Esta confusão, particularmente no domínio biofarmacêutico dos antigénios infecciosos e particularmente dos vírus, leva a situações de domínio não técnico, não conformidade e, em última análise, aumento do risco de contaminação cruzada entre produtos. Tudo isto sublinha a importância da clareza na biocontenção.
No início dos anos 2000, devido a pressões externas, a indústria foi obrigada a remover a formalina (CMR) que era amplamente utilizada como reagente de descontaminação. A adoção de reagentes alternativos de descontaminação destacou três pontos principais: (i) o histórico de descontaminação expôs a relativa ineficácia da formalina à luz das práticas atuais; (ii) a validação da eficiência de desempenho dos descontaminantes é difícil (demasiados fatores externos variáveis influenciando seu desempenho); (iii) destacou a necessidade de uma revisão profunda do desempenho de todas as ferramentas e processos de descontaminação. Estas observações são ainda apoiadas pelas ambições de erradicação da poliomielite conduzidas pela OMS (GAP-III), que também destacaram estas lacunas e fraquezas.
Agora, as tecnologias associadas de diferentes métodos de descontaminação (i.e., Física, Térmica, Química) são numerosas e proporcionam um amplo painel de escolhas que podem ser empregadas nas indústrias biofarmacêuticas, e especialmente nas empresas de vacinas. Assim, o dever de domínio e validação do desempenho dos processos de descontaminação já não é uma opção (!) No entanto, novas restrições estão a surgir e requerem recursos humanos e técnicos substanciais com impacto nos custos do projecto, talvez exponencialmente atingindo milhões de euros!
Este artigo pretende servir como uma “lição aprendida” e baseia-se em muitos anos de investigações alternativas de descontaminação. O artigo também compartilha a estratégia, inicialmente concebida em 2004, que foi concebida para antecipar o novo paradigma do estado da arte da descontaminação. Finalmente, este artigo pretende participar na educação sobre este tema muitas vezes mal compreendido e muitas vezes superado…
Definições
É importante esclarecer as definições farmacêuticas de “limpeza” e “desinfecção”, podendo ser destacados por exemplos.
Limpeza
Resultado de uma operação num tempo limitado, permitindo a retirada de todos os compostos inertes indesejáveis adquiridos em superfícies contaminadas de acordo com os objectivos estabelecidos. O resultado desta operação é limitado aos compostos presentes no momento das operações.
Estes compostos provêm de fontes ambientais naturais ou do produto manuseado.
Objectivos visados pelo CLEANING são compostos inertes (Produção ou áreas de laboratório)
Desinfecção:
Resultado de uma operação num tempo limitado, permitindo a retirada, inactivação ou morte de todos os microrganismos indesejáveis transportados por meios inertes contaminados de acordo com os objectivos estabelecidos. O resultado desta operação é limitado aos microrganismos presentes no momento das operações (AFNOR NFT 72-101).
Estes microrganismos não são específicos e provêm de fontes ambientais naturais.
Objectivos visados pela DISINFECÇÃO são os microrganismos ambientais (Produção ou áreas de laboratório).
A definição de descontaminação pode fluir dos dois anteriores:
Descontaminação:
Resultado de uma operação num tempo limitado, permitindo inactivar, matar ou destruir todos os microrganismos específicos manuseados de acordo com os objectivos estabelecidos. Estes microrganismos são conhecidos e específicos.
Objectivos visados pela DECONTAMINAÇÃO são o controlo da disseminação dos microrganismos específicos (produtos vacinais ou microrganismos manipulados em laboratório)
Em conclusão, o uso do termo desinfecção como sinónimo de descontaminação tem de ser proibido. Finalmente, a limpeza não assegura a desinfecção ou descontaminação. Da mesma forma, a desinfecção não assegura a descontaminação ou limpeza.
