Spore Stain of Bacillus subtilis

Tämä on Bacillus subtilis -valmiste, joka on värjätty endosporien osoittamiseksi. Kun organismeja oli kasvatettu Nutrient-agarilla 37 celsiusasteessa 24 tuntia, ne poistettiin levyltä ja suspendoitiin vesipisaraan lasilevylle. Veden annettiin kuivua ilmakuivaksi, minkä jälkeen bakteerit kiinnitettiin lämpökiinnityksellä objektilasiin kuljettamalla se Bunsen-polttimen liekin läpi 3-4 kertaa. Objektiivin annettiin jäähtyä. Endosporit värjättiin 5-prosenttisella malakiittivihreällä väriaineella täyttämällä dia väriaineella ja asettamalla liekki dian alle, kunnes väriaineliuos alkoi tuottaa höyryä. Lämmitetyn malakiittivihreän liuoksen annettiin vaikuttaa soluihin 5 minuuttia. Dian jatkuva höyrystäminen (lämmittäminen) ei ollut tarpeen. Dia huuhdeltiin vesijohtovedellä ja solut vastavärjättiin 30 sekunnin ajan 0,25-prosenttisella Safranin O:lla (sama vastaväri, jota käytetään Gram-reaktiossa). Jos endosporit eivät värjäyksen jälkeen ole vihreitä, voi olla tarpeen muuttaa tekniikkaa siten, että malakiittivihreällä höyrystetään jatkuvasti 5 minuutin ajan. Solujen keskimääräinen koko oli 3-5 mikronia.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.