C’est une préparation de Bacillus subtilis, colorée pour démontrer les endospores. Après une croissance sur une gélose nutritive à 37 degrés Celsius pendant 24 heures, les organismes ont été retirés de la plaque et mis en suspension dans une goutte d’eau sur une lame de verre. On a laissé l’eau sécher à l’air libre, puis les bactéries ont été fixées à la chaleur sur la lame en la faisant passer 3 à 4 fois dans la flamme d’un bec Bunsen. La lame a été laissée refroidir. Les endospores ont été colorées avec du vert de malachite à 5 % en inondant la lame de colorant et en plaçant une flamme sous la lame jusqu’à ce que la solution de colorant commence à produire de la vapeur. La solution de vert Malachite réchauffée a été laissée sur les cellules pendant 5 minutes. Il n’était pas nécessaire de chauffer la lame en continu. La lame a été rincée avec de l’eau du robinet et les cellules ont été contre-colorées pendant 30 secondes avec 0,25 % de Safranin O (la même contre-coloration que celle utilisée dans la réaction de Gram). Une fois la procédure de coloration terminée, si les endospores ne sont pas vertes, il peut être nécessaire de modifier la technique pour inclure une vaporisation continue avec du vert Malachite pendant 5 minutes. La taille moyenne des cellules était de 3-5 microns.