Dies ist ein Präparat von Bacillus subtilis, gefärbt zum Nachweis von Endosporen. Nach 24 Stunden Wachstum auf Nährstoffagar bei 37 Grad Celsius wurden die Organismen von der Platte entfernt und in einem Tropfen Wasser auf einem Glasobjektträger suspendiert. Das Wasser ließ man an der Luft trocknen und fixierte dann die Bakterien auf dem Objektträger, indem man ihn 3-4 Mal durch die Flamme eines Bunsenbrenners führte. Der Objektträger wurde abkühlen gelassen. Die Endosporen wurden mit 5 % Malachitgrün angefärbt, indem der Objektträger mit der Färbelösung geflutet und eine Flamme unter den Objektträger gehalten wurde, bis die Färbelösung zu dampfen begann. Die erwärmte Malachitgrün-Lösung wurde 5 Minuten lang auf den Zellen belassen. Ein kontinuierliches Dämpfen (Erhitzen) des Objektträgers war nicht erforderlich. Der Objektträger wurde mit Leitungswasser abgespült, und die Zellen wurden 30 Sekunden lang mit 0,25 % Safranin O gegengefärbt (dieselbe Gegenfärbung, die bei der Gram-Reaktion verwendet wird). Wenn die Endosporen nach Abschluss des Färbeverfahrens nicht grün sind, kann es erforderlich sein, die Technik so zu ändern, dass sie eine kontinuierliche Bedampfung mit Malachitgrün für 5 Minuten beinhaltet. Die durchschnittliche Zellgröße betrug 3-5 Mikrometer.