Biol Res 41: 197-204, 2008
ARTICLE
Differences in lipogenesis and lipolysis in obese and non-obese adult human adipocytes
MARIANA CIFUENTES, CECILIA ALBALA and CECILIA V ROJAS
Institute of Nutrition and Food Technology (INTA)
Institute of Nutrition and Food Technology (INTA)
, Universidad de Chile, Santiago, Chile.
Dirección para Correspondencia
ABSTRACT
On ehdotettu, että lihavien ja laihojen yksiláisien väliset erot rasvasolujen toiminnassa ja/tai aineenvaihdunnassa voivat ilmetä toiminnallisina rasvakudoksen poikkeavuuksina, jotka johtavat lihavuuden aineenvaihduntahäiriöihin. Tutkimme lihavien (OB) ja ei-lihavien (NOB) ihmisten omentaalisten adiposyyttien lipogeneesiä ja lipolyysiä. Lipogeenisen merkkiaineentsyymin G3PDH:n spesifinen aktiivisuus oli 50 % pienempi OB-henkilöiden kokonaisrasvasoluissa verrattuna NOB-henkilöiden vastaavaan. OB-henkilöiden omentaalisilla adiposyyteillä oli myös alhaisempi peruslipolyysileveis ja alhaisempi lipolyysireaktio p-adrenergiselle ärsykkeelle. Adiposyyttien plasmakalvon kolesterolityhjennys metyyli β-syklodekstriinillä aiheutti lipolyyttisen vaikutuksen molempien ryhmien adiposyyteihin yhdessä, mutta kun lihavia ja laihoja koehenkilöitä analysoitiin erikseen, vaste oli merkitsevä vain lihavilla. Esitämme todisteita erilaisesta lipogeenisesta ja lipolyysiprofiilista lihavien yksilöiden omentaalisissa adiposyyteissä ja ehdotamme plasmakalvon kolesterolin merkityksellistä roolia, jossa sen poistamisen vaikutus OB- ja NOB-adiposyyttien lipolyysiin eroaa.
Avainsanat: adiposyytti, kolesteroli, lipogeneesi, lipolyysi, lihavuus, triglyseridimetabolia.
TIIVISTELMÄ
Viskeraalisen rasvakudoksen liiallinen määrä liittyy lukuisiin terveysongelmiin. Lisääntynyt rasvoittuminen liittyy lisääntyneeseen rasvasolujen tilavuuteen. Siten lihavilla yksiláillä on suhteellisen suuri määrä hypertrofisia adiposyyttejä verrattuna laihoihin koehenkilöihin. Eläinten ja ihmisten rasvasoluilla tehdyissä tutkimuksissa on todettu, että useat adiposyyttien aineenvaihduntatoiminnot, kuten insuliiniherkkyys ja glukoosiaineenvaihdunta sekä adipokiinien eritys ja geeniekspressioprofiilit, muuttuvat solujen koon kasvaessa (Bluher ym., 2004; Salans ja Doherty, 1971; Salans ym., 1974; Smith, 1971; Yang ym., 2004). Tämä on johtanut siihen, että hypertrofisten ja/tai metabolisesti heikentyneiden solujen toiminnallinen vallitsevuus rasvakudoksessa on tärkeä kausaalivaikutus siihen, että kudos reagoi heikosti homeostaattisiin signaaleihin, mikä ylläpitää tai pahentaa lihavuustilaa. Tämän hypoteesin testaamiseksi ryhdyimme tutkimaan in vitro lipogeneesiä ja lipolyysiä OB- ja NOB-aikuisten eristetyissä omentaalisissa adiposyyteissä. Ottaen huomioon, että lipolyysin signalointi riippuu kaveoleissa sijaitsevista proteiineista ja että näiden kolesterolirikkaiden rakenteiden järjestäytymisen häiritseminen on liittynyt metabolisiin muutoksiin liikalihavissa adiposyyteissä (Le Lay et al., 2004), arvioimme myös plasmakalvon kolesterolin poiston vaikutusta metyyli(β-syklodekstriinin (M(βCD)) avulla OB- ja NOB-adiposyyttien lipolyysiin.
