Introduction
Thalassemia on Kaakkois-Aasian yleisin perinnöllinen verisairaus, ja se johtuu hemoglobiinin (Hb) globiiniketjujen vähentyneestä tai puuttuvasta synteesistä, joka johtaa globiiniketjujen epätasapainoon.1,2 Beeta-talassemia on yksi tärkeimmistä talassemiatyypeistä, ja sen aiheuttaa mutaatio kromosomissa 11 olevassa beeta-globiinigeenissä (HBB). Beeta-taalassemian kliininen ja hematologinen kirjo vaihtelee hiljaisesta kantajuudesta kliinisesti ilmeneviin tiloihin, kuten vaikeaan verensiirroista riippuvaiseen beeta-taalassemia majoriin ja beeta-taalassemia intermediaan (TI).3,4 Thaimaassa sekä beeta-taalassemia että hemoglobiini E (HbE) ovat yleisimpiä muotoja, joita esiintyy kaikilla alueilla, erityisesti Koillis-Thaimaassa. Suurin osa vakavasta beta-taalassemiasta on seurausta beta-taalassemian ja HbE:n yhteisvaikutuksesta.5,6
Talassemian molekyyliperustaa on tutkittu maailmanlaajuisesti. Yli 300 erilaista beeta-globiinigeenin mutaatiota on luonnehdittu. Suurin osa beetatalassemian mutaatioista johtuu pistemutaatioista, pienistä deletoinneista tai insertioista koodaavilla alueilla ja eksonin ja intronin yhtymäkohdissa. Mutaatiotyypit ovat tyypillisesti etnisesti spesifisiä.7-9 Thaimaassa beetatalassemian kantajien esiintyvyys vaihtelee 3-9 prosentin välillä.10 Tähän mennessä on tunnistettu yli 30 erilaista mutaatiota.11-13 Mutaatioiden heterogeenisuus vaikeuttaa mutaation tunnistamista joillakin beetatalassemiapotilailla. Erilaisia DNA-analyysitekniikoita, kuten dot blot -analyysi, käänteinen dot blot -analyysi, alleelispesifinen amplifikaatio käyttäen amplifikaatiorefraktääristä mutaatiojärjestelmää (amplification refractory mutation system, ARMS) tai suora DNA:n sekvensointi, on käytetty laajalti beetaglobiinigeenin mutaatioiden tunnistamiseen14.-17
Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli karakterisoida beetaglobiinigeenin mutaatiot 80:llä lapsipotilaalla, jotka kantavat beetatalassemiamutaatioita ja joita seurattiin Phramongkutklaon sairaalassa, joka on tertiäärikeskus talassemiapotilaille kaikilta alueilta, erityisesti Keski-Thaimaasta.
Potilaat ja menetelmät
Potilaiden valinta
Tutkimukseemme otettiin kahdeksankymmentä toisiinsa liittymätöntä beta-taalassemiapotilasta, jotka kävivät tammikuun 2013 ja joulukuun 2013 välisenä aikana lastentautien osaston hematologian klinikalla Phramongkutklao Hospitalissa Bangkokissa Thaimaassa. Tutkimusprotokolla hyväksyttiin Phramongkutklaon sairaalan, Phramongkutklaon lääketieteellisen korkeakoulun, Thaimaa, institutionaalisessa tarkastuslautakunnassa. Kuusikymmentäviisi potilasta sairasti kliinisesti ilmenevää beta-taalassemiaa, joista 57:llä oli beta-taalassemia/HbE ja kahdeksalla homotsygoottinen tai yhdistelmäheterotsygoottinen beta-taalassemia. Viidellätoista potilaalla oli heterotsygoottinen beta-taalassemia. Kaikki potilaat diagnosoitiin enintään 18-vuotiaina. Potilaat, joilla oli homotsygoottinen beta-taalassemia ja beta-taalassemia/HbE, luokiteltiin kliinisesti vaikeaan verensiirroista riippuvaiseen thalassemia majoriin ja lievään TI:hen sellaisten kriteerien perusteella, kuten ikä esittelyhetkellä, keskimääräinen Hb-pitoisuus vakaassa tilassa ja verensiirtojen tiheyshistoria, kuten aiemmin on kuvattu.18
