O que são Imunoensaios?

Pelo Dr. Sanchari Sinha Dutta, Ph.D. Revisto pelo Dr. Surat P, Ph.D.

Immunoensaios são métodos bioanalíticos que utilizam a especificidade de uma reacção antigénio-anticorpo para detectar e quantificar moléculas alvo em amostras biológicas. Estes métodos são frequentemente utilizados no diagnóstico clínico, descoberta de drogas, monitorização de drogas e testes alimentares.

Khamkhlai Thanet |

Tipos de imunoensaios

O princípio de um ensaio imunológico é baseado em competições entre uma quantidade fixa de analito rotulado e uma quantidade variável de analito de amostra não rotulado para ligar um número limitado de sítios de ligação de um anticorpo especificamente levantado contra o analito. Estes métodos podem ser usados para detectar uma molécula alvo quantitativamente, semi-quantitativamente ou qualitativamente.

Radioimunoensaio (RIA)

Radioimunoensaio usam um radioisótopo como rótulo para quantificar hormônios, drogas e antígenos virais. Uma concentração conhecida de antígeno radiolabelado é incubada com uma concentração fixa de anticorpos específicos para esse antígeno. Este complexo antígeno-anticorpo radiomarcado é então misturado com uma amostra biológica contendo uma concentração desconhecida do mesmo antígeno.

Em princípio, se a concentração de antígeno da amostra for superior ao antígeno radiomarcado, o antígeno da amostra ligará o número limitado de sítios de ligação de anticorpos, substituindo o antígeno radiomarcado. Em seguida, é medida a radioactividade destes antigénios livres (não ligados a um anticorpo) radiomarcados; que é directamente proporcional à concentração de antigénio não marcado presente na amostra biológica.

No entanto, a curta semi-vida dos radioisótopos, bem como os riscos para a saúde associados à sua utilização, limitam consideravelmente a aplicação deste método em muitos laboratórios.

Ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA)

Num ELISA, uma enzima está ligada a um anticorpo que foi especificamente criado contra um antigénio de interesse.

Amostras biológicas contendo o antigénio alvo podem ligar o anticorpo marcado com enzima e a reacção é visualizada utilizando um substrato específico da enzima que é adicionado à mistura da reacção. O substrato específico da enzima liga-se à enzima ligada ao anticorpo, gerando um produto colorido que pode ser detectado usando técnicas de imagem cromogénicas ou quimioluminescentes.

ELISA tem uma elevada especificidade e sensibilidade, sendo por isso frequentemente usado para o rastreio de anticorpos ou fármacos com elevado rendimento.

Fluoroimunoensaios

Sondas fluorescentes são usadas para rotular os anticorpos. Amostras biológicas contendo um antigénio de interesse são incubadas com um anticorpo marcado com fluorescência. A intensidade de fluorescência do complexo antigénio-anticorpo resultante é medida para quantificar o antigénio alvo.

Imunoensaios de quimioluminescência

Moléculas luminescentes quando regressam de um estado excitado a um estado de terra, emitem luz visível ou quase visível (luminescência), que pode ser detectada por dispositivos de medição de sinal luminescente.

Em imunoensaios de quimioluminescência, marcadores luminóforos, tais como ésteres de acridínio, podem ser usados diretamente; ou marcadores enzimáticos incluindo fosfatase alcalina e peroxidase de rabanete de cavalo podem ser usados indiretamente com adamantyl 1, 2-dioxetano fosfato arilo (AMPPD) e substratos de luminol, respectivamente.

A grande vantagem deste método é que a leitura pode ser aumentada usando intensificadores, que permitem que a reação continue por mais tempo sem reduzir a intensidade do sinal.

Contagem de imunoensaios

Contagem de imunoensaios usa tecnologia de contagem de partículas. As esferas de poliestireno (partículas de látex) são revestidas com anticorpos específicos para um antígeno de interesse. Quando incubadas com uma amostra biológica contendo o antígeno alvo, estas esferas formam complexos imunológicos, que formam aglomerados visíveis (aglutinação).

Dependente da concentração do antígeno alvo, algumas esferas permanecem sem limites e podem ser contadas usando um contador de células. O número de grânulos não ligados denota inversamente a concentração do antígeno alvo.

Tendências nos imunoensaios

Estão a ser desenvolvidos imunoensaios avançados que são ultra-sensíveis e consomem menos tempo. O imunoensaio de superfície baseado em ressonância plasmonar (SPR) é um exemplo que vem com muitas características especiais, tais como análise super rápida (em minutos), requisitos mínimos de amostra e reagentes, protocolo de imunoensaio de microfluidos sem rótulos e sistema totalmente automatizado com um alto rendimento.

Escrito por

Dr. Sanchari Sinha Dutta

Dr. Sanchari Sinha Dutta é um comunicador científico que acredita na difusão do poder da ciência em todos os cantos do mundo. Ela é Bacharel em Ciências (B.Sc.) e Mestre em Ciências (M.Sc.) em biologia e fisiologia humana. Após seu mestrado, Sanchari passou a estudar um Ph.D. em fisiologia humana. Ela é autora de mais de 10 artigos originais de pesquisa, todos publicados em revistas internacionais de renome mundial.

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