Tämänhetkiset tulokset korostavat erilaista lipogeenistä ja lipolyysiprofiilia laihojen ja lihavien henkilöiden välillä. Tietomme osoittavat, että lihavien henkilöiden adiposyyttien plasmakalvon alhaisemmalla kolesterolipitoisuudella on metabolinen merkitys, joka vaikuttaa lipolyysiä koskevaan fysiologiseen säätelyyn.
MATERIAALIT JA MENETELMÄT
Adiposyyttien eristäminen
Henkilön omentaalirasva saatiin 25:ltä liikalihavaltaiselta (OB, obesus) ja ei- liikalihavaltaiselta (NOB, ei-obesus) koehenkilöltä, jotka olivat läpikäymässä elektiivistä vatsaontelon alueen kirurgista toimenpidettä (joka suoritettiin joko vatsaontelon ohitusleikkauksena, gynekologisena tai gastrointestinaalisessa kirurgiana). Koehenkilöiden ikähaarukka oli 29-79 vuotta, ja heidän painoindeksinsä (BMI) vaihteli 18-54 kg/m2 välillä. Lihavuuden määrittelyn raja-arvona käytettiin NIH:n määritelmää BMI > 30 kg/m2. Kaksitoista tutkittavaa (9 miestä, 3 naista) oli NOB (BMI 23,3 ± 3,4 kg/m2), kun taas 13 oli OB (BMI 38,2 ± 4,3 kg/m2; 4 miestä, 9 naista). Emme havainneet sukupuolen vaikutusta tutkittuihin parametreihin. Chilen yliopiston INTA:n laitosvalvontalautakunta hyväksyi tutkimussuunnitelman, ja luovuttajat allekirjoittivat tietoon perustuvan suostumuksen. Leikkauksen aikana poistettu rasvakudos upotettiin suolaliuokseen ja kuljetettiin laboratorioon käsiteltäväksi tunnin kuluessa. Saapumisen jälkeen kudos pestiin useita kertoja Hanksin tasapainotetulla suolaliuoksella (Hanks’ Balanced Salt Solution, HBSS), jolloin kaikki näkyvä sidekudos, verihyytymät ja verisuonet poistettiin, ja sen jälkeen se jauhettiin pieniksi paloiksi (2-3 mm2) ja kasvatettiin MI99-mediumissa (Invitrogen, Carlsbad, CA), jota täydennettiin antibiooteilla (penisilliini- ja streptomysiini) 37 °C:n lämpötilassa kontrolloidussa ilmakehän inkubaattorissa. Kudoksen inkubaatioaika oli 2 päivää, jotta minimoitaisiin yksilöiden välinen vaihtelu, joka johtui koehenkilön tekijöistä, kuten hormonaalisesta ympäristöstä, senhetkisestä terveydentilasta tai lääkityksestä. Adiposyytit eristettiin Rodbellin (1964) työhön perustuvalla menetelmällä. Lyhyesti sanottuna jauhettua rasvakudosta inkuboitiin lg/1 kollagenaasi tyyppi I:n (Worthington Biochemical Corp. Lakewood, NJ) kanssa 37 °C:ssa 60 minuutin ajan sekoittaen jatkuvasti. Tuloksena saatu solususpensio suodatettiin steriilin sideharsotyynyn läpi, ja koska adiposyytit irtoavat spontaanisti vesifaasista, ne kerättiin talteen imemällä kelluva kerros varovasti plastiikkapipetillä ja pestiin kahdesti 5 tilavuudella HBSS:ää. Eristetyt adiposyytit käytettiin joko välittömästi lipolyysi-tutkimuksiin tai pakastettiin myöhempää glyseroli-β-fosfaattidehydrogenaasin (G3PDH) määritystä varten.
Lipolyyttinen reagointikyky (β-adrenergiseen ärsykkeeseen ja lipogeenisen aktiivisuuden havaitseminen (ks. jäljempänä) osoittivat elinkelpoisten adiposyyttien läsnäolon kudoksen digestiónin jälkeen.