Mutaatioanalyysi
Tietoon perustuvan suostumuksen hankkimisen jälkeen kerättiin kaikilta potilailta kaikkiaan 80 perifeerisestä verestä peräisin olevan etyleenidiamiinitetrasetikkahapon (EDTA) näytettä. Genominen DNA uutettiin perifeerisen veren lymfosyyteistä AxyPrep™-veren genomisen DNA:n miniprep-kitillä valmistajan protokollan mukaisesti. Beetaglobiinigeenin mutaatiot karakterisoitiin ensin käyttämällä kahta alleelispesifistä polymeraasiketjureaktiota (PCR) tai multiplex amplification refractory mutation system (M-ARMS) -järjestelmää seitsemän yleisen mutaation havaitsemiseksi kiinalaisissa ja kaakkoisaasialaisissa populaatioissa, mukaan lukien kodoni 41/42 (-TCTT), koodoni 17 (A>T), nukleotidi -28 (A>G), IVS-II-654 (C>T), koodoni 71/72 (+A), IVS-I-1 (G>T) ja IVS-I-5 (G>C) aiemmin kuvatulla tavalla.15,17 Näiden mutaatioiden on todettu aiheuttavan 80-90 % beetatalassemian alleeleista tällä alueella19,20. Tuntemattomat beta-taalassemiageenit karakterisoitiin edelleen suoralla DNA-sekvensoinnilla kaikista koodaavista alueista ja eksoni-intronirajoista harvinaisten pistemutaatioiden ja pienten uudelleenjärjestelyjen havaitsemiseksi beta-globiinigeenissä aiemmin muualla kuvattujen protokollien mukaisesti.16 Edellä mainituilla M-ARMS- ja DNA-sekvensointimenetelmillä määrittelemättömiksi jääneet beetatalassemia-alleelit seulottiin sen jälkeen gap-PCR:llä koko beetaglobiinigeenin 3,4 kb:n deletion havaitsemiseksi, mikä on aiemmin raportoitu thaimaalaisissa väestöissä.21
Tulokset
Tutkimukseemme otettiin mukaan yhteensä 88 beta-taalassemia-alleelia kahdeksalta homotsygoottiselta tai yhdistelmäheterotsygoottiselta beta-taalassemiapotilaalta, 57:ltä beta-taalassemia/HbE-potilaalta ja 15:ltä heterotsygoottiselta beta-taalassemiapotilaalta. Kaikki 80 tutkittavaa olivat sukuun kuulumattomista perheistä, ja 93,8 prosenttia (75/80) tutkittavista asui Bangkokissa ja muissa Keski-Thaimaan maakunnissa. Näistä 65 potilaasta, joilla oli kliinisesti ilmennyt beetatalassemia, 92,3 %:lla (60/65) oli beetatalassemia major ja 7,7 %:lla (5/65) TI. Näistä 60:stä beta-taalassemia major -potilaasta 86,7 %:lla (52/60) oli beta-taalassemia/HbE, kun taas vain 13,3 %:lla (8/60) potilaista oli homotsygoottinen tai yhdistetty heterotsygoottinen beta-taalassemia. Vaihtoehtoisesti kaikilla potilailla, joilla oli homotsygoottinen tai yhdistelmäheterotsygoottinen beta-taalassemia, ja 91,2 prosentilla (52/57) tämän tutkimuksen beta-taalassemia/HbE-potilaista oli vaikea verensiirroista riippuvainen beta-taalassemia major. Beeta-taalassemia major -potilaiden genotyypin osalta yleisin genotyyppi oli koodoni 41/42 (-TCTT)/koodoni 26 (G>A) tai beetaE (40 %), ja toiseksi yleisin oli koodoni 17 (A>T)/beetaE (18 %).3 % kaikista beetatalassemia major -genotyypeistä (taulukko 1 ja kuva 1).
