Spore Stain of Bacillus subtilis

Jest to preparat Bacillus subtilis, wybarwiony w celu uwidocznienia endospor. Po wzroście na agarze odżywczym w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 24 godziny, organizmy zostały usunięte z płytki i zawieszone w kropli wody na szkiełku szklanym. Wodę pozostawiono do wyschnięcia, a następnie bakterie utrwalono termicznie na szkiełku, przepuszczając je 3-4 razy przez płomień palnika Bunsena. Szkiełko pozostawiono do ostygnięcia. Endospory barwiono 5-procentową zielenią malachitową, zalewając szkiełko barwnikiem i umieszczając płomień pod szkiełkiem, aż roztwór barwnika zaczął wytwarzać parę. Ogrzany roztwór zieleni malachitowej pozostawiano na komórkach przez 5 minut. Ciągłe parowanie (podgrzewanie) szkiełka nie było konieczne. Szkiełko spłukiwano wodą z kranu, a komórki barwiono przez 30 sekund 0,25-procentową Safraniną O (ta sama substancja używana do odczynu Grama). Po zakończeniu procedury barwienia, jeśli endospory nie są zielone, konieczna może być modyfikacja techniki polegająca na ciągłym parzeniu zielenią malachitową przez 5 minut. Średnia wielkość komórek wynosiła 3-5 mikronów.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.