Lipogeneesi ja lipolyysi
Triglyseridien synteesissä adiposyytissä käytetään sekä valmiita että de novo-valmistettuja rasvahappoja, kun taas glyserolirunko on peräisin glukoosista peräisin olevasta glyseroli-β-fosfaatista. Lipogeenistä kapasiteettia arvioitiin G3PDH-entsyymin spesifisellä aktiivisuudella, joka katalysoi triglyseridien glyserolirungon muodostumista glykolyysin kautta saatavasta dihydroksiasetonifosfaatista. Tämän entsyymin katsotaan rajoittavan triglyseridien synteesin nopeutta rasvakudoksessa, koska se on tässä kudoksessa glyseroli-β-fosfaatin solé-lähde. Sen käyttöä lipogeenisena merkkiaineena kypsissä rasvasoluissa tukee sen mRNA:n ja aktiivisuuden säätely insuliinin vaikutuksesta (Moustaid ym., 1996; Rumberger ym., 2003). Lyhyesti sanottuna eristetyt adiposyytit homogenisoitiin (10 iskua 1800 rpm:n kierrosnopeudella Glas-Col-homogenisointilaitteella, Glas-Col, IN) käyttäen lasiputkea, jossa oli teflonmurskain, 4 °C:n lämpötilassa puskurissa, joka sisälsi puskuria, joka sisälsi 0,25 M sakkaroosia, 1 mM EDTA:ta, 50 mM trietanoliamiinia ja 1 mM ditioottitriitolia. Homogenoitua ainetta sentrifugoitiin 14 000 x g:ssa 4 °C:ssa 30 minuutin ajan. G3PDH:n aktiivisuus määritettiin supernatantista Kozakin ja Jensenin (1974) menetelmän mukaisesti mittaamalla NADH:n hapettuminen (absorbanssin muutoksen aikakäyrä 340 nm:ssä 37 °C:ssa) mikrolevylukijalla (EL-808, BioTek Instruments Inc, Winooski, VT) käyttäen entsyymin substraattina dihydroksiasetonifosfaattia. Reaktio oli lineaarinen ajan suhteen koko määritysjakson ajan. Yksi entsyymiaktiivisuusyksikkö vastaa 1 nmol NADH:n hapettumista minuutissa edellä mainituissa olosuhteissa. Liukoisen uutteen proteiinipitoisuus mitattiin Bradfordin menetelmällä (Bradford, 1976).
Lipolyysi arvioitiin 48 tunnin rasvakasvatuksen aikana mittaamalla MI99-kasvatusmediumiin vapautuneen kumulatiivisen glyserolin määrä (Free glycerol determination reagent, Sigma, St Louis MO). Lisäksi arvioitiin akuutti lipolyysireaktio (β-adrenergiseen ärsykkeeseen, plasmakalvon kolesterolin tyhjentämisen kanssa tai ilman sitä (60 minuutin esi-inkubointi 10 mM MβCD:llä ), mittaamalla vapautunut kokonaisglyseroli 10 prosentin adiposyyttisuspensioiden 90-minuuttisen inkuboinnin aikana 37 °C:n lämpötilassa varovaisessa jatkuvassa pyörittelyssä ja lisäämällä siihen 10μM isoproterenolia (Sigma) tai ajoneuvoa. Rasvakudosviljelyssä tapahtuvaa lipolyysiä arvioitaessa glyseroliarvot ilmaistaan mg:aa kudosta kohti, kun taas adiposyyttisuspensioissa tapahtuvaa lipolyysiä arvioitaessa arvot normalisoidaan solulipidien kokonaismäärään Carpénénén (2001) kuvaamalla tavalla tai, lipolyyttisillä aineilla tehdyissä kokeissa, vastaavaan basaaliseen (ei-stimuloituun) kontrolliin. Solujen kokonaislipidit uutettiin Dolén ja Meinertzin (1960) menetelmällä ja määritettiin gravimetrisesti. Koska solujen koon ja lipolyysin välillä on raportoitu olevan riippumaton suhde, joka voi toimia sekoittavana tekijänä, erityisesti tutkimuksissamme, joissa verrataan OB- ja NOB-koehenkilöitä, ilmaisua mg:aa lipidiä kohti pidettiin asianmukaisimpana. Kuten Large et al. (1999) osoittivat, lipidipitoisuutta kohti ilmaistu glyserolirelieaasi korreloi voimakkaasti hormoniherkän lipaasin aktiivisuuden kanssa lihavilla ja laihoilla ihmisillä tehdyissä tutkimuksissa, ja se on merkityksellisempi lipolyysi-kapasiteetin kannalta kuin solujen lukumäärää kohti, koska rasvasolujen tilavuus on lisääntynyt lihavilla.