  |
Taulukko 1 Genotyyppi 65:llä kliinisesti ilmenevällä beetatalassemiapotilaalla |
 |
Kuvio 1 Genotyypin tyyppi beeta-taalassemiapotilailla. |
Voidaksemme selvittää näiden 88 beta-taalassemian alleelin molekulaarisen perustan, luonnehdimme ensin kunkin potilaan DNA:ta kahdella M-ARMS-sarjalla. Tällä menetelmällä tunnistettiin 75 alleelia (85,2 %), joista 33 alleelia (37,5 %) koodonin 41/42 (-TCTT), 23 alleelia (26.1 %) koodonissa 17 (A>T), seitsemän alleelia (8 %) IVS-I-5:ssä (G>C), kuusi alleelia (6,8 %) IVS-II-654:ssä (C>T), neljä alleelia (4,5 %) IVS-I-1:ssä (G>T) ja kaksi alleelia (2,3 %) koodonissa 71/72 (+A-alkuisia) (taulukko 2). Mielenkiintoista on, että tutkimuksessamme ei tunnistettu nukleotidia -28 (A>G). Kummassakaan 13 alleelissa (14,8 %) ei havaittu beetatalassemiamutaatiota. Näin ollen beetaglobiinigeenin kaikkien kolmen koodaavan eksonin ja niitä reunustavien eksoni-introni-kytkentöjen suora DNA-sekvensointi oli seuraava askel näiden 13 alleelin karakterisoimiseksi. Yhdeksässä alleelissa (10,2 %) havaittiin kuusi harvinaista mutaatiota, joista neljässä alleelissa (4,5 %) koodoni 35 (C>A) ja yhdessä alleelissa (1,1 %) aloituskoodonin mutaatio (ATG>AGG), koodonissa 15 (G>A), koodonissa 19 (A>G), koodonissa 27/28 (+C) ja koodonissa 123/124/125 (-ACCCCACCC) (kuva 2). Jäljelle jääneet alleelit, jotka eivät olleet karakterisoituja M-ARMS:n ja DNA-sekvensoinnin avulla, tunnistettiin edelleen gap-PCR:llä 3,4 kb:n deletion havaitsemiseksi, ja tämä deletio löytyi kaikista neljästä jäljelle jääneestä alleelista (4,5 %).
 |
Taulukko 2 Beeta-taalassemian mutaatioiden frekvenssi 88:lla alleelilla |
 |
Kuva 2 Kuusi harvinaista mutaatiota, jotka tunnistettiin suoralla DNA-sekvensoinnilla. |
Kaiken kaikkiaan 100 prosenttia 88 beta-taalassemian alleelistamme karakterisoitiin näiden tekniikoiden yhdistelmällä, johon sisältyi kaksi M-ARMS-sarjaa, suora DNA:n sekvensointi ja 3,4 kb:n deletion havaitsemisen aukko-PCR. BetaE-globiinigeeniä lukuun ottamatta tässä tutkimuksessa havaittiin 13 erilaista beta-taalassemiamutaatiota. 4 bp:n deletio (-TCTT) koodoneissa 41/42 oli yleisin tutkimuksessamme havaittu mutaatio, ja sen osuus alleeleista oli 37,5 prosenttia. Kodoni 17 (A>T) oli toiseksi yleisin, ja sen osuus alleeleista oli 26,1 %. Yhdessä nämä kaksi yleistä mutaatiota muodostivat yli puolet (63,6 %) sairastuneista alleeleista. Kaikki muut yleiset mutaatiot paitsi nukleotidi -28 (A>G) muodostivat 21,6 % alleeleista.