Estratégia de descontaminação viral
Considerando todas as tecnologias de descontaminação (técnicas físicas, reagentes químicos…) com mecanismos diferentes, que chamaremos de “Armas” (ver tabelas 1 & 2) juntamente com o enorme número de vírus, que chamaremos de “Alvos” , a lista de validações a realizar pode tornar-se incontrolável, longa e de custo proibitivo.
| Modos químicos | |
| Reagentes líquidos | Descontaminação de profundidade e/ou superfície |
| Gásicos | Descontaminação de superfície principalmente |
| Modos físicos | |
| Radiação | Em profundidade e descontaminação de superfície |
| (pulsado) Luz | Em profundidade e/ou descontaminação de superfície |
| e-feixe | (principalmente) Descontaminação de superfícies |
| Modos térmicos | Mais usado para descontaminação de profundidade |
| (Autoclaves, Forno) | |
Tabela 1: Modos de descontaminação, que chamaremos de “Armas”
Felizmente, os vírus provocam propriedades interessantes tais como (i) Sua incapacidade de gerar mutação resistente contra reagentes químicos (porque a ocorrência de mutação resistente só pode ser adquirida durante sua replicação viral, o que não é o caso aqui) (ii) Sua composição com 4 compostos básicos, ácidos nucleicos, aminoácidos, açúcares e lipídios que essencialmente transformam os vírus em alvos químicos simples, em vez de vírus “assustadores”.
Considerando estes novos paradigmas de propriedades virais, surgem possibilidades incluindo uma “estratégia de escalonamento” para criar modelos de vírus que representam os piores cenários de casos. Obviamente, a regra do escalonamento não pode ser generalizada absolutamente, mas pode ser ligada a uma clara e forte racionalidade científica, a uma lista de critérios específicos e também ligada a uma lista de vírus considerados. No exemplo a seguir, serão analisados 9 vírus rotineiramente manipulados em uma empresa de vacinas (tabela 3).
Após ter identificado os alvos e as armas, todas as “Restrições” devem ser identificadas.
Do lado dos alvos:
A disponibilidade do alvo (ou sejaA disponibilidade de concentração, fragilidade dos microorganismos…), a disponibilidade da capacidade de manipulação do laboratório (contenção de biossegurança), a disponibilidade dos Métodos de quantificação: estão disponíveis, se sim, quais são os seus limites de detecção, a sua robustez (matriz viro e/ou citotoxicidade)?
| Modos / Reagentes | Alvo(s) principal(is) na estrutura viral |
| Temperatura | Viral envelop, proteína (Glyco)/RNA, então DNA |
| Ácidos / Bases | Viral envelop, Proteína (Glyco)s |
| Álcoois / Éter | Viral envelop, proteína (Glyco)s |
| Oxidantes (Cl- , O3, H2O2, formalina, b-propiolactona…) |
Viral envelop, (Glyco)proteica, Ácidos Nucleicos |
| Detergentes (iónicos / não iónicos) | Viral envelop |
| UV / p-Luz | Ácidos Nucleicos, Proteína (Glyco)s |
Tabela 2: Modos de descontaminação versus elementos virais bioquímicos: impacto na estrutura viral
Do lado das Armas:
Existem composições de reagentes químicos disponíveis? (ou seja, natureza e concentração de cada componente)? Os reagentes neutralizantes correspondentes estão disponíveis? Qual é o seu impacto nos métodos de quantificação devido à citotoxicidade?
Por causa das restrições do alvo (susceptibilidade, nível de concentração, sistemas de expressão…), uma das estratégias é agrupar os microrganismos para definir o melhor modelo que será capaz de cobrir um número máximo deles e que permitirá definir os parâmetros de descontaminação eficientes. O modelo de microrganismos selecionado deve ser derivado de um mínimo de 3 critérios principais (i) uma Análise de Risco com as regras bem definidas de entrelaçamento. (ii) a disponibilidade física do modelo de microrganismo potencial, incluindo o nível de título infeccioso compatível com os objetivos finais, e iii) o método de quantificação utilizado (limite de detecção inferior, Sua precisão em baixo nível, robustez…).
Cientes de todos estes elementos-chave, as especificações de eficiência devem ser estabelecidas. Infelizmente faltam orientações regulamentares claras e exaustivas (francesas, europeias, americanas, internacionais…) e, se fornecidas, são limitadas e não cobrem todos os casos, especialmente para os vírus (Tabela 4). Em relação a cada modo de descontaminação, as especificações regulamentares não são tão claras e muitas vezes derivam de experiências de garantia de esterilidade, como a famosa “6 Log reduction”.