Tilastot
Keskiarvojen väliset erot analysoitiin Studentin t-testillä, ja ne katsottiin merkitseviksi, jos niiden arvo oli p≤0,05. Pearsonin korrelaatiokerrointa käytettiin jatkuvien muuttujien yhteyksien arviointiin. Tiedot on ilmaistu keskiarvoina ± SEM.
TULOKSET
Lipogeneesi
Lipogeneesi
Lipogeenisen entsyymin G3PDH:n spesifinen aktiivisuus oli OB-koehenkilöillä lähes puolet verrattuna NOB:n adiposyyttien aktiivisuuteen (p<0.05, kuva 1). Tämän mukaisesti lipogeneesimerkkiaineen ja koehenkilöiden BMI:n välillä oli merkittävä käänteinen korrelaatio (kuva 1, sisäkuva, r2=0,31, p=0,01). On syytä huomata, että OB- ja NOB-koehenkilöiden välillä ei ollut eroja proteiinipitoisuuksissa (joita käytettiin G3PDH-aktiivisuuden normalisoimiseksi), jotka olisivat voineet vääristää näitä tuloksia.
Lipolyysi
Lipolyyttisen aktiivisuuden indikaattorina käytettiin glyserolin uusiutumista inkubaatiomediumiin kokonaisen omentaalisen rasvakudoksen tai eristettyjen adiposyyttien viljelyn aikana. Sekä peruslipolyysi että isoproterenoli-stimuloitu lipolyysi olivat pienempiä OB-henkilöiden eristetyissä adiposyyteissä (p<0,05 ja p<0,01, vastaavasti, kuva 2). Näiden havaintojen mukaisesti lipolyysi ja koehenkilön BMI:n välillä oli erittäin merkitsevä käänteinen korrelaatio koko kudoksen (r2=0.46, p<0.0005, sisäkuva, kuva 2) ja eristettyjen adiposyyttien (basaalinen: r2=0.28, p<0.01; β-adrenergin stimuloima: r2=0.17, p<0.05, n=20) osalta. Lihavien henkilöiden adiposyytit osoittivat alhaisempaa vastetta (β-adrenergiseen ärsykkeeseen verrattuna laihojen vastaavien henkilöiden adiposyytteihin (Kuva 3, p<0.05).
Adiposyyttien altistaminen 10 mM MβCD:lle 11 näytteen alaryhmässä aiheutti merkitsevän lisäyksen peruslipolyysiin. Tämä lisäys oli suoraan verrannollinen koehenkilön BMI:hen (r2=0,5, p<0,05, kuva 4). Lipolyyttinen vaste (β-adrenergiseen stimulaatioon väheni merkittävästi, kun adiposyytit altistettiin M(βCD:lle (345 ± 50 % vs. 199 ± 33 %, p< 0,05). Mielenkiintoista oli, että verrattaessa M(βCD:n vaikutusta ajoneuvoon nähden lipolyyttisen vasteen merkittävää vähenemistä isoproterenolille havaittiin adiposyyteissä, jotka olivat peräisin koehenkilöiltä, joiden BMI>40 kg/ m2 (NIH:n määritelmän mukaan sairaalloisen liikalihava), kun taas laihojen koehenkilöiden kohdalla ei havaittu merkittävää eroa (kuva 5). Tämän mukaisesti BMI:n ja 10μM isoproterenolille 10 mM M(βCD:n läsnäollessa ja ilman 10 mM M(βCD:tä saadun lipolyyttisen vasteen suhteen välillä havaittiin merkitsevä korrelaatio (r2=0,46, p<0,05).
