului adipos alb la oamenii slabi și obezi. Acta Physiol Scand 177: 351-357.
DOLÉ VP, MEINERTZ H (1960) Microdeterminarea acizilor grași cu lanț lung în plasmă și țesuturi. J Biol Chem 235: 2595-2599.
GÓMEZ-AMBROSI J, CATALÁN V, DIEZ-CABALLERO A, MARTÍNEZ-CRUZ LA, GIL MJ, GARCÍA-FONCILLAS J, CIENFUEGOS JA, SALVADOR J, MATO JM, FRUHBECK G (2004) Gene expression profile of omental adipose tissue in human obesity. FASEB J 18: 215-217.
IMBEAULT P, LEMIEUX S, PRUDHOMME D, TREMBLAY A, NADEAU A, DESPRES JP, MAURIEGE P (1999) Relația dintre țesutul adipos visceral și factorii de risc metabolic pentru boala coronariană: există o contribuție a hipertrofiei celulelor adipoase subcutanate? Metabolism 48: 355-362.
JULIEN P, DESPRES JP, ÁNGEL A (1989) Scanning electrón microscopy of very small fat cells and mature fat cells in human obesity. J Lipid Res 30: 293-299.
KOZAK LP, JENSEN JT (1974) Controlul genetic și de dezvoltare a multiplelor forme de L-glicerol 3-fosfat dehidrogenază. J Biol Chem 249: 7775-7781.
LANGIN D, DICKER A, TAVERNIER G, HOFFSTEDT J, MAIRAL A, RYDEN M, ARNER E, SICARD C, JENKINS M, VIGUERIE N, VAN HARMELEN V, GROSS RW, HOLM C, ARNER P (2005) Upase adipocitară și defect de lipoliză în obezitatea umană. Diabetes 54: 3190-3197.
LARGE V, REYNISDOTTIR S, LANGIN D, FREDBY K, KLANNEMARK M, HOLM C, ARNER P (1999) Expresia și funcția diminuată a Upase-ului sensibil la hormoni adipocitare în celulele adipoase subcutanate ale subiecților obezi. J Lipid Res 40: 2059-2066.
LE LAY S, KRIEF S, FARNIER C, LEFRERE I, LE LIEPVRE X, BAZIN R, FERRÉ P, DUGAIL I (2001) Colesterolul, un semnal dependent de dimensiunea celulară care reglează metabolismul glucozei și expresia genelor în adipocite. J Biol Chem 276: 16904-16910.
LE LAY S, FERRÉ P, DUGAIL I (2004) Adipocyte cholesterol balance in obesity. Biochem Soc Trans 32: 103-106.
MOUSTAID N, JONES BH, TAYLOR JW (1996) Insulina crește activitatea enzimelor lipogenice în adipocitele umane în cultură primară. J Nutr 126: 865-870.
NILSSON R, AHMAD F, SWARD K, ANDERSSON U, WESTON M, MANGANIELLO V, DEGERMAN E (2006) Membrana plasmatică a fosfodiesterazei 3B a nucleotidelor ciclice (PDE3B) este asociată cu caveolae în adipocitele primare. Cell Signal 18: 1713-1721.
OLEFSKY JM (1977) Mecanisme de diminuare a sensibilității la insulină a adipocitelor mari. Endocrinologie 100: 1169-1177.
RODBELL M (1964) Metabolismul celulelor adipoase izolate. I. Efectele hormonilor asupra metabolismului glucozei și lipolizei. J Biol Chem 239: 375-380.
RUMBERGER JM, WU T, HERING MA, MARSHALL S (2003) Rolul biosintezei hexosaminei în reglarea ascendentă mediată de glucoză a levéis ARNm al enzimelor lipogenice: efectele glucozei, glutaminei și glucozaminei asupra levéis ARNm al glicerofosfatului dehidrogenazei, acidului gras sintetazei și acetil-CoA carboxilazei. J Biol Chem 278: 28547-28552.
SALANS LB, DOUGHERTY JW (1971): Efectul insulinei asupra metabolismului glucozei de către celulele adipoase de diferite dimensiuni Influența conținutului de lipide și proteine celulare, a vârstei și a stării de nutriție. J Clin Invest 50: 1399-1410.
SALANS LB, CUSHMAN SW, WEISMANN RE (1973) Studii asupra țesutului adipos uman. Dimensiunea și numărul celulelor adipoase la pacienții neobezi și obezi. J Clin Invest 52: 929-941.
SALANS SB, BRAY GA, CUSHMAN SW, DANFORTH JR E, GLENNON JA, HORTON ES, SIMS EA (1974) Metabolismul glucozei și răspunsul la insulină al țesutului adipos uman în obezitatea spontană și experimentală. Efectele compoziției dietetice și ale dimensiunii celulelor adipoase. J Clin Invest 53: 848-856.
SMITH U (1971) Efectul dimensiunii celulelor asupra sintezei lipidelor de către țesutul adipos uman in vitro. J Lipid Res 12: 65-70.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, WEYER C, FOLEY JE, BOGARDUS C, TATARANNI PA, PRATLEY RE (2000) Mărimea crescută a adipocitelor abdominale subcutanate, dar nu obezitatea în sine, prezice diabetul de tip II independent de rezistența la insulină. Diabetologia 43: 1498-1506.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, HAUNER H (2003) Efectul IMC și al vârstei asupra celularității și capacității de diferențiere a țesutului adipos la femei. Int J Obes Relat Metab Disord 27: 889-895.
YANG X, JANSSON PA, NAGAEV I, JACK MM, CARVALHO E, SUNNERHAGEN KS, CAM MC, CUSHMAN SW, SMITH U (2004) Dovezi ale alterării adipogenezei în rezistența la insulină. Biochem Biophys Res Commun 317: 1045-1051.