Wprowadzenie
Thalasemia jest najczęstszym dziedziczonym zaburzeniem krwi w Azji Południowo-Wschodniej i jest spowodowana zmniejszoną lub nieobecną syntezą łańcuchów globinowych hemoglobiny (Hb) prowadzącą do zaburzenia równowagi łańcuchów globinowych.1,2 Beta-talasemia jest jednym z głównych typów talasemii i jest spowodowana mutacją w genie beta-globiny (HBB) na chromosomie 11. Kliniczne i hematologiczne spektrum beta-talasemii rozciąga się od cichego nosicielstwa do klinicznie jawnych stanów, w tym ciężkiej, zależnej od transfuzji beta-talasemii major i beta-talasemii intermedia (TI).3,4 W Tajlandii zarówno beta-talasemia, jak i hemoglobina E (HbE) stanowią jedną z najczęstszych postaci występujących we wszystkich regionach, zwłaszcza w północno-wschodniej Tajlandii. Większość ciężkich przypadków beta-talasemii wynika z interakcji beta-talasemii i HbE.5,6
Molekularne podstawy talasemii były badane na całym świecie. Scharakteryzowano ponad 300 różnych mutacji genu beta-globiny. Większość mutacji w beta-talasemii jest spowodowana przez mutacje punktowe, małe delecje lub insercje w obrębie regionów kodujących i połączeń ekson-intron. Rodzaje mutacji są typowo etnicznie swoiste.7-9 W Tajlandii częstość występowania nosicieli beta-talasemii waha się od 3%-9%.10 Do tej pory zidentyfikowano ponad 30 różnych mutacji.11-13 Niejednorodność mutacji utrudnia identyfikację mutacji u niektórych pacjentów z beta-talasemią. Różne techniki analizy DNA, takie jak analiza dot blot, reverse dot blot, specyficzna dla alleli amplifikacja przy użyciu systemu ARMS (amplification refractory mutation system) lub bezpośrednie sekwencjonowanie DNA były szeroko stosowane do identyfikacji mutacji genu beta-globiny.14-17
Niniejsze badanie miało na celu scharakteryzowanie mutacji genu beta-globiny u 80 pacjentów pediatrycznych będących nosicielami mutacji beta-talasemii, którzy byli obserwowani w Szpitalu Phramongkutklao, trzeciorzędowym ośrodku opieki nad pacjentami z talasemią ze wszystkich regionów, zwłaszcza z centralnej Tajlandii.
Pacjenci i metody
Wybór pacjentów
Osiemdziesięciu niespokrewnionych pacjentów z beta-talasemią, którzy uczęszczali do Kliniki Hematologii w Departamencie Pediatrii, Phramongkutklao Hospital, Bangkok, Tajlandia, od stycznia 2013 r. do grudnia 2013 r., zostało włączonych do naszego badania. Protokół badania został zatwierdzony przez Institutional Review Board of Phramongkutklao Hospital, Phramongkutklao College of Medicine, Thailand. Sześćdziesięciu pięciu pacjentów miało klinicznie manifestowaną beta-talasemię, w tym 57 z beta-talasemią/HbE i ośmiu z homozygotyczną lub złożoną heterozygotyczną beta-talasemią. Piętnastu pacjentów miało heterozygotyczną beta-talasemię. Wszyscy pacjenci zostali zdiagnozowani w wieku 18 lat lub mniej. Pacjenci z homozygotyczną beta-talasemią i beta-talasemią/HbE zostali klinicznie zaklasyfikowani do ciężkiej zależnej od transfuzji talasemii major i łagodnej TI na podstawie kryteriów, takich jak wiek w momencie prezentacji, średni poziom Hb w stanie stacjonarnym i historia częstotliwości transfuzji, jak wcześniej opisano.18