KESKUSTELU
Tässä työssä tutkittiin lipogeneesiä ja lipolyysiä aikuisten OB- ja NOB-aikuisten omentaalisesta rasvakudoksesta eristetyissä adiposyyteissä laajalla BMI:n vaihteluvälillä (18-54 kg/m2). Havaintomme osoittavat, että lipogeneesin merkkiaineen G3PDH:n spesifinen aktiivisuus OB:ssa oli puolet pienempi kuin NOB-vertaistensa adiposyyteissä. Toisaalta korkeampi BMI liittyi alhaisempaan basaaliseen ja (β-adrenergisesti stimuloituun lipolyysiin ja suurempaan herkkyyteen kolesterolin poistosta johtuvalle plasmakalvon signaalihäiriölle. Suurempi triglyseridien kertyminen OB-adiposyyttiin voi liittyä alhaisempaan lipolyysiaktiivisuuteen, jonka havaitsimme tässä ryhmässä, kuten muutkin ovat ehdottaneet (Langin ym., 2005). Lisäksi alhaisempi G3PDH-spesifinen aktiivisuus, jonka havaitsimme OB:ssa, mikä voi johtaa vastakkaiseen intuitioon, voisi edustaa vähentynyttä kapasiteettia varastoida ylimääräisiä kiertäviä triglyseridejä, mikä todennäköisesti johtaa hypertriglyseridemiaan ja rasvan kertymiseen kehon muille alueille, millä on tunnettuja haitallisia vaikutuksia, jotka liittyvät metaboliseen oireyhtymään.
Käyttämällä in vivo -lähestymistapaa ihmisillä Dodt et al. (2003) havaitsivat lihavilla naisilla tylsistyneen lipolyyttisen vasteen intraneuraaliseen stimulaatioon, mikä on johdonmukaista in vitro -tulostemme kanssa ja tukee käsitystä siitä, että liikalihavuus voi ainakin osittain liittyä alhaiseen lipolyyttiseen vasteeseen sympaattiseen aktivaatioon. Vastaavasti Gómez-Ambrosi et al. (2004) tutkivat omentaalisen rasvakudoksen geeniekspression mallia ja osoittivat, että lihavilla koehenkilöillä oli vastaavasti lipolyysiä indusoivien ja repressorigeenien ekspressio alentunut ja voimistunut.
Kirjallisuudessa on huomattavia ristiriitaisuuksia lipolyysiä koskevien tietojen normalisoinnin suhteen. Kun otetaan huomioon raportoitu suora yhteys adiposyyttisolujen koon ja lipolyysin välillä (Large ym., 1999) ja suurempien adiposyyttien suurempi suhteellinen runsaus liikalihavilla (Large ym., 1999), rasvakudoksen odotetaan osoittavan suurempaa oikaisematonta lipolyysiä liikalihavilla kuin NOB-yksilöillä. Jotta vältettäisiin sekoittava tekijä, joka johtuisi solujen erilaisesta kokojakaumasta OB:n ja NOB:n välillä, glyserolireliaasiarvot normalisoitiin ilmaisemalla ne mg:aa kokonaislipidiä kohti, jolloin arvioitiin lipolyysiaktiivisuutta tietylle lipidimassalle. Tätä tukevat lihavilla ja laihoilla ihmisillä tehdyt tutkimukset ovat havainneet korkean korrelaation keskeisen lipolyyttisen entsyymin HSL:n (hormoniherkkä upaasi) ja adiposyyttien glyserolireléaasin aktiivisuuden välillä ilmaistuna lipidipitoisuutta kohti (Large ym., 1999). Kirjoittajat totesivat, että lipidipitoisuus on merkityksellisempi lipolyyttisen kapasiteetin kannalta kuin normalisointi solujen lukumäärää kohti, koska rasvasolujen tilavuus on lisääntynyt lihavilla. On syytä huomata, että (β-adrenerginen stimulaatio perusolosuhteisiin nähden osoittautui myös alhaisemmaksi OB-henkilöillä, ja tämä arviointi on riippumaton solujen koosta tai lukumäärästä, kun otetaan huomioon, että se on normalisoitu vastaavaan kontrolliin nähden (kukin perusarvo).