Keskustelu
Tämä tutkimus antoi hyödyllistä tietoa beetatalassemian mutaatioiden frekvenssijakaumasta lapsipotilaiden keskuudessa erityisesti Keski-Thaimaassa, koska yli 90 % potilaista asui Bangkokissa ja muissa tämän alueen maakunnissa. Kaiken kaikkiaan 92 %:lla lapsista, joilla oli kliinisesti ilmennyt beetatalassemia, oli beetatalassemia major -fenotyyppi, ja yli 85 %:lla pediatrisista potilaista, joilla oli beetatalassemia major, oli yhdistelmäheterotsygootti beetatalassemia ja HbE, joka on Thaimaassa erittäin yleinen.5,6,8,10 BeetaE-globiinigeenin frekvenssiä ei otettu mukaan beta-taalassemian mutaatiofrekvenssin analyysiin, koska HbE voidaan helposti havaita Hb-elektroforeesilla.
Monella eri menetelmällä voidaan määrittää beta-taalassemian mutaatiot.14-17 Tässä tutkimuksessa kävi ilmi, että M-ARMS havaitsi seitsemän yleistä mutaatiota kiinalaisissa ja kaakkoisaasialaisissa populaatioissa ja pystyi havaitsemaan 85,2 % alleeleista, kuten aiemmissa raporteissa.19,20 Koska M-ARMS pystyy havaitsemaan vain tietyn joukon mutaatioita, jotka ovat spesifisiä käytetyille alukkeille, suora DNA:n sekvensointi on seuraava vaihe erilaisten pistemutaatioiden ja pienten uudelleenjärjestelyjen havaitsemiseksi beeta-globiinigeenissä. Kuusi harvinaisempaa mutaatiota tunnistettiin 10,2 prosentissa alleeleista. DNA-sekvensoinnin haittapuolena on, että geenin suuria deleetioita ei voida havaita. Näin ollen gap-PCR on viimeinen vaihe 3,4 kb:n deletion havaitsemiseksi, mikä on aiemmin raportoitu thaimaalaisissa populaatioissa.21 Näiden tekniikoiden yhdistelmällä pystyttiin tunnistamaan beetatalassemian mutaatiot kaikista 88 alleelista (100 %) tutkimuksessamme mukana olleilla lapsipotilailla.
BetaE-globiinigeeniä lukuun ottamatta 80:llä sukuun liittymättömällä potilaalla havaittiin 13 erilaista beetatalassemian mutaatiota. Kaksi yleisintä havaittua mutaatiota olivat kodoni 41/42 (-TCTT) ja kodoni 17 (A>T), joiden osuus oli 37,5 % ja 26,1 % sairastuneista alleeleista. Kaikkien muiden M-ARMS-menetelmällä havaittujen yleisten mutaatioiden osuus oli 21,6 prosenttia alleeleista. Verrattaessa aiempaan tutkimukseen beetatalassemian mutaatioista Thaimaassa tämä paljasti, että tutkimuksessamme havaittujen beetaglobiinigeenin mutaatioiden esiintymistiheys oli erilainen. Ensinnäkin nukleotidia -28 (A>G) ei tunnistettu tutkimuksessamme. Nukleotidi -28 (A>G) on beeta+-talassemian mutaatio, joka aiheuttaa lievän beeta-talassemian fenotyypin; näin ollen tämä mutaatio on havaittu vain TI-potilailla.22 Tämä nykyinen tutkimus osoitti, että TI oli vähemmistöryhmä (alle 10 %) niiden lapsipotilaiden joukossa, joilla oli oireinen beeta-talassemia. Tämä saattaa selittää, miksi tätä mutaatiota ei havaittu tutkimuksessamme. Toiseksi muiden yleisten mutaatioiden, kuten koodonin 41/42 (-TCTT), koodonin 17 (A>T), IVS-II-654 (C>T), koodonin 71/72 (+A), IVS-I-1 (G>T) ja IVS-I-5 (G>C), esiintymistiheys tutkimuksessamme oli samankaltainen kuin muissa Keski-Thaimaassa tehdyissä tutkimuksissa8,10 . Kodoni 41/42 (-TCTT) oli yleisin mutaatio, joka tunnistettiin väestössämme, joka asui pääasiassa Keski-Thaimaassa. Tämä frameshift-mutaatio on myös yleisin mutaatio, joka havaittiin muualla Thaimaassa, Kiinan kansantasavallassa ja Kaakkois-Aasiassa.20 Koodoni 17 (A>T) oli toiseksi yleisin mutatoitunut alleeli Keski-, Pohjois- ja Koillis-Thaimaassa, ja IVS-I-5 (G>C) oli toiseksi yleisin Etelä-Thaimaassa.23 IVS-I-5 (G>C) raportoitiin aiemmin yleisimmäksi mutaatioksi thaimaalaisilla muslimisukupuolisilla potilailla Thaimaan eteläosissa.24 Lisäksi tässä tutkimuksessa koodonin 71/72 (+A) osuus oli 2,3 %, kun taas Pohjois-Thaimaassa16 tämän mutaation osuus oli 6 % ja Koillis-Thaimaassa13 13,1 %, mikä viittaa tämän mutaation suurempaan esiintyvyyteen tällä alueella.