Especificamente para alvos virais, pode-se encontrar 4 log reduction of infectious titer usando o modo químico, mas na maioria dos casos virais, ele não é apropriado. Isto leva-nos às seguintes perguntas quais são as especificações certas para (i) Descontaminação de superfícies, (ii) Resíduos líquidos, (iii) resíduos sólidos, (iv) ar? Sem esta orientação, é necessário um estudo bibliográfico pelo menos.
A maior parte do tempo, os parâmetros eficientes reivindicados no rótulo para produtos de descontaminação prontos a usar não são apropriados devido a uma vasta ausência de informações metodológicas como condições ambientais, abordagem científica e requisitos mínimos de desempenho (i.e. 4 Redução de log ligada a uma norma…)
| Composição estrutural | ||||||
| Vírus | Pinos externos: glicoproteína | Envelope: fosfolípido |
Core: proteína | Génus : ARN | Conclusões seguindo as regras da “estratégia de escalonamento” | |
| Poliovírus (Enterovirus) | No | No | Sim | Sim | Vírus no grupo 1 Modelo representado pelo Poliovírus |
|
| Hepatite A (Enterovírus) | Não | Não | Sim | Sim | ||
| Vírus da gripe (Gripe) | Sim | Sim | Sim | Sim | Sim | Vírus no grupo 2 Modelo representado pelo Influenza virus |
| Measles (Morbilivirus) | Sim | Sim | Sim | Sim | Sim | |
| Vírus da papeira (Rubulavirus) | Sim | Sim | Sim | Sim | Sim | |
| Vírus Rubéola (Rubivírus) | Sim | Sim | Sim | Sim | Sim | |
| Vírus do Rábio (Lyssavirus) | Sim | Sim | Sim | Sim | Sim | |
| Sim-Febre (Flavivirus) | Sim | Sim | Sim | Sim | Sim | |
| Dengue (Flavivirus) | Sim | Sim | Sim | Sim | Sim | |
Tabela 3: Lista de 9 vírus considerados, que chamaremos de “Alvos”
Baseada na estrutura bioquímica de cada vírus, aqui podemos definir 2 modelos, de acordo com as seguintes características e as “restrições” que foram identificadas nas regras específicas estabelecidas
Finalmente as Estratégias de Validação podem ser resumidas como tal: A arma certa contra o alvo certo com a melhor caixa de ferramentas, que deve ser definida especificamente. Em qualquer caso, todas (suas) especificações devem ser definidas em relação a cada uso específico.
| Especificações da descontaminação de líquidos químicos | |||
| Bactericida | Norma Francesa | AFNOR NF T 72-170 e 171 | 5 Redução de log |
| Norma Europeia | NF EN 1040 | ||
| Sporicídio | Norma Francesa | AFNOR NF T 72-230 e 231 | 5 Redução de log |
| Fungicida | Norma Francesa | AFNOR NF T 72-200 e 201 | 4 Redução de log |
| Norma Europeia | NF EN 1275 | ||
| Virucida | Norma Francesa | AFNOR NF T 72-180, 181 e 185 | 4 Redução de log |
| Norma Europeia | NF PT, 14675/14476 e 13610 | ||
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Especificações para descontaminação química do ar |
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Bactericida 5Redução de torosSporicida Norma Francesa AFNOR NF T 72-2813Redução de torosFungicida 4Redução de torosVirucida 4Redução de toros
(Novo! Nov.14)
Tabela 4: exemplos de normas para a criação de especificações
Após mais de 10 anos de experiência, nossa lição aprendida tem proporcionado uma valiosa experiência positiva. Todos os (nossos) vírus estão ligados aos seus parâmetros validados de descontaminação eficiente, em um sistema compatível, coerente e robusto, ao mesmo tempo em que realiza economias através da nossa abordagem. Agora cada novo reagente de descontaminação em potencial é fácil de validar e uma atualização abrangente do nosso sistema de descontaminação para todos os vírus dentro pode ser realizada em alguns poucos experimentos. Além disso, a estratégia foi examinada com as autoridades reguladoras, resultando em maior conformidade sem observações significativas.
O desafio restante, é educar auditores que não estão todos familiarizados com os vírus, reduzindo suas noções pré-concebidas de complexidade viral, permitindo assim o endosso total do desempenho e eficiência dessas abordagens e dados.