Que sont les essais immunologiques ?

Par le Dr Sanchari Sinha Dutta, Ph.D.Révisé par le Dr Surat P, Ph.D.

Les immunoessais sont des méthodes bioanalytiques qui utilisent la spécificité d’une réaction antigène-anticorps pour détecter et quantifier les molécules cibles dans les échantillons biologiques. Ces méthodes sont fréquemment utilisées dans les diagnostics cliniques, la découverte de médicaments, la surveillance des médicaments et les tests alimentaires.

Khamkhlai Thanet |

Types d’immunoessais

Le principe d’un immunoessai repose sur les compétitions entre une quantité fixe d’analyte marqué et une quantité variable d’analyte d’échantillon non marqué pour la liaison d’un nombre limité de sites de liaison d’un anticorps spécifiquement élevé contre l’analyte. Ces méthodes peuvent être utilisées pour détecter une molécule cible de manière quantitative, semi-quantitative ou qualitative.

Dosage radio-immunologique (RIA)

Les dosages radio-immunologiques utilisent un radio-isotope comme marqueur pour quantifier les hormones, les médicaments et les antigènes viraux. Une concentration connue d’antigène radiomarqué est incubée avec une concentration fixe d’anticorps spécifique de cet antigène. Ce complexe antigène-anticorps radiomarqué est ensuite mélangé avec un échantillon biologique contenant une concentration inconnue du même antigène.

En principe, si la concentration de l’antigène de l’échantillon est supérieure à celle de l’antigène radiomarqué, l’antigène de l’échantillon se fixera au nombre limité de sites de liaison de l’anticorps en remplaçant l’antigène radiomarqué. Ensuite, la radioactivité de ces antigènes radiomarqués libres (non liés à un anticorps) est mesurée ; ce qui est directement proportionnel à la concentration d’antigènes non marqués présents dans l’échantillon biologique.

Toutefois, la courte demi-vie des radio-isotopes, ainsi que les risques sanitaires associés à leur utilisation, limitent considérablement l’application de cette méthode dans de nombreux laboratoires.

Essai immunosorbant lié à une enzyme (ELISA)

Dans un ELISA, une enzyme est liée à un anticorps qui a été spécifiquement élevé contre un antigène d’intérêt.

Les échantillons biologiques contenant l’antigène cible sont autorisés à lier l’anticorps marqué par l’enzyme et la réaction est visualisée en utilisant un substrat spécifique de l’enzyme qui est ajouté au mélange réactionnel. Le substrat spécifique à l’enzyme se lie à l’enzyme fixée à l’anticorps, générant un produit coloré qui peut être détecté à l’aide de techniques d’imagerie chromogènes ou chimioluminescentes.

L’ELISA a une spécificité et une sensibilité élevées, il est donc fréquemment utilisé pour le criblage à haut débit d’anticorps ou de médicaments.

Dossiers fluoroimmunologiques

Des sondes fluorescentes sont utilisées pour marquer les anticorps. Les échantillons biologiques contenant un antigène d’intérêt sont incubés avec un anticorps marqué par fluorescence. L’intensité de fluorescence du complexe antigène-anticorps obtenu est mesurée pour quantifier l’antigène cible.

Immunoessais par chimioluminescence

Les molécules luminescentes, lorsqu’elles reviennent d’un état excité à un état fondamental, émettent une lumière visible ou quasi-visible (luminescence), qui peut être détectée par des dispositifs de mesure du signal luminescent.

Dans les essais immunologiques par chimioluminescence, des marqueurs luminophores, tels que les esters d’acridinium, peuvent être utilisés directement ; ou des marqueurs enzymatiques comprenant la phosphatase alcaline et la peroxydase de raifort peuvent être utilisés indirectement avec des substrats d’adamantyl 1, 2-dioxétane aryl phosphate (AMPPD) et de luminol, respectivement.

Le principal avantage de cette méthode est que la lecture peut être augmentée en utilisant des amplificateurs, qui permettent à la réaction de se poursuivre plus longtemps sans réduire l’intensité du signal.

Immunoessais de comptage

Les immunoessais de comptage utilisent la technologie du comptage de particules. Des billes de polystyrène (particules de latex) sont recouvertes d’anticorps spécifiques d’un antigène d’intérêt. Lorsqu’elles sont incubées avec un échantillon biologique contenant l’antigène cible, ces billes forment des complexes immuns, qui forment des amas visibles (agglutination).

Selon la concentration de l’antigène cible, certaines billes restent non liées et peuvent être comptées à l’aide d’un compteur de cellules. Le nombre de billes non liées dénote inversement la concentration de l’antigène cible.

Tendances des immunodosages

On développe des immunodosages avancés, ultra-sensibles et moins chronophages. L’immunodosage sans marquage basé sur la résonance plasmonique de surface (SPR) est l’un de ces exemples qui s’accompagne de nombreuses caractéristiques particulières, telles qu’une analyse ultrarapide (en quelques minutes), un besoin minimal d’échantillon et de réactifs, un protocole d’immunodosage microfluidique sans marquage et un système entièrement automatisé à haut débit.

En outre, les formats d’immunodosage basés sur les smartphones, les dosages multiplex à base de billes, les formats d’immunodosage à flux latéral sont parmi les derniers développements qui ont facilité la surveillance et la gestion des complications liées à la santé en temps réel.

Écrit par

Dr. Sanchari Sinha Dutta

Dr. Sanchari Sinha Dutta est une communicatrice scientifique qui croit en la diffusion du pouvoir de la science dans tous les coins du monde. Elle est titulaire d’une licence en sciences (B.Sc.) et d’une maîtrise en sciences (M.Sc.) en biologie et physiologie humaine. Après sa maîtrise, Sanchari a poursuivi ses études par un doctorat en physiologie humaine. Elle est l’auteur de plus de 10 articles de recherche originaux, qui ont tous été publiés dans des revues internationales de renommée mondiale.

Citations

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