Suoralla DNA-sekvensoinnilla tunnistettiin kuusi harvinaista mutaatiota, mukaan lukien kodoni 35 (C>A), kodoni 15 (G>A), kodoni 19 (A>G) tai Hb Malay, kodoni 27/28 (+C), aloituskodonin mutaatio (ATG>AGG) ja kodoni 123/124/125 (-ACCCCACC). Vaikka uutta mutaatiota ei havaittu, tutkimuksessamme löydettiin kaksi Thaimaassa harvinaista mutaatiota, aloituskodonimutaatio ja 8 bp:n deletio eksonissa 3. Aloituskodonimutaatio (ATG>AGG) kuvattiin ensimmäisen kerran kiinalaisella beetatalassemiapotilaalla vuonna 1990.25 Thaimaassa tämä mutaatio on raportoitu kerran vuonna 2005 kahdella sisaruksella, joilla oli beetatalassemia/HbE.26 . Vaikka tämä mutaatio vaikuttaa vakavasti beeta-globiiniketjun synteesiin ja aiheuttaa todennäköisesti beeta0-talassemian fenotyypin, kaikilla kolmella raportoidulla potilaalla oli lievä fenotyyppi, mikä voidaan selittää yhteisperinnöllisyydellä heterotsygoottisen 3,7 kb:n deletion alfa-talassemia-2 -genotyypin kanssa kiinalaisella potilaalla ja yhteydellä C>T-polymorfismiin gammaglobiinigeenin -158(G)-osassa kahdessa thaimaalaisessa sisaruksessa. Potilaamme fenotyyppi oli verensiirroista riippuvainen beetatalassemia major, joka diagnosoitiin 9 kuukauden iässä, kun taas genotyyppi oli yhdistelmäheterotsygootti koodonin 41/42 (-TCTT) ja aloituskoodonin mutaation välillä. Molemmat mutatoituneet alleelit aiheuttavat beeta0-talassemian fenotyypin. Kahdeksan emäksen deletio eksonissa 3 tai kodonissa 123/124/125 (-ACCCCACCC) karakterisoitiin ensimmäisen kerran koillis-thaimaalaisilla lapsilla, joilla oli vakava beetatalassemia/HbE-fenotyyppi.27 Tämä deletio johtaa 135 aminohapon beetaX-ketjun synteesiin (beeta-Khon Kaen), joka on erittäin epästabiili ja hajoaa pian translaation jälkeen. Aminohappojen laaja muutos kodonien 123-131 kohdalla aiheutti dominoivia inkluusiokehon beetatalassemiapiirteitä, kuten potilaallamme.