Analiza mutacji
Po uzyskaniu świadomej zgody, pobrano łącznie 80 próbek krwi obwodowej kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA) od wszystkich osób. Genomowe DNA ekstrahowano z limfocytów krwi obwodowej za pomocą zestawu AxyPrep™ blood genomic DNA miniprep kit zgodnie z protokołem producenta. Mutacje genu beta-globiny zostały najpierw scharakteryzowane przy użyciu dwóch zestawów specyficznej dla alleli reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) lub multipleksowego systemu opornej amplifikacji mutacji (M-ARMS) w celu wykrycia siedmiu powszechnych mutacji w populacjach Chin i Azji Południowo-Wschodniej, w tym kodonu 41/42 (-TCTT), kodon 17 (A>T), nukleotyd -28 (A>G), IVS-II-654 (C>T), kodon 71/72 (+A), IVS-I-1 (G>T) i IVS-I-5 (G>C), jak opisano wcześniej.15,17 Stwierdzono, że mutacje te są odpowiedzialne za 80%-90% alleli beta-talasemii w tym regionie.19,20 Nieznane geny beta-talasemii były dalej charakteryzowane przez bezpośrednie sekwencjonowanie DNA wszystkich regionów kodujących i granic ekson-intron w celu wykrycia rzadkich mutacji punktowych i małych rearanżacji w genie beta-globiny zgodnie z protokołami opisanymi wcześniej w innym miejscu.16 Allele beta-talasemii, które pozostały niescharakteryzowane przez powyższe metody M-ARMS i sekwencjonowania DNA, zostały następnie zbadane za pomocą gap-PCR w celu wykrycia delecji 3,4 kb całego genu beta-globiny, wcześniej zgłoszonej w populacjach tajskich.21
Wyniki
W sumie 88 alleli beta-talasemii od ośmiu homozygotycznych lub złożonych heterozygotycznych pacjentów z beta-talasemią, 57 pacjentów z beta-talasemią/HbE i 15 heterozygotycznych osób z beta-talasemią zostało włączonych do naszego badania. Wszystkie 80 badanych pochodziło z niespokrewnionych rodzin, a 93,8% (75/80) badanych mieszkało w Bangkoku i innych prowincjach w centralnej Tajlandii. Spośród tych 65 pacjentów, którzy mieli klinicznie manifestowaną beta-talasemię, 92,3% (60/65) i 7,7% (5/65) pacjentów prezentowało beta-talasemię major i TI, odpowiednio. W grupie 60 pacjentów z beta-talasemią major, 86,7% (52/60) pacjentów miało beta-talasemię/HbE, podczas gdy tylko 13,3% (8/60) pacjentów miało homozygotyczną lub złożoną heterozygotyczną beta-talasemię. Alternatywnie, wszyscy pacjenci z homozygotyczną lub złożoną heterozygotyczną beta-talasemią i 91,2% (52/57) pacjentów z beta-talasemią/HbE w tym badaniu prezentowali ciężką, zależną od transfuzji beta-talasemię major. Jeśli chodzi o genotyp pacjentów z beta-talasemią major, najczęstszym genotypem był kodon 41/42 (-TCTT)/kodon 26 (G>A) lub betaE stanowiący 40%, a drugim co do częstości kodon 17 (A>T)/betaE stanowiący 18.3% wszystkich genotypów głównych beta-talasemii (Tabela 1 i Rycina 1).