Kalvojen kolesterolipitoisuuden merkitys kaveolien eheydelle, spesifiselle signaalinsiirrolle ja asianmukaiselle solutoiminnalle on jo tunnustettu (Le Lay et al. 2001). On osoitettu, että hypertrofisilla adiposyyteillä on heikentynyt aineenvaihdunta yhdessä plasmakalvon alhaisemman kolesterolipitoisuuden kanssa (Le Lay ym. 2001). Havaintomme laajentavat Le Lay et al. (2001, 2004), jotka osoittivat, että kolesterolin vähentäminen rasvasoluissa aiheuttaa insuliiniresistenssiä ja muutoksia useiden rasva-aineenvaihdunnan kannalta merkityksellisten geenien ilmentymisessä. Nämä tulokset esitettiin todisteena siitä, että kolesterolin väheneminen plasmakalvolla on yhteys adiposyyttien hypertrofian ja aineenvaihdunnan häiriöiden välillä, mitä nykyiset tuloksemme tukevat. Kokeemme, joissa adiposyytit altistettiin M(βCD:lle, aiheuttivat merkittävän lisäyksen peruslipolyysiin (odotettavissa sen jälkeen, kun plasmakalvon kaveolien eheys oli muuttunut, mikä johti fosfodiesteraasi 3B:n aktiivisuuden vähenemiseen ) ja näin ollen vähentyneeseen lipolyyttiseen vasteeseen (β-adrenergiselle ärsykkeelle. Mielenkiintoista on, että havaitsimme merkittävän yhteyden M(βCD:n vaikutuksen peruslipolyysiin ja BMI:n välillä. Lisäksi BMI:n ja isoproterenolin ja peruslipolyysin välisen merkittävän korrelaation välinen suhde M(βCD:n läsnäollessa ja poissaollessa tukevat lihavista koehenkilöistä peräisin olevien adiposyyttien suurempaa alttiutta kolesterolivähennyksen aiheuttamalle plasmakalvon muuttuneelle signaloinnille.
Suurentuneita rasvasoluja, joiden tiedetään esiintyvän runsaammin koehenkilöiden BMI:n kasvaessa (Julien ym., 1989; Salans ym., 1973; Van Harmelen ym, 2003) ovat insuliiniresistenttejä (Olefsky 1977) ja niillä on erillinen erittymismalli, joka on yhdistänyt ne lihavuuteen liittyviin sairauksiin (Imbeault ym., 1999; Van Harmelen ym., 2000).
Interenkiintoista on, että rasvakudosspesifiset insuliinireseptorin tyrmäyshiiret (Bluher ym, 2004) osoittavat adiposyyttien polarisoitumista kahteen pienen (<50μm halkaisijaltaan) ja suuren >1OOμm) solujen osapopulaatioon, johon liittyy eroja muun muassa triglyseridisynteesissä ja lipolyysissä. Tässä raportoidut havainnot osoittavat luontaisia eroja triglyseridimetaboliassa OB- ja NOB-henkilöiden omentaalisten adiposyyttien välillä, ja ehdotamme, että hypertrofioituneiden ja kalvojen kolesterolin puutteesta kärsivien adiposyyttien rikastuminen voi ajaa tällaisia muutoksia. On mahdollista, että heikentynyt lipolyyttinen vaste vaikuttaa ajan myötä triglyseridivaraston laajentumiseen. Vähentynyt kyky varastoida lisää triglyseridejä johtaisi kiertävien lipidien määrän lisääntymiseen, mikä lisäisi metaboliseen oireyhtymään liittyviä riskejä.
Tietojemme mukaan missään muussa tutkimuksessa ei ole arvioitu lipogeneesiä ja lipolyysiä ihmisen OB- ja NOB-henkilöiden omentaalisissa adiposyyteissä. Tämä työ osoittaa merkityksellisiä eroja omentaalisten adiposyyttien triglyseridimetaboliassa liikalihavilla verrattuna ei-lihaviin koehenkilöihin ja viittaa siihen, että liikalihavien yksiláiden adiposyytit ovat alttiimpia plasmakalvon alentuneelle kolesterolipitoisuudelle. Vaikka tarkoituksenamme oli minimoida koehenkilötekijät, emme voi sulkea pois sitä, että lihavilla henkilöillä esiintyvät liitännäissairaudet voivat vaikuttaa rasvasolujen erilaiseen käyttäytymiseen. Triglyseridien käsittelyn vertailu näiden ryhmien välillä ja tällaisessa patogeenisesti merkityksellisessä rasvavarastossa auttaa ymmärtämään aineenvaihdunnan ja reagointikyvyn eroja, jotka voivat olla farmakologisten interventioiden kohteena ja vaativat lisätutkimuksia.