Betatalassemia/HbE on merkittävä talassemiaongelma Thaimaassa, ja siihen voi liittyä erilaisia kliinisiä fenotyyppejä, jotka vaihtelevat lievästä thalassemia intermediasta vaikeaan verensiirroista riippuvaiseen thalassemia majoriin.5,6,8,8,10 Tutkimuksessamme 85 prosentilla beetatalassemia major -potilaista ja 100 prosentilla TI-potilaista oli yhdistetty heterotsygoottinen beetatalassemia ja HbE. Beetatalassemia majorissa yleisin tavattu genotyyppi oli kodoni 41/42 (-TCTT)/betaE (40 %), jota seurasivat kodoni 17 (A>T)/betaE (18,3 %), IVS-I-5 (G>C)/betaE (8,3 %) ja IVS-II-654 (C>T)/betaE (8,3 %), jotka muodostivat 75 prosenttia kaikista havaituista genotyypeistä. Lukuun ottamatta beetaE-talassemiamutaatiota kaikki oireisten potilaidemme beeta-talassemiamutaatiot luokiteltiin beeta0-mutaatioiksi lukuun ottamatta kodonia 19 (A>G) tai Hb Malayta, joka luokiteltiin beeta+-mutaatioksi ja joka tunnistettiin vain yhdellä potilaalla.28
Huomiota herättävää on se, että potilaallamme, jolla oli kodonia 19 (A>G)/beetaE, oli lievän TI:n sijasta verensiirroista riippuvainen thalassemian major-manifesti. Toisaalta yhdistelmäheterotsygooteilla, joilla oli neljä beeta0-mutaatiota, mukaan lukien koodoni 41/42 (-TCTT), koodoni 17 (A>T), 3,4 kb:n deletio, IVSI-1 (G>T) ja beetaE-genotyyppi, ilmeni TI:tä beetatalassemia major -fenotyypin sijasta. Tämä ilmiö voidaan selittää useilla geneettisillä ja ei-geneettisillä tekijöillä, joilla voi olla merkitystä taudin vaihtelevuuden määräytymisessä.5,22,29,30 Tutkimuksessamme ei kuitenkaan suoritettu ylimääräistä geneettistä analyysia (geneettiset modifioijat).
Esi-implantaatiota edeltävän geneettisen diagnostiikan konseptina on mahdollistaa alkioiden siirto kohtuun avusteisessa lisääntymisessä. Tämä tekniikka on nopea ja soveltuu ei-invasiiviseksi kliiniseksi välineeksi geneettisten häiriöiden tunnistamiseen valikoivien keskenmenojen, kuten talassemia majorin, vähentämiseksi.31,32 Tutkimuksemme osoitti, että erilaisia beeta-taalassemian mutaatioita saatetaan kliinisesti soveltaa preimplantaatiogenetiikkaprotokollassa, mikä mahdollistaa molekyyligeneettisen analyysin, jonka avulla voidaan amplifioida beeta-globiinigeenin tiettyä aluetta pariskunnalle.
Johtopäätöksinämme voidaan todeta, että käsillä olevasta tutkimuksesta käy ilmi beeta-taalassemiaa thaimaalaisilla lapsilla aiheuttavien molekulaaristen virheiden heterogeenisuus. Kaikki beeta-taalassemian alleelit on luonnehdittu yhdistelmällä tekniikoita, mukaan lukien M-ARMS, suora DNA-sekvensointi ja gap-PCR 3,4 kb:n deletion havaitsemiseksi. Kolmetoista mutaatiota muodosti 100 prosenttia tutkimuksemme beta-taalassemiageeneistä. Saadun frekvenssin pitäisi edustaa beeta-globiinigeenin mutaatioiden frekvenssiä pediatristen potilaiden keskuudessa, jotka asuivat pääasiassa Keski-Thaimaassa.
Kiitos
Tämä tutkimus hyväksyttiin Phramongkutklaon lääketieteellisessä korkeakoulussa, ja se sai rahoitusta.