  |
Tabela 1 Genotyp 65 klinicznie jawnych pacjentów z beta-talasemią |
 |
Rycina 1 Rodzaj genotypu u pacjentów z beta-talasemią. |
Aby wyjaśnić molekularną podstawę tych 88 alleli beta-talasemii, najpierw scharakteryzowaliśmy DNA każdego pacjenta za pomocą dwóch zestawów M-ARMS. Siedemdziesiąt pięć alleli (85,2%) zostało zidentyfikowanych za pomocą tej metody, w tym 33 allele (37,5%) kodonu 41/42 (-TCTT), 23 allele (26.1%) kodonu 17 (A>T), siedem alleli (8%) IVS-I-5 (G>C), sześć alleli (6,8%) IVS-II-654 (C>T), cztery allele (4,5%) IVS-I-1 (G>T) i dwa allele (2,3%) kodonu 71/72 (+A) (tab. 2). Co ciekawe, nukleotyd -28 (A>G) nie został zidentyfikowany w naszych badaniach. W 13 allelach (14,8%) żaden z zestawów nie ujawnił mutacji beta-talasemii. Dlatego też, bezpośrednia sekwencjonowanie DNA wszystkich trzech kodujących eksonów oraz połączeń ekson-intron w genie beta-globiny było kolejnym krokiem w celu scharakteryzowania tych 13 alleli. Sześć rzadkich mutacji wykryto w dziewięciu allelach (10,2%), w tym cztery allele (4,5%) kodonu 35 (C>A) i jeden allel (1,1%) mutacji kodonu inicjującego (ATG>AGG), kodonu 15 (G>A), kodonu 19 (A>G), kodonu 27/28 (+C) i kodonu 123/124/125 (-ACCCCACC), odpowiednio (Rycina 2). Pozostałe allele, niescharakteryzowane przez M-ARMS i sekwencjonowanie DNA, były dalej identyfikowane przez gap-PCR w celu wykrycia delecji 3,4 kb i ta delecja została znaleziona we wszystkich czterech pozostałych allelach (4,5%).
 |
Tabela 2 Częstość mutacji beta-talasemii w 88 allelach |
 |
Rysunek 2 Sześć nieczęstych mutacji zidentyfikowanych przez bezpośrednie sekwencjonowanie DNA. |
W sumie 100% z naszych 88 alleli beta-talasemii zostało scharakteryzowanych za pomocą kombinacji tych technik, w tym dwóch zestawów M-ARMS, bezpośredniego sekwencjonowania DNA i luki-PCR wykrywania delecji 3,4 kb. Wyłączając gen betaE-globiny, w niniejszym badaniu napotkano 13 różnych mutacji beta-talasemii. Delecja 4 bp (-TCTT) w kodonach 41/42 była najczęstszą mutacją zidentyfikowaną w naszym badaniu i stanowiła 37,5% alleli. Kodon 17 (A>T) był drugim co do częstości występowania i stanowił 26.1% alleli. Razem, te dwie powszechne mutacje stanowiły ponad połowę (63,6%) dotkniętych alleli. Wszystkie inne powszechne mutacje z wyjątkiem nukleotydu -28 (A>G) stanowiły 21,6% alleli.
Dyskusja
Badanie to dostarczyło przydatnych informacji dotyczących rozkładu częstości mutacji beta-talasemii wśród pacjentów pediatrycznych, zwłaszcza w centralnej Tajlandii, ponieważ ponad 90% pacjentów mieszkało w Bangkoku i innych prowincjach w tym regionie. W sumie 92% dzieci, które miały klinicznie manifestowaną beta-talasemię miało fenotyp beta-talasemii major, a ponad 85% pacjentów pediatrycznych z beta-talasemią major miało złożoną heterozygotyczną beta-talasemię i HbE, która jest bardzo rozpowszechniona w Tajlandii.5,6,8,10 Częstość genu betaE-globiny nie została uwzględniona w analizie częstości mutacji beta-talasemii, ponieważ HbE może być łatwo wykryta przez elektroforezę Hb.
Kilka metod może określić mutacje beta-talasemii.14-17 W tym badaniu wykazano, że M-ARMS wykrył siedem powszechnych mutacji w populacjach Chin i Azji Południowo-Wschodniej i był w stanie wykryć 85,2% alleli, podobnie jak w poprzednich raportach.19,20 Ponieważ M-ARMS może wykryć tylko dany zestaw mutacji specyficznych dla zastosowanych starterów, bezpośrednie sekwencjonowanie DNA jest następnym krokiem w celu identyfikacji różnych mutacji punktowych i małych rearanżacji w genie beta-globiny. Sześć rzadziej występujących mutacji zidentyfikowano w 10,2% alleli. Wadą sekwencjonowania DNA jest to, że duże delecje genu są niewykrywalne. Dlatego też gap-PCR jest ostatecznym krokiem do wykrycia delecji 3,4 kb, wcześniej zgłoszonej w populacjach tajlandzkich.21 Połączenie tych technik mogło zidentyfikować mutacje beta-talasemii we wszystkich 88 allelach (100%) pacjentów pediatrycznych w naszym badaniu.