LÄHTEET
Haluamme kiittää tohtori Miguel A. Celisiä Tisnén sairaalassa, tohtori Leonardo Rodríguezia DIPRECA-sairaalassa ja tohtoreita Cristian Cavalla, James Hamilton ja Gonzalo Wiedmaier Padre Hurtadon sairaalassa korvaamattomasta avusta rasvakudoksen hankkimisessa sekä rouva. Marisol Blanco ja Rodrigo Brücher teknisestä avusta.
APURAHAT
Tukea ovat antaneet DI-U de Chile (nro Mult 04/06-2 C. Rojasille ja nro 1-04/01-2 M. Cifuentesille) ja FONDECYT (nro 1070632 C. Rojas, N°1080232 M. Cifuentes).
BLUHER M, WILSON-FRITCH L, LESZYK J, LAUSTSEN P G, COR VERA S, KAHN CR (2004) Role of insulin action and cell size on protein expression patterns in adipocytes. J Biol Chem 279: 31902-31909.
BRADFORD MM (1976) Nopea ja herkkä menetelmä mikrogramman proteiinimäärien kvantifioimiseksi proteiinin ja väriaineen sitoutumisen periaatteita käyttäen. Anal Biochem 72: 248-254.
CARPENÉ C (2001) Adrenergisten reseptorien määritykset, mukaan lukien lipolyysi- ja sitoutumismittaukset. In: AILHAUD G (toim.) Adipose Tissue Protocols. New Jersey: Humana Press. s. 129-140.
DODT C, LONNROTH P, WELLHONER JP, FEHM HL, ELAM M (2003) Valkoisen rasvakudoksen sympaattinen kontrolli laihoilla ja lihavilla ihmisillä. Acta Physiol Scand 177: 351-357.
DOLÉ VP, MEINERTZ H (1960) Pitkäketjuisten rasvahappojen mikromääritys plasmassa ja kudoksissa. J Biol Chem 235: 2595-2599.
GÓMEZ-AMBROSI J, CATALÁN V, DIEZ-CABALLERO A, MARTÍNEZ-CRUZ LA, GIL MJ, GARCÍA-FONCILLAS J, CIENFUEGOS JA, SALVADOR J, MATO JM, FRUHBECK G (2004) Geeniekspressioprofiili omentaalisessa rasvakudoksessa ihmisen lihavuudessa. FASEB J 18: 215-217.
IMBEAULT P, LEMIEUX S, PRUDHOMME D, TREMBLAY A, NADEAU A, DESPRES JP, MAURIEGE P (1999) Viskeraalisen rasvakudoksen suhde sepelvaltimotaudin metabolisiin riskitekijöihin: onko ihonalaisten rasvasolujen hypertrofialla merkitystä? Metabolism 48: 355-362.
JULIEN P, DESPRES JP, ÁNGEL A (1989) Scanning electrón microscopy of very small fat cells and mature fat cells in human obesity. J Lipid Res 30: 293-299.
KOZAK LP, JENSEN JT (1974) L-glyseroli-3-fosfaattidehydrogenaasin múltiple-muotojen geneettinen ja kehityskontrolli. J Biol Chem 249: 7775-7781.
LANGIN D, DICKER A, TAVERNIER G, HOFFSTEDT J, MAIRAL A, RYDEN M, ARNER E, SICARD C, JENKINS M, VIGUERIE N, VAN HARMELEN V, GROSS RW, HOLM C, ARNER P (2005) Adiposyyttiuppaasit ja lipolyysihäiriö ihmisen lihavuudessa. Diabetes 54: 3190-3197.
LARGE V, REYNISDOTTIR S, LANGIN D, FREDBY K, KLANNEMARK M, HOLM C, ARNER P (1999) Adiposyyttihormonille herkän Upasen vähentynyt ilmentyminen ja toiminta lihavien henkilöiden ihonalaisissa rasvasoluissa. J Lipid Res 40: 2059-2066.