Paljastukset
Tekijät eivät ilmoita eturistiriitoja tässä työssä.
|
Weatherall DJ. Talassemiaoireyhtymät. Tex Rep Biol Med. 1980;40:323-333. |
|
|
Vichinsky EP. Talassemian muuttuvat mallit maailmanlaajuisesti. Ann N Y Acad Sci. 2005;1054:18-24. |
|
|
Cao A, Galanello R. Beta-taalassemia. Genet Med. 2010;12(2):61-76. |
|
|
Rund D, Rachmilewitz E. Beta-talassemia. N Engl J Med. 2005; 353(11):1135-1146. |
|
|
Fucharoen S, Winichagoon P. Hemoglobinopathies in southeast Asia. Indian J Med Res. 2011;134:498-506. |
|
|
Fucharoen S, Ketvichit P, Pootrakul P, Siritanaratkul N, Piankijagum A, Wasi P. Beta-talassemian/hemoglobiini E -taudin kliininen ilmeneminen. J Pediatr Hematol Oncol. 2000;22(6):552-557. |
|
|
Akhavan-Niaki H, Derakhshandeh-Peykar P, Banihashemi A, et al. A comprehensive molecular characterization of beta thalassemia in a very heterogeneous population. Blood Cells Mol Dis. 2011;47(1):29-32. |
|
|
Fucharoen S, Winichagoon P. Hemoglobinopathies in Southeast Asia: molecular biology and clinical medicine. Hemoglobiini. 1997;21(4): 299-319. |
|
|
Giardine B, van Baal S, Kaimakis P, et al. HbVar database of human hemoglobin variants and thalassemia mutations: 2007 update. Hum Mutat. 2007;28(2):206. |
|
|
Wasi P, Pootrakul S, Pootrakul P, Pravatmuang P, Winichagoon P, Fucharoen S. Thalassemia in Thailand. Ann N Y Acad Sci. 1980;344: 352-363. |
|
|
Fukumaki Y, Fucharoen S, Fucharoen G, et al. Molecular heterogeneity of beta-thalassemia in Thailand. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1992;23 Suppl 2:14-21. |
|
|
Thein SL, Winichagoon P, Hesketh C, et al. The molecular basis of beta-thalassemia in Thailand: application to prenatal diagnosis. Am J Hum Genet. 1990;47(3):369-375. |
|
|
Fucharoen S, Fucharoen G, Sriroongrueng W, et al. Molecular basis of beta-thalassemia in Thailand: analysis of beta-thalassemia mutations using the polymerase chain reaction. Hum Genet. 1989;84(1):41-46. |
|
|
Mirasena S, Shimbhu D, Sanguansermsri M, Sanguansermsri T. Beta-taalassemian mutaatioiden havaitseminen käyttäen multiplex-amplifikaatiorefraktaatiomutaatiojärjestelmän määritystä. Hemoglobiini. 2008;32(4):403-409. |
|
|
Bhardwaj U, Zhang YH, Lorey F, McCabe LL, McCabe ER. Molekyyligeneettinen varmistustestaus vastasyntyneiden seulontanäytteistä tavallisten afroamerikkalaisten, aasialais-intiaanien, kaakkoisaasialaisten ja kiinalaisten beetatalassemiamutaatioiden osalta. Am J Hematol. 2005;78(4):249-255. |
|
|
Sirichotiyakul S, Saetung R, Sanguansermsri T. Analyysi beeta-taalassemiamutaatioista Pohjois-Thaimaassa käyttäen automatisoitua fluoresenssi-DNA-sekvensointitekniikkaa. Hemoglobin. 2003;27(2): 89-95. |
|
|
Fucharoen S, Fucharoen G, Ratanasiri T, Jetsrisuparb A, Fukumaki Y. Yksinkertainen ei-radioaktiivinen menetelmä beeta-talassemian/hbe-taudin havaitsemiseksi: sovellus prenataalidiagnostiikkaan. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1995;26 Suppl 1:278-281. |
|
|
Ho PJ, Hall GW, Luo LY, Weatherall DJ, Thein SL. Beeta-talassaemia intermedia: voiko fenotyyppiä ennustaa johdonmukaisesti genotyypin perusteella? Br J Haematol. 1998;100(1):70-78. |
|