Z wyjątkiem genu betaE-globiny, 13 różnych mutacji beta-talasemii wykryto u 80 niespokrewnionych pacjentów. Dwie najczęstsze wykryte mutacje to kodon 41/42 (-TCTT) i kodon 17 (A>T), stanowiące odpowiednio 37,5% i 26,1% dotkniętych alleli. Wszystkie pozostałe mutacje wykryte przez M-ARMS stanowiły 21,6% alleli. W porównaniu z poprzednim badaniem mutacji beta-talasemii w Tajlandii, ujawniło to, że częstotliwość mutacji genu beta-globiny zidentyfikowanych w naszym badaniu była inna. Po pierwsze, nukleotyd -28 (A>G) nie został zidentyfikowany w naszym badaniu. Nukleotyd -28 (A>G) jest mutacją beta+-talasemii powodującą łagodny fenotyp beta-talasemii, dlatego mutacja ta była obserwowana tylko u pacjentów z TI.22 Obecne badanie wykazało, że TI była grupą mniejszościową (mniej niż 10%) wśród pacjentów pediatrycznych z objawową beta-talasemią. Może to wyjaśniać, dlaczego ta mutacja nie była obserwowana w naszym badaniu. Po drugie, częstość występowania innych powszechnych mutacji, w tym kodonu 41/42 (-TCTT), kodonu 17 (A>T), IVS-II-654 (C>T), kodonu 71/72 (+A), IVS-I-1 (G>T) i IVS-I-5 (G>C) w naszym badaniu była podobna do innych badań w centralnej Tajlandii.8,10 Jednak częstość alleli w obecnym badaniu różniła się od badań w innych częściach Tajlandii. Kodon 41/42 (-TCTT) był najczęstszą mutacją zidentyfikowaną w naszej populacji, która głównie mieszkała w centralnej Tajlandii. Ta mutacja typu frameshift jest również najczęstszą mutacją stwierdzaną w innych częściach Tajlandii, Chińskiej Republiki Ludowej i Azji Południowo-Wschodniej.20 Podczas gdy kodon 17 (A>T) był drugim najczęstszym zmutowanym allelem w centralnej, północnej i północno-wschodniej Tajlandii, IVS-I-5 (G>C) był drugim najczęstszym w południowej Tajlandii.23 IVS-I-5 (G>C) został wcześniej zgłoszony jako najczęstsza mutacja wśród tajskich pacjentów muzułmańskich w południowej Tajlandii.24 Dodatkowo, kodon 71/72 (+A) stanowił 2,3% w obecnym badaniu, podczas gdy ta mutacja stanowiła 6% w północnej16 i 13,1% w północno-wschodniej13 Tajlandii, wskazując na większą częstość tej mutacji w tym obszarze.