LE LAY S, KRIEF S, FARNIER C, LEFRERE I, LE LIEPVRE X, BAZIN R, FERRÉ P, DUGAIL I (2001) Kolesteroli, solun koosta riippuvainen signaali, joka säätelee glukoosiaineenvaihduntaa ja geeniekspressiota rasvasoluissa. J Biol Chem 276: 16904-16910.
LE LAY S, FERRÉ P, DUGAIL I (2004) Adiposyyttien kolesterolitasapaino lihavuudessa. Biochem Soc Trans 32: 103-106.
MOUSTAID N, JONES BH, TAYLOR JW (1996) Insuliini lisää lipogeenisten entsyymien aktiivisuutta ihmisen adiposyyteissä primaariviljelyssä. J Nutr 126: 865-870.
NILSSON R, AHMAD F, SWARD K, ANDERSSON U, WESTON M, MANGANIELLO V, DEGERMAN E (2006) Plasmakalvon syklinen nukleotidifosfodiesteraasi 3B (PDE3B) liittyy kaveoleihin primaarisissa rasvasoluissa. Cell Signal 18: 1713-1721.
OLEFSKY JM (1977) Suurten rasvasolujen heikentyneen insuliinireaktiivisuuden mekanismit. Endocrinology 100: 1169-1177.
RODBELL M (1964) Eristettyjen rasvasolujen aineenvaihdunta. I. Hormonien vaikutukset glukoosiaineenvaihduntaan ja lipolyysiin. J Biol Chem 239: 375-380.
RUMBERGER JM, WU T, HERING MA, MARSHALL S (2003) Heksosamiinin biosynteesin rooli glukoosivälitteisessä lipogeenisten entsyymien mRNA-levéen ylössäätelyssä: glukoosin, glutamiinin ja glukosamiinin vaikutukset glyserofosfaattidehydrogenaasi-, rasvahapposyntaasi- ja asetyyli-CoA-karboksylaasi-mRNA-levéen. J Biol Chem 278: 28547-28552.
SALANS LB, DOUGHERTY JW (1971): Insuliinin vaikutus erikokoisten rasvasolujen glukoosiaineenvaihduntaan Solun rasva- ja proteiinipitoisuuden, iän ja ravitsemustilan vaikutus. J Clin Invest 50: 1399-1410.
SALANS LB, CUSHMAN SW, WEISMANN RE (1973) Tutkimukset ihmisen rasvakudoksesta. Rasvasolujen koko ja lukumäärä ei-lihavilla ja lihavilla potilailla. J Clin Invest 52: 929-941.
SALANS SB, BRAY GA, CUSHMAN SW, DANFORTH JR E, GLENNON JA, HORTON ES, SIMS EA (1974) Glukoosiaineenvaihdunta ja ihmisen rasvakudoksen insuliinivaste spontaanissa ja kokeellisessa lihavuudessa. Ruokavalion koostumuksen ja rasvasolujen koon vaikutukset. J Clin Invest 53: 848-856.
SMITH U (1971) Solujen koon vaikutus ihmisen rasvakudoksen lipidisynteesiin in vitro. J Lipid Res 12: 65-70.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, WEYER C, FOLEY JE, BOGARDUS C, TATARANNI PA, PRATLEY RE (2000) Enlarged subcutaneous abdominal adipocyte size, but not obesity itself, predicts type II diabetes independent of insulin resistance. Diabetologia 43: 1498-1506.
VAN HARMELEN V, SKURK T, ROHRIG K, LEE YM, HALBLEIB M, APRATH-HUSMANN I, HAUNER H (2003) BMI:n ja iän vaikutus rasvakudoksen soluihin ja erilaistumiskykyyn naisilla. Int J Obes Relat Metab Disord 27: 889-895.
YANG X, JANSSON PA, NAGAEV I, JACK MM, CARVALHO E, SUNNERHAGEN KS, CAM MC, CUSHMAN SW, SMITH U (2004) Evidence of impaired adipogenesis in insulin resistance. Biochem Biophys Res Commun 317: 1045-1051.