|
Old JM, Khan SN, Verma I, et al. Monikeskustutkimus beeta-taalassemian molekyyliperustan tarkemmaksi määrittelemiseksi Thaimaassa, Pakistanissa, Sri Lankassa, Mauritiuksella, Syyriassa ja Intiassa sekä yksinkertaisen molekyylidiagnostiikkastrategian laatimiseksi amplifikaatiovastuksellisen mutaatiojärjestelmän polymeraasiketjureaktiolla. Hemoglobin. 2001;25(4):397-407. |
|
|
Kazazazian HH Jr, Dowling CE, Waber PG, Huang S, Lo WH. Beeta-taalassemiageenien kirjo Kiinassa ja Kaakkois-Aasiassa. Blood. 1986;68(4):964-966. |
|
|
Sanguansermsri T, Pape M, Laig M, Hundrieser J, Flatz G. Beta zero-thalassemia thaimaalaisessa perheessä johtuu 3,4 kb:n deletiosta, joka sisältää koko beeta-globiinigeenin. Hemoglobin. 1990;14(2):157-168. |
|
|
Nuntakarn L, Fucharoen S, Fucharoen G, Sanchaisuriya K, Jetsrisuparb A, Wiangnon S. Molekulaarisia, hematologisia ja kliinisiä näkökohtia Hb E-beta-galassemiaan liittyvästä thalassemia majorista ja thalassemia intermediasta Koillis-Thaimaassa. Blood Cells Mol Dis. 2009;42(1):32-35. |
|
|
Nopparatana C, Panich V, Saechan V, et al. The spectrum of beta-thalassemia mutations in southern Thailand. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1995;26 Suppl 1:229-234. |
|
|
Laosombat V, Nopparatana C, Wongchanchailert M, Wiriyasateinkul A. Molekulaarinen perusta beeta-taalassemian esiintymiselle thaimaalaisilla muslimipotilailla Etelä-Thaimaassa. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1997; 28 Suppl 3:104-105. |
|
|
Lam VM, Xie SS, Tam JW, Woo YK, Gu YL, Li AM. Uusi yksittäinen nukleotidimuutos initiaatiokodonissa (ATG—-AGG), joka tunnistettiin kiinalaisen beetatalassemiasta kärsivän potilaan monistetun genomisen DNA:n yhteydessä. Blood. 1990;75(5):1207-1208. |
|
|
Viprakasit V, Chinchang W, Suwanthol L, Tanphaichitr VS. Harvinaisen beeta-globiinin aloituskodonimutaation (ATG–>AGG) yleinen alkuperä aasialaisilla. Clin Lab Haematol. Dec 2005;27(6):409-415. |
|
|
Fucharoen G, Fuchareon S, Jetsrisuparb A, Fukumaki Y. Kahdeksan emäksen deleetio beeta-globiinigeenin eksonissa 3 tuotti uuden muunnoksen (beta khon kaen), johon liittyy inkluusiokehon beeta-talassemia-piirre. Blood. 1991;78(2):537-539. |
|
|
Yang KG, Kutlar F, George E, ym. molekulaarinen karakterisointi beetaglobiinigeenin mutaatioista malaijilaisilla potilailla, joilla on Hb E-beta-talassaemia ja talassaemia major. Br J Haematol. 1989;72(1):73-80. |
|
|
Olivieri NF, Pakbaz Z, Vichinsky E. HbE/beta-talassemia: merkittävän kliinisen monimuotoisuuden perusta. Hematol Oncol Clin North Am. 2010;24(6): 1055-1070. |
|
|
Rund D, Fucharoen S. Genetic modifiers in hemoglobinopathies. Cur Mol Med. 2008;8(7):600-608. |
|
|
Nasri NW, Jamal AR, Abdullah NC, Razi ZR, Mokhtar NM. Preimplantaatiogeneettinen diagnoosi beeta-taalassemian varalta käyttämällä yhden solun DNA-analyysiä beeta-globiinigeenin koodoneista 17 ja 26. Arch Med Res. 2009;40(1):1-9. |
|
|
Hung CC, Chen SU, Lin SY, et al. Preimplantation genetic diagnosis of beta-thalassemia using real-time polymerase chain reaction with fluorescence resonance energy transfer hybridization probes. Anal Biochem. 2010;400(1):69-77. |