Sześć rzadkich mutacji, w tym kodon 35 (C>A), kodon 15 (G>A), kodon 19 (A>G) lub Hb Malay, kodon 27/28 (+C), mutacja kodonu inicjacji (ATG>AGG) i kodon 123/124/125 (-ACCCCACC) zostały zidentyfikowane przez bezpośrednie sekwencjonowanie DNA. Chociaż nie wykryto żadnej nowej mutacji, dwie rzadkie w Tajlandii mutacje, mutacja kodonu inicjacji i delecja 8 bp w eksonie 3, zostały znalezione w naszym badaniu. Mutacja kodonu inicjacji (ATG>AGG) została po raz pierwszy opisana u chińskiego pacjenta z beta-talasemią w 1990 r.25 W Tajlandii ta mutacja została zgłoszona raz w 2005 r. u dwojga rodzeństwa z beta-talasemią/HbE.26 Chociaż ta mutacja poważnie wpływa na syntezę łańcucha beta-globiny i najprawdopodobniej powoduje fenotyp beta0-talasemii, wszyscy trzej zgłoszeni pacjenci mieli łagodny fenotyp, co można wyjaśnić współdziedziczeniem z heterozygotyczną delecją 3,7 kb genotypu alfa-tal-2 wśród chińskiego pacjenta i stowarzyszeniem z polimorfizmem C>T w -158(G)genie gamma-globiny u dwóch tajskich rodzeństwa. Fenotyp naszej pacjentki to beta-talasemia major zależna od transfuzji, rozpoznana w 9 miesiącu życia, natomiast genotyp był heterozygotyczny złożony pomiędzy kodonem 41/42 (-TCTT) a mutacją kodonu inicjującego. Oba zmutowane allele powodują fenotyp beta0-talasemii. Ośmiobazowa delecja w eksonie 3 lub kodonie 123/124/125 (-ACCCCACC) została po raz pierwszy scharakteryzowana u dzieci z północno-wschodniej Tajlandii z ciężkim fenotypem beta-talasemii/HbE.27 Delecja ta powoduje syntezę 135 aminokwasów łańcucha betaX (beta-Khon Kaen), które są wysoce niestabilne i ulegają degradacji wkrótce po translacji. Rozległa mutacja aminokwasów w kodonie 123 do 131 powoduje dominujące cechy beta-talasemii typu inclusion body, jak u naszego pacjenta.
Beta-talasemia/HbE jest głównym problemem związanym z talasemią w Tajlandii i może być związana z różnymi fenotypami klinicznymi, od łagodnej talasemii pośredniej do ciężkiej talasemii major zależnej od transfuzji.5,6,8,10 Tak jak w naszym badaniu, 85% pacjentów z beta-talasemią major i 100% pacjentów z TI miało heterozygotyczną beta-talasemię złożoną i HbE. W beta-talasemii major najczęściej spotykanym genotypem był kodon 41/42 (-TCTT)/betaE (40%), następnie kodon 17 (A>T)/betaE (18,3%), IVS-I-5 (G>C)/betaE (8,3%) i IVS-II-654 (C>T)/betaE (8,3%), które stanowiły 75% wszystkich wykrytych genotypów. Wyłączając mutację betaE talasemii, wszystkie mutacje beta talasemii u naszych objawowych pacjentów zostały sklasyfikowane jako mutacje beta0 z wyjątkiem kodonu 19 (A>G) lub Hb Malay, sklasyfikowanego jako mutacja beta+ i zidentyfikowanego tylko u jednego pacjenta.28
Co ciekawe, nasz pacjent z kodonem 19 (A>G)/betaE miał zależną od transfuzji talasemię major zamiast łagodnego TI. Z drugiej strony, heterozygoty złożone wśród czterech mutacji beta0, w tym kodon 41/42 (-TCTT), kodon 17 (A>T), delecja 3,4 kb, IVSI-1 (G>T) i genotyp betaE manifestowały się jako TI zamiast fenotypu beta-talasemii major. Zjawisko to może być wyjaśnione przez kilka czynników genetycznych i niegenetycznych, które mogą odgrywać rolę w określaniu zmienności choroby.5,22,29,30 Jednakże dodatkowa analiza genetyczna (modyfikatory genetyczne) nie została przeprowadzona w naszym badaniu.
Koncepcja przedimplantacyjnej diagnostyki genetycznej ma na celu umożliwienie transferu zarodków do macicy w procedurach wspomaganego rozrodu. Technika ta jest szybka i odpowiednia jako nieinwazyjne narzędzie kliniczne do identyfikacji zaburzeń genetycznych w celu zmniejszenia liczby selektywnych poronień, takich jak talasemia major.31,32 Nasze badanie ujawniło, że różne mutacje beta-talasemii mogą być klinicznie stosowane w przedimplantacyjnym protokole genetycznym, umożliwiając molekularną analizę genetyczną w celu wzmocnienia określonego regionu genu beta-globiny dla pary.
W podsumowaniu, obecne badanie wykazuje heterogeniczność defektów molekularnych powodujących beta-talasemię u tajskich dzieci. Wszystkie allele beta-talasemii zostały scharakteryzowane za pomocą kombinacji technik, w tym M-ARMS, bezpośredniego sekwencjonowania DNA i gap-PCR do wykrywania delecji 3,4 kb. Trzynaście mutacji stanowiło 100% genów beta-talasemii w naszym badaniu. Uzyskana częstotliwość powinna reprezentować częstotliwość mutacji genu beta-globiny wśród pacjentów pediatrycznych, którzy głównie mieszkali w centralnej Tajlandii.
Podziękowania
Badanie to zostało zatwierdzone przez i otrzymało finansowanie z Phramongkutklao College of Medicine.
Ujawnienie
Autorzy nie zgłaszają konfliktu interesów w tej pracy.
|
Weatherall DJ. The thalassemia syndromes. Tex Rep Biol Med. 1980;40:323-333. |
|
|
Vichinsky EP. Changing patterns of thalassemia worldwide. Ann N Y Acad Sci. 2005;1054:18-24. |
|
|
Cao A, Galanello R. Beta-thalassemia. Genet Med. 2010;12(2):61-76. |
|
|
Rund D, Rachmilewitz E. Beta-thalassemia. N Engl J Med. 2005; 353(11):1135-1146. |
|
|
Fucharoen S, Winichagoon P. Haemoglobinopathies in southeast Asia. Indian J Med Res. 2011;134:498-506. |
|
|
Fucharoen S, Ketvichit P, Pootrakul P, Siritanaratkul N, Piankijagum A, Wasi P. Clinical manifestation of beta-thalassemia/hemoglobin E disease. J Pediatr Hematol Oncol. 2000;22(6):552-557. |
|
|
Akhavan-Niaki H, Derakhshandeh-Peykar P, Banihashemi A, et al. A comprehensive molecular characterization of beta thalassemia in a highly heterogeneous population. Blood Cells Mol Dis. 2011;47(1):29-32. |
|
|
Fucharoen S, Winichagoon P. Hemoglobinopathies in Southeast Asia: molecular biology and clinical medicine. Hemoglobin. 1997;21(4): 299-319. |
|
|
Giardine B, van Baal S, Kaimakis P, et al. HbVar database of human hemoglobin variants and thalassemia mutations: 2007 update. Hum Mutat. 2007;28(2):206. |
|
|
Wasi P, Pootrakul S, Pootrakul P, Pravatmuang P, Winichagoon P, Fucharoen S. Thalassemia in Thailand. Ann N Y Acad Sci. 1980;344: 352-363. |
|
|
Fukumaki Y, Fucharoen S, Fucharoen G, et al. Molecular heterogeneity of beta-thalassemia in Thailand. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1992;23 Suppl 2:14-21. |
|
|
Thein SL, Winichagoon P, Hesketh C, et al. The molecular basis of beta-thalassemia in Thailand: application to prenatal diagnosis. Am J Hum Genet. 1990;47(3):369-375. |
|
|
Fucharoen S, Fucharoen G, Sriroongrueng W, et al. Molecular basis of beta-thalassemia in Thailand: analysis of beta-thalassemia mutations using the polymerase chain reaction. Hum Genet. 1989;84(1):41-46. |
|
|
Mirasena S, Shimbhu D, Sanguansermsri M, Sanguansermsri T. Detection of beta-thalassemia mutations using a multiplex amplification refractory mutation system assay. Hemoglobin. 2008;32(4):403-409. |
|
|
Bhardwaj U, Zhang YH, Lorey F, McCabe LL, McCabe ER. Molekularne genetyczne badania potwierdzające z próbek przesiewowych noworodków dla wspólnych afroamerykańskich, azjatyckich indyjskich, południowo-wschodnich azjatyckich i chińskich mutacji beta-talasemii. Am J Hematol. 2005;78(4):249-255. |
|
|
Sirichotiyakul S, Saetung R, Sanguansermsri T. Analysis of beta-thalassemia mutations in northern Thailand using an automated fluorescence DNA sequencing technique. Hemoglobin. 2003;27(2): 89-95. |
|
|
Fucharoen S, Fucharoen G, Ratanasiri T, Jetsrisuparb A, Fukumaki Y. A simple non radioactive method for detecting beta-thalassemia/hbe disease: application to prenatal diagnosis. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1995;26 Suppl 1:278-281. |
|
|
Ho PJ, Hall GW, Luo LY, Weatherall DJ, Thein SL. Beta-thalassaemia intermedia: czy możliwe jest konsekwentne przewidywanie fenotypu na podstawie genotypu? Br J Haematol. 1998;100(1):70-78. |
|
|
Old JM, Khan SN, Verma I, et al. A multi-center study in order to further define the molecular basis of beta-thalassemia in Thailand, Pakistan, Sri Lanka, Mauritius, Syria, and India, and to develop a simple molecular diagnostic strategy by amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction. Hemoglobin. 2001;25(4):397-407. |
|
|
Kazazazian HH Jr, Dowling CE, Waber PG, Huang S, Lo WH. The spectrum of beta-thalassemia genes in China and Southeast Asia. Blood. 1986;68(4):964-966. |
|
|
Sanguansermsri T, Pape M, Laig M, Hundrieser J, Flatz G. Beta zero-thalassemia in a Thai family is caused by a 3.4 kb deletion including the entire beta-globin gene. Hemoglobin. 1990;14(2):157-168. |
|
|
Nuntakarn L, Fucharoen S, Fucharoen G, Sanchaisuriya K, Jetsrisuparb A, Wiangnon S. Molekularne, hematologiczne i kliniczne aspekty talasemii major i talasemii intermedia związane z Hb E-beta-talasemią w północno-wschodniej Tajlandii. Blood Cells Mol Dis. 2009;42(1):32-35. |
|
|
Nopparatana C, Panich V, Saechan V, et al. The spectrum of beta-thalassemia mutations in southern Thailand. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1995;26 Suppl 1:229-234. |
|
|
Laosombat V, Nopparatana C, Wongchanchailert M, Wiriyasateinkul A. Molecular basis of beta-thalassemia in Thai Muslim patients in the south of Thailand. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1997; 28 Suppl 3:104-105. |
|
|
Lam VM, Xie SS, Tam JW, Woo YK, Gu YL, Li AM. A new single nucleotide change at the initiation codon (ATG—-AGG) identified in amplified genomic DNA of a Chinese beta-thalassemic patient. Blood. 1990;75(5):1207-1208. |
|
|
Viprakasit V, Chinchang W, Suwanthol L, Tanphaichitr VS. Common origin of a rare beta-globin initiation codon mutation (ATG–>AGG) in Asians. Clin Lab Haematol. Dec 2005;27(6):409-415. |
|
|
Fucharoen G, Fuchareon S, Jetsrisuparb A, Fukumaki Y. Eight-base delecja w eksonie 3 genu beta-globiny produkowane nowy wariant (beta khon kaen) z ciałem inkluzyjnym beta-thalassemia cechy. Blood. 1991;78(2):537-539. |
|
|
Yang KG, Kutlar F, George E, et al. Molecular characterization of beta-globin gene mutations in Malay patients with Hb E-beta-thalassaemia and thalassaemia major. Br J Haematol. 1989;72(1):73-80. |
|
|
Olivieri NF, Pakbaz Z, Vichinsky E. HbE/beta-thalassemia: basis of marked clinical diversity. Hematol Oncol Clin North Am. 2010;24(6): 1055-1070. |
|
|
Rund D, Fucharoen S. Genetic modifiers in hemoglobinopathies. Cur Mol Med. 2008;8(7):600-608. |
|
|
Nasri NW, Jamal AR, Abdullah NC, Razi ZR, Mokhtar NM. Preimplantation genetic diagnosis for beta-thalassemia using single-cell DNA analysis for codons 17 and 26 of beta-globin gene. Arch Med Res. 2009;40(1):1-9. |
|
|
Hung CC, Chen SU, Lin SY, et al. Preimplantation genetic diagnosis of beta-thalassemia using real-time polymerase chain reaction with fluorescence resonance energy transfer hybridization probes. Anal Biochem. 2010;400(1):69-77. |